Specsheet Template CE

Polyclonal Rabbit
Anti-HumanFibronectin
Numer katalogowy A 0245
Wydanie 01.12.02
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro
Poliklonalne królicze przeciwcialo przeciw ludzkiej fibronektynie, nr kat. A 0245, jest przeznaczone do
oznaczania fibronektyny (1) z użyciem różnych technik, jak immunohistochemiczne (2, 3, 4),
immunoprecypitacyjne w żelu, ELISA (5) i nefelometryczne (6). Interpretacja wyników musi być
przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych testów
diagnostycznych.
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja immunoglobulinowa króliczej przeciwsurowicy dostarczona w płynnej postaci, w 0.1 mol/L
NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka g/L: Zob. opis na fiolce. Rozcieńczenie przeciwciał: 2 100 mg/L (7).
Różnica w rozcieńczeniach między poszczególnymi seriami A0245 jest mniejsza niż 10%. Zostało to określone na
podstawie porównania rozcieńczeń poszczególnych serii z rozcieńczeniami przeciwciał referencyjnych,
przechowywanych w temp. -80 C.
Immunogen
Fibronektyna wyizolowana z normalnego ludzkiego osocza.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzką fibronektyną. Śladowe ilości przeciwciał zanieczyszczających usunięto przez
absorpcję na fazie stałej z białkami ludzkiego osocza.
Przeciwciało reaguje z ludzką fibronektyną.
Immunoelektoforeza krzyżowa: Kiedy użyto 12.5 L A 0245 na cm2 powierzchni żelu przeciw 2 L ludzkiego
osocza, uzyskano wyłącznie łuk precypitacyjny fibronektyny. Barwienie: Coomassie Brilliant Blue.
ELISA: Nie stwierdzono znamiennej reakcji w kanapkowej ELISA z użyciem A 0245 jako przeciwciał
wychwytujących, ludzkiego osocza pozbawionego fibronektyny jako próbki i związanego z peroksydazą króliczego
przeciwciała przeciw ludzkiej fibronektynie (Dako, nr kat. P 0246), dla uwidocznienia reakcji. W teście przeciwciała
wychwytujące i koniugat pochodziły z tego samego źródła przeciwciał.
Metodą immunoelektroforezy rakietkowej wykazano, że przeciwciało reaguje krzyżowo z odpowiednikami
fibronektyny kota, krowy, jelenia, psa, słonia, kozy, świnki morskiej, chomika, kury, konia, norki, małpy, myszy,
piżmowoła, tchórza, szopa, szczura, foki, owcy, świni i hieny (8).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
4. Produkt może być używany w różnych technikach i w kombinacji z różnymi typami próbek i materiałów,
dlatego poszczególne laboratoria powinny określić system zastosowania.
Przechowywanie
Przechowywać temp.2-80C. Nie używać po upłynięciu daty ważności określonej na probówce. Jeżeli
przeciwciała są przechowywane w warunkach innych niż wymienione, ich jakość musi zostać zweryfikowana
przez użytkownika. Nie oznacza to niestabilności produktu. Jednak, równocześnie z materiałem pochodzącym
od chorego, powinny być wykonane kontrole. W przypadku wystąpienia nieoczekiwanych wyników barwienia,
które nie mogą być wytłumaczone wariantami procedur laboratoryjnych oraz w przypadku podejrzenia
problemów z przeciwciałem, prosimy o kontakt z naszym serwisem technicznym.
IMMUNOCYTOCHEMIA
Opracowanie próbki
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania skrawków tkankowych utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie. Zalecane jest wstępne opracowanie tkanek z zastosowaniem proteinazy K
lub, dla odzyskania epitopów, cieplne opracowanie tkanki. W przypadku cieplnego odzyskiwania epitopów,
optymalne wyniki są uzyskiwane z zastosowaniem Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700 lub Dako
Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się z 10 mmol/L buforem
cytrynianowym, pH 6.0 lub 10 mmol/L Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Skrawki tkankowe nie powinny wysychać
w czasie postępowania lub w czasie kolejnych etapów procedury immunocytochemicznej.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Poliklonalne królicze przeciwciało przeciw ludzkiej fibronektynie, nr kat. A 0245, może być
używane w zakresie rozcieńczeń od 1:400 do 1:800 kiedy jest używane do utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie skrawków ludzkiego migdałka z zastosowaniem 5-minutowej procedury odzyskiwania
epitopów przy pomocy proteinazy K i 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwotnymi
przeciwciałami. Optymalne rozcieńczenia mogą się różnić w zależności do próbki i metody barwienia. Powinny
być określone przez poszczególne laboratoria. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Rabbit Immunoglobulin
Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X 0936, rozcieńczona do stężenia białka odpowiadającego pierwotnym
przeciwciałom. Jeśli nie stwierdzono stabilnośi bieżącego systemu testującego, zaleca się rozcieńczanie produktu
bezpośrednio przed użyciem lub z zastosowaniem Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
(111610-002)
A 0245/PL/MER/01.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Uwidacznianie produktu reakcji: Zalecane są DAKO LSAB™+/HRP kit, nr kat. K 0679 i DAKO
EnVision™+/HRP kits, numery kat. K 4008 and K 4010. Procedurę barwienia należy przeprowadzić zgodnie z
instrukcją dołączoną do zestawu wizualizacyjnego.
IMMUNOPRECYPITACJA ŻELOWA
Zalecane rozcieńczenia
Immunoelektroforeza rakietkowa: Przeciwciało: 0.5 L na cm2 powierzchni żelu. Standard: Pula świeżego
ludzkiego osocza, 1+3 1+5 1+10 1+20. Rozcieńczenie próbki: 1+5. Objętość standardu i próbki: 5 L.
ELISA
Zalecane rozcieńczenia
Dla kanapkowej ELISA z dwoma przeciwciałami, postępować wg. Dako "General ELISA Procedure" (nr 30 023).
1.
Przciwciała wychwytujące: Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human Fibronectin, nr kat. A 0245, rozcieńczone do
stężenia białka 10 mg/L.
2.
Standard:: pula świeżego ludzkiego osocza rozcieńczonego 1:300 to 1:5 000. Rozcieńczenie próbki badanej:
1:1 200.
3.
Przeciwciała wykrywające: Dako Peroxidase-Conjugated Polyclonal Rabbit Anti-Human Fibronectin, nr kat.
P 0246, zalecane rozcienczenie 1:4 000 -1:8 000.
Jeśli stwierdzono stabilność bieżącego systemu testującego, zaleca się rozcieńczanie produktu bezpośrednio
przed użyciem
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Clemmensen I. Significance of plasma fibronectin. Haematologia 1984;17:101-6.
D' Ardenne AJ, Kirkpatrick P, Wells CA, Davies JD. Laminin and fibronectin in adenoid cystic carcinoma.
J Clin Pathol 1986;39:138-44.
Kirkpatrick P, D' Ardenne AJ. Effects of fixation and enzymatic digestion on the immunohistochemical
demonstration of laminin and fibronectin in paraffin embedded tissue. J Clin Pathol 1984;37:639-44.
Christensen L. Fibronectin: A discrimination marker between small invasive carcinomas and benign
proliferative lesions of the breast. APMIS 1990;98:615-23.
Christiansen BS, Ingerslev J, Heickendorff L, Petersen CM. Human hepatocytes in culture synthesize and
secrete fibronectin. Scand J Clin Lab Invest 1988;48:685-90.
van Helden WCH, Kok-Verspuy A, Harff GA, van Kamp GJ. Rate-nephelometric determination of fibronectin
in plasma. Clin Chem 1985;31:1182-4.
Becker W. Determination of antisera titres using the single radial immunodiffusion method. Immunochem
1969;6:539-46.
Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen HJ, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum
proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7.
Objaśnienia symboli
(111610-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0245/PL/MER/01.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17