II. Sterylizacja i dezynfekcja – część I
Transkrypt
II. Sterylizacja i dezynfekcja – część I
II. Sterylizacja i dezynfekcja – część I - praktyczna Ćwiczenie1. Wyjaławianie ezy bakteriologicznej. Za pomocą zapalarki zapalić palnik. Ezę bakteriologiczną trzymać za koniec obsadki i wprowadzić pod kątem 450 w płomień palnika. Ezę opalać do momentu, kiedy cały drucik będzie czerwony. Poczekać aż eza wystygnie. Ćwiczenie 2. Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji parą wodną w autoklawie. Oceny dokonuje się za pomocą specjalnych krążków nasyconych zawiesiną zarodników określonego szczepu laseczek z rodzaju Bacillus (tzw. sporali A). Zarodniki te zdolne są do przejścia w formę wegetatywną. Ponadto posiadają ściśle oznaczoną i powtarzalną charakterystykę przeżywania w warunkach sterylizacji parą wodną pod zwiększonym ciśnieniem. 1. Z opakowań wyjąć torebki papierowe z krążkami Sporal A i umieścić w różnych miejscach komory autoklawu lub wewnątrz sterylizowanych materiałów. 2. Włączyć autoklaw (osoby posiadające uprawnienia do obsługi) i dokonać sterylizacji w ciągu 20 minut w temperaturze nie mniejszej niż 1210 C. 3. Po zakończeniu sterylizacji przenieść krążki, z zachowaniem warunków jałowości, do probówki z bulionem (użyć sterylnej pęsety). 4. Inkubować w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni 5. W przypadku nieskutecznej sterylizacji w bulionie wystąpi zmętnienie, a na powierzchni podłoża pojawi się kożuch z komórek bakterii. Jeżeli sterylizacja była skuteczna bulion pozostanie klarowny. Ćwiczenie 3. Badanie skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje obecne w powietrzu Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu przed włączeniem lampy UV: 1. Położyć dwie szalki Petriego z agarem odżywczym (AO) i dwie z podłożem Sabourauda (Sab) w pobliżu wyłączonej lampy UV i zdjąć wieczka z 1 szalki z AO i 1 szalki z podłożem Sabourauda na 10 minut. 2. Po 10 min. nałożyć wieczka i usunąć szalki, a na ich miejsce położyć nowe. Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu po włączeniu lampy UV: 3. Włączyć lampę UV na przynajmniej 30 minut. Uwaga: nie przebywać w strefie działania promieni UV! 4. Po 30 minutach wyłączyć lampę i otworzyć szalki Petriego na 10 minut. 5. Po 10 minutach zamknąć szalki. 6. Opisać użyte szalki Petriego odpowiednio: „przed UV” i „po UV” i wszystkie inkubować w temp. pokojowej przez tydzień. Po okresie inkubacji policz wszystkie kolonie wyrosłe na płytkach z agarem odżywczym i podłożem Sabourauda przed i po działaniu promieniowania UV. Postaraj się odróżnić kolonie bakteryjne (zwykle wypukłe i kolorowe, lub płaskie i matowe) od grzybowych (zwykle nitkowate, „watowate”). Oceń skuteczność działania promieniowania UV i wyjaśnij, od jakich czynników ona zależy. Które drobnoustroje są bardziej wrażliwe: bakterie czy grzyby? Ćwiczenie 4. Badanie skuteczności filtracji 1. Pobrać 1 oczko ezy podłoża przeznaczonego do sterylizacji i wykonać posiewu murawkowego na ½ szalki z podłożem stałym (próbkę opisać: przed filtracją) 2. Sterylną pęsetą wyciągnąć filtr membranowy i umieścić go na sitku w obudowie filtra 3. Zamontować górną część obudowy filtr i podłączyć filtr do pompki wodnej 4. Wlać podłoże przeznaczone do sterylizacji i odkręcić kurek kranu w celu wywołania podciśnienia 5. Po przefiltrowaniu podłoża zdemontować filtr, i pobrać sterylnie 1 oczko ezy filtratu, po czym posiać go na drugiej połówce podłoża stałego (próbkę opisać: po filtracji) 6. Szalkę inkubować przez 48h w temperaturze 370C. Po okresie inkubacji porównać wzrost w obu połówkach szalki i ocenić skuteczność filtracji.