Ćwiczenie 1: 1. Enzymy restrykcyjne, trawienie restrykcyjne 2

Ćwiczenie 1: 1. Enzymy restrykcyjne, trawienie restrykcyjne 2

Ćwiczenia z Zaawansowanych Metod Biologii Molekularnej w Bioanalityce 2014/2015, dla
studentów specjalności Mikrobioanalityka, rozpoczną się 08.10.2014r. Ćwiczenia będą odbywać się w
Zakładzie Technologii i Biotechnologii Środków Leczniczych w Gmachu Technologii Chemicznej w
sali 208.
Na każde ćwiczenia proszę przynieść: fartuch laboratoryjny, zapałki lub zapalniczkę, cienko-piszący
wodoodporny marker do pisania na szkle i plastiku oraz 2 pary rękawiczek jednorazowych (na każde
ćwiczenia nowa para).
Zagadnienia, których znajomość jest wymagana na ćwiczeniach:
Ćwiczenie 1:
1. Enzymy restrykcyjne, trawienie restrykcyjne
2. Elektroforeza DNA w żelu agarozowym
3. Izolacja DNA z żelu agarozowego
4. Ligacja
5. Transformacja bakterii
Ćwiczenie 2:
1. Izolacja plazmidów metodą lizy alkalicznej.
2. Wektory plazmidowe.
Ćwiczenie 3:
1. Nadprodukcja białek w bakteriach
Ćwiczenie 4:
1. Oczyszczanie białek z metką histydynową na złożu niklowym
2. Oznaczenie stężenia białka metodą Bradford
Ćwiczenie 5:
1. Elektroforeza białkowa SDS-PAGE
2. Technika Western blot
Materiały
„Krótkie wykłady Biologia Molekularna” P.C. Turner i inni, PWN
„Biochemia” Berg, Tymoczko, Stryer, PWN
„pET system manual” –e-material
“Western blotting principles and methods” e-material
Youtube
1. Podstawy elektoforezy żelowej
http://www.youtube.com/watch?v=f-_8eT4wt5Q
2. Wylewanie żelu akrylamidowego
http://www.youtube.com/watch?v=EDi_n_0NiF4
3. Złożenie aparatu MiniProtean, elektroforeza SDS-PAGE
http://www.youtube.com/watch?v=XnEdmk1Sqvg
4. WesternBlotting Transfer
http://www.youtube.com/watch?v=HddVrI2YdZY
Western Blot Visual Protocol Series
http://www.youtube.com/watch?v=HqmxLsHKxZE&list=PL79DF2FB08E95D63D
Prowadzące ćwiczenia:
Dr Małgorzata Adamczyk ([email protected])
Prof. nzw dr hab. Joanna Cieśla ([email protected])