Pobierz PDF - Dental and Medical Problems

Pobierz PDF - Dental and Medical Problems

PRACE ORYGINALNE
Dent. Med. Probl. 2012, 49, 3, 370–376
ISSN 1644-387X
© Copyright by Wroclaw Medical University
and Polish Dental Society
Jan Kowalski
Weryfikacja genetyczna i mikrobiologiczna
uogólnionego przewlekłego i uogólnionego
agresywnego zapalenia przyzębia
Genetic and Microbiological Verification of Generalized Chronic
Periodontitis and Generalized Aggressive Periodontitis
Zakład Chorób Błony Śluzowej i Przyzębia Instytutu Stomatologii Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego
Streszczenie
Wprowadzenie. Istnieją sprzeczne doniesienia na temat gatunków patogenów bakteryjnych obecnych w kieszonce przyzębnej. Sprzeczności te dotyczą zarówno kraju/regionu, w którym przeprowadzano badanie, jak i badanej
jednostki chorobowej. Niejednoznaczne są także wyniki badań związane z wpływem czynnika genetycznego na
przebieg choroby przyzębia.
Cel pracy. Ocena różnic w składzie mikrobiologicznym oraz profilu genetycznym u pacjentów z uogólnionym
agresywnym zapaleniem przyzębia i uogólnionym przewlekłym zapaleniem przyzębia.
Materiał i metody. Badaniem objęto 40 pacjentów z rozpoznaniem uogólnionego agresywnego i przewlekłego
zapalenia przyzębia. U pacjentów oznaczono wybrane parametry kliniczne, przeprowadzono badanie genetyczne
polimorfizmu IL-1 (wymaz z błony śluzowej policzka) i badanie mikrobiologiczne techniką PCR (pobranie biofilmu poddziąsłowego na sączek bibułowy). Wyniki badania poddano analizie statystycznej.
Wyniki. U pacjentów z uogólnionym agresywnym zapaleniem przyzębia stwierdzono, przy podobnym średnim
wskaźniku płytki, istotnie większy wskaźnik krwawienia, odsetek kieszonek głębszych niż 4 mm i średnią głębokość kieszonki. Podział pacjentów według genomu IL-1 nie wykazał istnienia różnic w parametrach klinicznych.
Analiza składu mikrobiologicznego kieszonki ujawniła większą liczbę bakterii A. actinomycetemcomitans i C. rectus
u pacjentów z uogólnionym agresywnym zapaleniem przyzębia. Po dodatkowym podziale wg genu IL-1 stwierdzono u pacjentów z uogólnionym przewlekłym zapaleniem przyzębia znamiennie więcej bakterii P. gingivalis
w grupie z pozytywnym genotypem niż z negatywnym. Analiza korelacyjna wykazała, że w grupie z uogólnionym
przewlekłym zapaleniem przyzębia C. rectus i P. intermedia korelowały dodatnio z większością badanych parametrów klinicznych.
Wnioski. U pacjentów z uogólnionym agresywnym zapaleniem przyzębia stwierdza się bardziej nasilony stan zapalny
niż u pacjentów z uogólnionym przewlekłym zapaleniem przyzębia. Genotyp IL-1 wydaje się nie mieć wpływu na stan
przyzębia. Możliwe jest, że C. rectus to bakteria o większym niż dotychczas podejrzewano znaczeniu i powinny być
prowadzone dalsze badania nad patogennością tego gatunku (Dent. Med. Probl. 2012, 49, 3, 370–376).
Słowa kluczowe: zapalenie przyzębia, bakterie, polimorfizm IL-1.
Abstract
Background. There are conflicting results regarding bacterial pathogens present in the periodontal pocket. Those
conflicts regard both nation/region, in which the research was conducted, and studied disease. Results of studies
about the influence of genetic factor on periodontal disease are also unequivocal.
Objectives. Assessment of differences in microbial composition and genetic profile of patients with generalized
aggressive periodontitis and generalized chronic periodontitis.
Material and Methods. The study included 40 patients with diagnosed generalized aggressive (AZP) or chronic
(PZP) periodontitis. In patients chosen clinical parameters were assessed. Genetic examination of IL-1 polymorphism was performed (mucosa swabbed from cheeks). Microbiological evaluation by the means of PCR was also
conducted (samples of subgingival biofilm collected on sterile paper points). Results were subjected to statistical
analysis.
Results. In AZP patients while having similar plaque index, there were significantly higher : bleeding index, pocket
depth and percentage of pockets deeper than 4 mms. Separation of subgroups according to IL-1 genome did not
Weryfikacja genetyczna i mikrobiologiczna przewlekłego i agresywnego zapalenia przyzębia
371
reveal any differences in clinical parameters. Microbiological analysis of subgingival biofilm revealed greater number of A. actinomycetemcomitans and C. rectus species in AZP patients. After additional division according to IL-1
gene in PZP patients there were significantly more P. gingivalis in subgroup with positive genotype than with negative genotype. Correlation analysis has shown that in PZP group C. rectus and P. intermedia correlated significantly
with the majority of the studied clinical parameters.
Conclusions. In AZP patients there is an intensified inflammation comparing to PZP patients. IL-1 genotype seems
not to have an influence on periodontal state. C. rectus seems to be a pathogen of the higher influence than currently
thought, and further studies should be conducted on its pathogenity (Dent. Med. Probl. 2012, 49, 3, 370–376).
Key words: periodontitis, bacteria, IL-1 gene polymorphism.
Zapalenia przyzębia są chorobami o etiologii
bakteryjnej. Główne uszkodzenia tkanki łącznej
i kości wynikają z uruchomienia nieswoistej odpowiedzi zapalnej, Przyczyną nadmiernego pobudzenia układu immunologicznego są patogeny – w szczególności Gram-ujemne pałeczki beztlenowe [1]. Bakterie kolonizujące powierzchnię
zęba organizują się w złożonną strukturę przestrzenną – biofilm nazębny, w którym zachodzą
rozliczne współzależne procesy metaboliczne [2].
Bakterie w biofilmie wykazują odmienne właściwości niż w stanie wolnym, przekazują sobie również wzajemnie sygnały – w tym oporność na leki [3]. Socransky et al. [4] wykazali, że biofilm,
mimo złożonej budowy (w jamie ustnej istnieje ponad 500 gatunków bakteryjnych), zachowuje pewne prawidłowości w składzie bakteryjnym
– obecność jednych drobnoustrojów jest niezbędna
do pojawienia się innych. Skupienia takich bakterii zostały nazwane kompleksami (clusters). Czerwony kompleks bakteryjny, pojawiający się najczęściej w ciężkich postaciach przewlekłego zapalenia
przyzębia, składał się z trzech gatunków bakteryjnych: Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia i Treponema denticola. Jego pojawienie się
w biofilmie jest uwarunkowane przez wcześniejszą
agregację kompleksu pomarańczowego, w skład
którego wchodzą liczne gatunki drobnoustrojów,
takich jak: Fusobacterium nucleatum/periodonticum, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens,
Parvimonas micra, Eubacterium nodatum, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Streptococcus constellatus i Campylobacter gracilis. Kompleksem powstającym równolegle do pomarańczowego jest kompleks zielony, w skład którego
wchodzą: Capnocytophaga sp., Campylobacter concisus, Eikenella corrodens i Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) z serotypem a. A. actinomycetemcomitans z serotypem b jest bakterią niezwiązaną z żadnym kompleksem bakteryjnym [4].
Gatunek Aa jest uznany za jedną z cech warunkowo współtowarzyszących agresywnemu zapaleniu przyzębia (obok nadreaktywnego fenotypu
makrofagów, zaburzenia fagocytozy i skłonności
do samoistnej remisji) [5]. Zwiększona aktywność
makrofagów przejawia się m.in. nadprodukcją interleukiny 1 (IL-1) w odpowiedzi na czynnik pa-
togenny [6]. Istnieją liczne badania dowodzące
związku tego zjawiska z polimorfizmem genów
kodujących IL-1 (formy alfa, beta oraz antagonistę
receptora cytokiny – odpowiednio IL-1A, IL-1B
i IL-1RN), wyniki badań klinicznych analizujących ewentualne powiązania genotypu ze stanem
klinicznym nie są jednak jednoznaczne [7].
Agresywne zapalenie przyzębia, według autorów obowiązującej obecnie klasyfikacji, odróżnia
od przewlekłego zapalenia przyzębia większe tempo narastania zmian patologicznych w przyzębiu
i niewspółmierność obrazu klinicznego do ilości
złogów bakteryjnych na powierzchni zębów [5].
Pojawia się u ogólnie zdrowych osób i ma tendencję do występowania rodzinnego. Jak wspomniano wyżej, głównym czynnikiem różnicującym są
parametry mikrobiologiczne. Czynnik genetyczny
może być również brany pod uwagę.
Celem pracy była ocena różnic w składzie mikrobiologicznym oraz profilu genetycznym u pacjentów z uogólnionym agresywnym zapaleniem
przyzębia i uogólnionym przewlekłym zapaleniem
przyzębia
Materiał i metody
Badaniem objęto 40 pacjentów w wieku 23–60 lat, zgłaszających się do Zakładu Chorób Błony
Śluzowej i Przyzębia UM w Warszawie, u których
w przynajmniej 4 zębach (każdy w innym kwadrancie) występowały kieszonki o głębokości powyżej 5 mm.
U 17 pacjentów w wieku 23–37 lat rozpoznano
uogólnione agresywne zapalenie przyzębia (AZP)
na podstawie następujących kryteriów: pozytywnego wywiadu rodzinnego dotyczącego występowania zapalenia przyzębia, stanu zapalnego (w subiektywnej ocenie badającego) nieadekwatnego do
obecnych złogów nazębnych, postępu choroby nasilonego w obrębie siekaczy przyśrodkowych i/lub
pierwszych zębów trzonowych, przy czym proces
zapalny dotyczył przynajmniej 3 innych zębów.
U 23 pacjentów w wieku 37–60 lat uogólnione
przewlekłe zapalenie przyzębia (PZP) zostało rozpoznane na podstawie obecności dużej ilości płytki/kamienia – ponad 30% badanych miejsc by-
372
ło objętych utratą przyczepu łącznotkankowego,
przy czym w przynajmniej jednym miejscu utrata
ta wynosiła ponad 4 mm.
Z badania wyłączono osoby palące tytoń, osoby u których w ostatnich 6 miesiącach przeprowadzono skaling lub antybiotykoterapię, chore ogólnie lub przyjmujące leki potencjalnie wpływające na skład mikroflory jamy ustnej lub miejscową
odpowiedź immunologiczną.
Osoby zakwalifikowane do badania wyraziły
na nie pisemną zgodę, a badanie zostało pozytywnie zaopiniowane przez Komisję Etyki Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego.
U wszystkich pacjentów zakwalifikowanych
do badania przeprowadzono badanie kliniczne,
podczas którego rejestrowano następujące parametry stanu przyzębia:
−  głębokość kieszonek (PD) [mm], badaną
w 6 miejscach pomiarowych każdego zęba, definiowaną jako odległość od brzegu dziąsła do dna
kieszonki;
−  kliniczny poziom przyczepu łącznotkankowego (CAL) [mm], badany w 6 miejscach pomiarowych każdego zęba, definiowany jako odległość między połączeniem szkliwno-cementowym
a dnem kieszonki;
−  wskaźnik płytki (PLI) [%], mierzony na
4 powierzchniach (poza żującą) każdego zęba,
wyrażający procentowo odsetek powierzchni zajętych przez złogi nazębne w stosunku do wszystkich powierzchni mierzonych;
−  wskaźnik krwawienia (BI) [%], mierzony
w 6 miejscach pomiarowych każdego zęba, wyrażający procentowo stosunek punktów krwawiących przy sondowaniu do wszystkich punktów
mierzonych;
−  odsetek kieszonek głębszych niż 4 mm
(%PD > 4) [%].
Badane osoby poddano badaniu genetycznemu w celu oznaczenia genów IL-1A i IL-1B, w pozycjach odpowiednio +4845 i +3954. W tym celu za pomocą sterylnej watki pobierano wymaz
komórek błony śluzowej policzka, po uprzednim
jej osuszeniu. Po 10-sekundowym pocieraniu nabłonka watkę umieszczano w sterylnym pojemniku i wysyłano do laboratorium. Pacjenta oznaczano jako genetycznie pozytywnego, jeżeli w obu
pozycjach był obecny allel 2, odpowiedzialny za
nadprodukcję IL-1 w odpowiedzi na określony patogen [8]. Korzystano z gotowych, komercyjnie
dostępnych zestawów (Genotype PST, Hain Lifescience GmbH, Niemcy).
Badanie mikrobiologiczne przeprowadzono
po uprzednim usunięciu złogów naddziąsłowych.
U każdego pacjenta badano 4 najgłębsze (PD powyżej 4 mm) kieszonki – każda była w innym
kwadrancie. Po osuszeniu do kieszonki wpro-
J. Kowalski
wadzano sterylny bibułowy sączek i pozostawiano przez 30 s. Po tym czasie sączek umieszczano
w sterylnej probówce i wysyłano do laboratorium.
Obecność i liczbę bakterii oznaczano za pomocą
techniki PCR w czasie rzeczywistym. Po laboratoryjnej lizie komórek bakteryjnych DNA izolowano i oczyszczano z użyciem kolumn silikonowych
w procesie wirowania. Oczyszczone DNA zanurzano w 100 µl roztworu buforującego.
Badano następujące gatunki bakteryjne: Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas gingivalis (Pg), Tannerella forsythia
(Tf), Treponema denticola (Td), Prevotella intermedia (Pi), Parvimonas micra (Pm), Fusobacterium nucleatum (Fn), Campylobacter rectus (Cr),
Eikenella corrodens (Ec).
Mieszanka PCR zawierała: primery/sondy,
buforujący chlorek magnezu i polimerazę Taq.
Umieszczano ją w probówkach, do których dodawano badane DNA. Reakcję przeprowadzano
w termocyklerze. Ostateczna analiza ilościowa była przeprowadzana z użyciemu oprogramowania
sprzętowego cyklera i porównywana ze standardowym DNA oraz krzywymi ilościowymi. Ostateczna wartość była wyliczana dla każdej badanej
bakterii i całej badanej próbki (100 µl stanowiących pozytywną kontrolę). Poziom wykrywalności bakterii wynosił 102.
Średnie PD i CAL z zębów, w których dokonywano badania mikrobiologicznego, były używane do obliczeń statystycznych i przedstawiono je w wynikach tego badania. Wyniki badania
mikrobiologicznego każdego pacjenta były łączną z 4 miejsc pomiarowych. Łączne te uśredniano
i analizowano statystycznie w podgrupach.
W każdej podgrupie wyliczano wartości minimum, maksimum i mediany, a na tej podstawie
średnie oraz odchylenia standardowe. Ponieważ
rozkład badanej grupy nie zachowywał cech funkcji
Gaussowskiej, w celu oznaczenia różnic stosowano
test Wilcoxona-Manna-Whitneya, po rankowaniu
badanego parametru. Wyniki uznawano za statystycznie znamienne jeśli w badaniu dwuśladowym
wartość współczynnika p była poniżej 0,05. Analizę korelacyjną wykonywano z użyciem testu Spearmana. Istnienie korelacji potwierdzano ponowną
analizą po rankowaniu zmiennych. Za statystycznie
znamienne uznawano korelacje, dla których wartość współczynnika p wynosiła poniżej 0,05, a wartość współczynnika powiązań przekraczała 25%.
Wyniki
Wyniki analizy badania klinicznego przedstawiono w tabeli 1. U pacjentów z AZP stwierdzono większe średnie PD (średnia z 6 pomiarów
373
Weryfikacja genetyczna i mikrobiologiczna przewlekłego i agresywnego zapalenia przyzębia
Tabela 1. Średnie wartości parametrów klinicznych w grupie badanej
Table 1. Mean values of clinical parameters in the study group
PD [mm]
CAL [mm]
BI [%]
PI [%]
%PD > 4 [%]
AZP (n = 17)
5,38 ± 1,29
6,73 ± 1,98
56,4 ± 25,0
74,1 ± 16,9
28,6 ± 20,6
PZP (n = 23)
4,09 ± 1,80
5,28 ± 2,75
35,0 ± 30,9
59,7 ± 30,6
17,8 ± 19,9
Istotność statystyczna
(Statistical significance)
p < 0,05
n.s.
p < 0,05
n.s.
p < 0,05
Wartości liczbowe: średnia ± odchylenie standardowe; n.s. – nieistotne statystycznie.
Values: mean ± standard deviation; n.s. – not signifficant.
Tabela 2. Średnie liczby badanych bakterii i ich wykrywalność
Table 2. Average number of the bacteria tested and theirs detection
AZP (n = 17)
A. actinomycetemcomitans
182,5 ± 486,5
PZP (n = 23)
5,2 ± 14,5
Istotność statystyczna
(Statistical significance)
p < 0,05
Wykrywalność
(Detection)
AZP
PZP
8/17
4/23
T. forsythia
1382,4 ± 1477,0
1267,7 ± 2298,4
n.s.
17/17
21/23
C. rectus
462,9 ± 365,6
248,3 ± 318,7
p < 0,05
17/17
19/23
T. denticola
723,2 ± 959,3
778,7 ± 1438,6
n.s.
15/17
21/23
E. corrodens
312,3 ± 420,0
231,7 ± 456,9
n.s.
10/17
13/23
P. intermedia
432,2 ± 1300,1
446,1 ± 680,9
n.s.
9/17
17/23
P. micra
710,4 ± 1321,9
1861,3 ± 4595,6
n.s.
16/17
21/23
P. gingivalis
1233,1 ± 2724,6
490,8 ± 850,9
n.s.
11/17
15/23
F. nucleatum
2251,5 ± 3023,9
1748,5 ± 2606,4
n.s.
17/17
23/23
Wartości liczbowe: średnia ± odchylenie standardowe; n.s. – nieistotne statystycznie.
Values: mean ± standard deviation; n.s. – not signifficant.
Ryc. 1. Średnie liczby bakterii w grupie pacjentów z PZP podzielonych wg genotypu IL-1
(Pogrubioną czcionką zaznaczono różnicę istotną statystycznie. Wartości liczbowe – jako bazową wartość przyjęto 105)
Fig. 1. Average number of the bacteria in patients with chronic periodontis after division according IL-1 gene
(Bold shows the statistically signifficant difference values – as basis value 105 was assumed)
374
J. Kowalski
Ryc. 2. Analiza korelacyjna parametrów klinicznych i mikrobiologicznych w grupie badanej. Tabela górna dotyczy
pacjentów z AZP, dolna – pacjentów z PZP. Liczby w tabelach to wartości korelacji Pearsona. Na czerwono zaznaczono korelacje statystycznie istotne, na żółto – wartości korelacji istotnej statystycznie ze współczynnikiem powiązania
poniżej 25%
Fig. 2. Correlation coefficient of clinical and microbiiological parameters in the study group. Table on the keft side
concerns AZP patients, on the right – PZP patients. Numbers in table as the values of Pearsons correlation index. Red
colour shows statistically signifficant correlation, yellow shows correlations indexes with relationship ratio below 25%
z 4 zębów objętych badaniem mikrobiologicznym)
i wyższe BI oraz odsetek kieszonek głębszych niż
4 mm, przy zbliżonych średnich wartościach
wskaźnika płytki i CAL.
W tabeli 2 zestawiono wyniki analizy mikrobiologicznej w badanej grupie podzielonej w zależności od rozpoznania. U pacjentów z AZP wykazano większą liczebność Aggregatibacter actinomycetemcomitans i Campylobacter rectus w płytce
poddziąsłowej. W tym samym czasie A.a. wykryto jedynie w 12 na 30 próbek (8 pacjentów z AZP
i 4 z PZP).
Na rycinie 1 porównano liczby poszczególnych
bakterii w grupie pacjentów z PZP w zależności
od genotypu IL-1. Stwierdzono ponad 7-krotnie
większą liczbę Porphyromonas gingivalis w płytce
poddziąsłowej w grupie pacjentów z pozytywnym
genotypem IL-1. Liczebność pozostałych bakterii
nie różniła się, podobnie jak w grupie pacjentów
z rozpoznanym AZP (dane nie zostały przedstawione w artykule).
Na rycinie 2 przedstawiono analizę korelacyjną parametrów klinicznych i mikrobiologicznych
w grupie pacjentów z AZP (lewa część ryciny)
i PZP (prawa część ryciny). W grupie pacjentów
z AZP jedyną stwierdzoną korelacją była odwrotna proporcja między wskaźnikiem płytki a liczbą Porphyromonas gingivalis. U pacjentów z PZP
korelacji było więcej. Najbardziej jest zauważalne
wprost proporcjonalne powiązanie Campylobacter rectus z większością badanych parametrów klinicznych. Prevotella intermedia korelowała wprost
proporcjonalnie z poziomem klinicznej utraty
przyczepu łącznotkankowego, wskaźnikiem płytki i wskaźnikiem krwawienia. Porphyromonas gingivalis korelował znamiennie z większością parametrów klinicznych, tym niemniej współczynnik
powiązania nie osiągał 25%, co przy braku rozkładu normalnego w grupie badanej stwarza ryzyko
fałszywie dodatniego wyniku.
Omówienie
Obecna klasyfikacja chorób przyzębia, opracowana przez Amerykańską Akademię Periodontologii (AAP) w 1999 r. [5], rozróżnia pośród innych zapaleń przyzębia postać agresywną i przewlekłą. Głównym czynnikiem różnicującym jest
dynamika procesu chorobowego. Według AAP
cechami charakterystycznymi AZP są: utrata przyczepu łącznotkankowego w tempie min.
2 mm na 3 miesiące, nieadekwatnie zaawansowany stan zapalny w stosunku do ilości biofilmu
nazębnego, brak chorób ogólnych oraz tendencja do występowania w rodzinie [5]. Badania własne potwierdzają te właściwości AZP. U pacjentów
z uogólnioną postacią choroby stwierdzano znacząco głębsze kieszonki i większy wskaźnik krwawienia niż u pacjentów z PZP. Parametry te opisują nasilenie procesu zapalnego. Brak statystycznie
istotnych różnic w wartościach wskaźnika płytki
(choć jego wartość jest nieznacznie większa u pacjentów z AZP) ze współobecną nasiloną odpowiedzią zapalną to jedna z głównych cech AZP.
Istotna różnica w odsetku kieszonek głębszych
niż 4 mm wskazuje, że u pacjentów z AZP proces zapalny jest bardziej rozległy. Hipotetycznie,
gdyby do badania kwalifikować również osoby
z miejscowymi postaciami choroby, nie byłoby
różnic w tym parametrze (różnica między miejscową a uogólnioną postacią choroby w AZP opiera się ściśle na liczbie zębów objętych zapaleniem,
a w PZP na liczbie miejsc pomiarowych z CAL > 0).
Weryfikacja genetyczna i mikrobiologiczna przewlekłego i agresywnego zapalenia przyzębia
Wartości badanych parametrów różnią się jednak od obserwowanych przez innych autorów. Faveri et al. [9] stwierdzili większe średnie wartości
PD i CAL (odpowiednio 8,5 i 8,8 mm), podobnie
jak większy %PD > 4 (59,3%). Wskaźnik płytki był
mniejszy (44,3%), a wskaźnik krwawienia większy
(71.3%) [9]. Istnieją co najmniej trzy wyjaśnienia
tych rozbieżności: różnice wynikające z geografii
(badanie Faveriego przeprowadzono w Brazylii),
różnice w wieku grupy pacjentów z AZP (w grupie
Faveriego 24.1, w badaniu własnym 30,3), różnice
w liczebności grupy (17 vs 10 u Faveriego).
Średnia liczba A. actinomycetemcomitans w kieszonce przyzębnej była większa u pacjentów z AZP
niż z PZP, chociaż nie jest to tak powszechnie
stwierdzane, jak mogłoby się wydawać z klasyfikacji AAP [5]. Mimo że drugorzędową cechą AZP jest
występowanie A. actinomycetemcomitans w niemal 90% przypadków tej choroby [5], badanie własne wykazało odmienne wyniki. Bakteria ta była
wykryta tylko u 8 z 17 pacjentów. Inne obserwacje
również nie potwierdzają tak istotnie zwiększonej liczby A. actinomycetemcomitans w AZP. Choć
w badaniu własnym, mimo małej wykrywalności,
stwierdzono znaczącą różnicę w liczbie tej bakterii między AZP i PZP, to Reichert et al. [10] nie
wykazywali takich różnic w obserwacjach u ponad
110 chorych. Podobne prawidłowości opisywali
Guentsch et al. [11]. Faveri et al. [9] oceniali 10 pacjentów z AZP. Analiza PCR wykazała obecność
A. actinomycetemcomitans u 7 z 10 pacjentów, ale
klonowanie rybosomalnego RNA nie ujawniło tego patogenu w żadnej z badanych próbek. Botero
et al. [12] badali 80 kolumbijskich pacjentów z PZP
oraz AZP i zaobserwowali częstsze występowanie
P. gingivalis, T. forsythia i E. corrodens u pacjentów z AZP. Możliwe jest, że różnice w cytowanych
badaniach wynikają z czynników genetycznych,
geograficznych i społecznych. Cechy mikrobiologiczne chorób przyzębia (ze szczególnym uwzględnieniem AZP) mogą różnić się w zależności od obszaru geograficznego, w którym pacjenci są badani. Zbliżone do występujących w badaniu własnym
różnice w liczbie C. rectus obserwowali Gajardo
et al. [13] w badaniu przeprowadzonym w Chile. Zaobserwowali również częstsze występowanie tego patogenu w AZP niż w PZP (odpowiednio
50% vs 23.5%). C. rectus jest Gram-ujemną ruchomą pałeczką, mającą zdolność przenikania bariery
krew–łożysko i hipotetycznie odpowiedzialną za
375
przedwczesny poród u kobiet ciężarnych z chorobą przyzębia [14]. C. rectus należy do pomarańczowego kompleksu bakteryjnego i jest łączona z zapaleniem dziąseł i wczesnym stadium zapalenia
przyzębia [15]. Przez analogię do podobnej bakterii występującej w układzie pokarmowym – Helicobacter pylori sugeruje się że C. rectus może tworzyć nadżerki w nabłonku łączącym, prowadząc
do zniszczenia przyczepu nabłonkowego i zainicjowania zapalenia przyzębia [15].
Profil genetyczny IL-1 zarówno w badanej
grupie jako całości, jak i w podgrupach podzielonych wg rozpoznania choroby, nie miał wpływu
na oceniane parametry kliniczne stanu przyzębia
(dane nie przedstawione w artykule). Spośród ocenianych patogenów bakteryjnych jedynie w grupie pacjentów z PZP stwierdzono istotnie więcej P. gingivalis w biofilmie nazębnym pacjentów
z pozytywnym genotypem. Należy nadmienić, że
przy badanych 9 drobnoustrojach stwierdzenie zależności tylko odnośnie do jednego z nich w jednej z podgrup może być cechą wynikłą z doboru
grupy badanej, a nie ogólną prawidłowością. Dane
dotyczące wpływu genotypu IL-1 na tkanki przyzębia są sprzeczne. Istnieją prace potwierdzające
związek genu kodującego IL-1 z nadprodukcją tej
cytokiny [16], inne badania nie potwierdzają takiej
zależności [7]. Niepodważalne jest, że cechy choroby przyzębia są dziedziczone poligenowo [17]
i nie tylko IL-1, ale prawdopodobnie również receptory gamma Fc [18], TLR [19] i inne cytokiny,
takie jak IL-10 [20] są uwikłane w genetycznej predyspozycji do choroby przyzębia.
Analiza korelacyjna w podgrupie pacjentów
z AZP wykazała jedynie odwrotnie proporcjonalną zależność między wskaźnikiem płytki a liczbą
P. gingivalis. Biorąc pod uwagę, że jedynie u 11 na
17 osób oznaczono ten patogen, trudno na tej podstawie wyciągnąć jakieś wnioski. Analiza korelacyjna u pacjentów z PZP wykazała, że C. rectus jest
bakterią powiązaną z większością parametrów klinicznych. P. intermedia również koreluje z 3 spośród 5 badanych parametrów. Obie bakterie należą
do pomarańczowego kompleksu bakteryjnego [4],
któremu poświęcano mniej uwagi niż kompleksowi
czerwonemu, uważanemu za główny czynnik etiologiczny w ciężkich postaciach PZP. Wydaje się, że
dalsze badania nad tym kompleksem, w szczególności nad C. rectus, mogą przyczynić się do zrozumienia etiopatogenezy zapaleń przyzębia.
Piśmiennictwo
  [1] Page R.C.: The etiology and pathogenesis of periodontitis. Compend. Contin. Educ. Dent. 2002, 23, 11–14.
  [2] Huang R., Li M., Gregory R.L.: Bacterial interactions in dental biofilm. Virulence 2011, 2, 435–444.
  [3] Marsh P.D., Moter A., Devine D.A.: Dental plaque biofilms: communities, conflict and control. Periodontol.
2000, 2011, 55, 16–35.
376
J. Kowalski
  [4] Socransky S.S., Haffajee A.D., Cugini M.A., Smith C., Kent R.L. Jr.: Microbial complexes in subgingival
plaque. J. Clin. Periodontol. 1998, 25, 134–144.
  [5] Armitage G.C.: Development of a classification system for periodontal diseases and conditions. Ann. Periodontol.
1999, 4, 1–6.
  [6] Eskan M.A., Benakanakere M.R., Rose B.G., Zhang P., Zhao J., Stathopoulou P., Fujioka D., Kinane D.F.:
Interleukin-1beta modulates proinflammatory cytokine production in human epithelial cells. Infect. Immun. 2008,
76, 2080–2089.
  [7] Anusaksathien O., Sukboon A., Sitthiphong P., Teanpaisan R.: Distribution of interleukin-1beta(+3954) and
IL-1alpha(–889) genetic variations in a Thai population group. J. Periodontol. 2003, 74, 1796–1802.
  [8] Greenstein G., Hart T.C.: Clinical utility of a genetic susceptibility test for severe chronic periodontitis: a critical evaluation. J. Am. Dent. Assoc. 2002, 133, 452–459.
  [9] Faveri M., Mayer M.P., Feres M., de Figueiredo L.C., Dewhirst F.E., Paster B.J.: Microbiological diversity
of generalized aggressive periodontitis by 16S rRNA clonal analysis. Oral Microbiol. Immunol. 2008, 23, 112–118.
[10] Reichert S., Machulla H.K., Klapproth J., Zimmermann U., Reichert Y., Gläser C., Schaller H.G.,
Schulz S.: Interleukin-2 – 330 and 166 gene polymorphisms in relation to aggressive or chronic periodontitis and
the presence of periodontopathogenic bacteria. J. Periodont. Res. 2009, 44, 628–635.
[11] Guentsch A., Puklo M., Preshaw P.M., Glockmann E., Pfister W., Potempa J., Eick S.: Neutrophils in
chronic and aggressive periodontitis in interaction with Porphyromonas gingivalis and Aggregatibacter actinomycetemcomitans. J. Periodont. Res. 2009, 44, 368–377.
[12] Botero J.E., Contreras A., Lafaurie G., Jaramillo A., Betancourt M., Arce R.M.: Occurrence of periodontopathic and superinfecting bacteria in chronic and aggressive periodontitis subjects in a Colombian population.
J. Periodontol. 2007, 78, 696–704.
[13] Gajardo M., Silva N., Gómez L., León R., Parra B., Contreras A., Gamonal J.: Prevalence of periodontopathic bacteria in aggressive periodontitis patients in a Chilean population. J. Periodontol. 2005, 76, 289–294.
[14] Madianos P.N., Lieff S., Murtha A.P., Boggess K.A., Auten R.L. Jr, Beck J.D., Offenbacher S.: Maternal
periodontitis and prematurity. Part II: Maternal infection and fetal exposure. Ann. Periodontol. 2001, 6, 175–182.
[15] Tanner A., Maiden M.F., Macuch P.J., Murray L.L., Kent R.L. Jr.: Microbiota of health, gingivitis and initial
periodontitis. J. Clin. Periodontol. 1998, 25, 85–98.
[16] Scapoli C., Mamolini E., Carrieri A., Guarnelli M.E., Annunziata M., Guida L., Romano F., Aimetti M.,
Trombelli L.: Gene-gene interaction among cytokine polymorphisms influence susceptibility to aggressive periodontitis. Genes. Immun. 2011, 12, 473–480.
[17] Weir B.S.: Bioinformatics and approaches to identifying polygenic susceptibility traits. Ann. Periodontol. 2002, 7,
1–7.
[18] Loos B.G., Leppers-Van de Straat F.G., Van de Winkel J.G., Van der Velden U.: Fcgamma receptor polymorphisms in relation to periodontitis. J. Clin. Periodontol. 2003, 30, 595–602
[19] Brett P.M., Zygogianni P., Griffiths G.S., Tomaz M., Parkar M., D’Aiuto F., Tonetti M.: Functional gene
polymorphisms in aggressive and chronic periodontitis. J. Dent. Res. 2005, 84, 1149–1153.
[20] Sumer A.P., Kara N., Keles G.C., Gunes S., Koprulu H., Bagci H.: Association of interleukin-10 gene polymorphisms with severe generalized chronic periodontitis. J. Periodontol. 2007, 78, 493–497.
Adres do korespondencji:
Jan Kowalski
Zakład Chorób Błony Śluzowej i Przyzębia IS WUM
ul. Miodowa 18
00-246 Warszawa
tel.: 22 502 20 36
e-mail: [email protected]
Praca wpłynęła do Redakcji: 11.06.2012 r.
Po recenzji: 27.06.2012 r.
Zaakceptowano do druku: 27.06.2012 r.
Received: 11.06.2012
Revised: 27.06.2012
Accepted: 27.06.2012