Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Human
LAT Protein
Clone LAT-1
Nr kat. M7279
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human LAT Protein, Clone LAT-1, są przeznaczone do stosowania
w badaniach immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje limfocyty T, naturalne komórki cytotoksyczne
(NK), megakariocyty i komórki tuczne. Przeciwciała skierowane przeciw białku LAT są przydatne w identyfikacji
podtypów chłoniaków z komórek T (1). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej.
Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu
klinicznego, oraz wyników innych metod diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Łącznik aktywacji limfocytów T (Linker for activation of T cells, LAT).
Streszczenie i informacje
ogólne
Stymulacja receptora antygenowego limfocytów T (TCR) powoduje aktywację kilku kinaz białkowych
tyrozynowych (PTK), związanych z TCR. Aktywowane PTK powodują fosforylację tyrozyn na różnorodnych
białkach, a jej skutkiem jest aktywacja enzymów lub tworzenie miejsc wiążących dla białek biorących udział
w kaskadzie aktywacyjnej. Łącznik aktywacji limfocytów T (LAT) to białko błonowe o masie 36-38 kDa (1), a po
aktywacji limfocytu T białko LAT ulega fosforylacji przez kinazę tyrozynową ZAP-70 (2).
Białko LAT pojawia się w rozwoju limfocytów T już na etapie tymocytów, przed ekspresją terminalnej
deoksynukleotydylotransferazy (TdT) w zarodkach i jest obecne przez całe ich życie. Ulega ekspresji
w komórkach NK i limfocytach T bez ograniczeń na jakiekolwiek ich podpopulacje. W megakariocytach
i komórkach tucznych również dochodzi do ekspresji białka LAT, podczac gdy w innych komórkach
mieloidalnych, komórkach pochodzenia monocytarnego i limfocytach B ekspresja białka LAT nie zachodzi (1).
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub
następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne
materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, (4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie
barwienia, 6) Kontrola jakości, (7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia,
9) Ograniczenia metody.
Dostarczany odczynnik
Monoklonalne mysie przeciwciała w postaci ciekłej jako nadsącz hodowli tkankowej w buforze Tris/HCl
o stężeniu 0,05 mol/L, o pH 7,2, zawierający NaN3 w stężeniu 15 mmol/L.
Klon: LAT-1. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Białko rekombinowane odpowiadające cytoplamatycznej domenie ludzkiego białka LAT.
Swoistość
W analizie techniką Western blot ekstraktów białkowe z białaczek linii ludzkich limfocytów T (HSB-2), ludzkich
płytek i ludzkich odczynowych węzłów chłonnych przeciwciało znakuje ludzkie białko LAT.
W badaniach immunocytochemicznych na tkankach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie
przeciwciało nie wykazywało reaktywności krzyżowej z białkiem będącym odpowiednikiem LAT u krów, koni,
myszy, szczurów i świń.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane w ulotce dołączonej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego
równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z naszym działem
wsparcia technicznego.
(113370-002)
Dako Denmark A/S ·
M7279/PL/HEW/08.06.05 str. 1/2
Produktionsvej 42
DK-2600 Glostrup
· Denmark
Tel. +45 44 85 95 00
Fax +45 44 85 95 95
CVR No. 33 21 13 17
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Optymalne wyniki uzyskuje się, poddając tkanki procedurze cieplnego odmaskowania
antygenu przy użyciu roztworu Dako Target Retrieval Solution, pH 9, nr kat. S2368 lub Dako Target Retrieval
Solution, High pH, nr kat. S3308. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się stosując odczynniki Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S1700 i Dako Target Retrieval Solution, Citrate pH 6, nr kat. S2369, lub bez obróbki
wstępnej. Stwierdzono, że wstępna obróbka tkanek przy użyciu odczynnika Dako Proteinase K, nr kat. S3020,
niszczy antygeny. W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunocytochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć.
Przygotowanie próbek
Skrawki mrożakowe i preparaty tkankowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków
mrożakowych utrwalanych acetonem.
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human LAT Protein, nr kat. M7279, mogą być używane
w zakresie rozcieńczeń 1:25–1:50 do skrawków tkanek ludzkich migdałków utrwalanych w formalinie
i zatapianych w parafinie, po obróbce wstępnej w postaci 20-minutowego cieplnego odmaskowania antygenu
w roztworze Dako Target Retrieval Solution, pH 9, nr kat. S2368, i 30-minutowej inkubacji
z przeciwciałem pierwotnym w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od
rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium.
Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Mouse IgG1, code No. X0931, rozcieńczony do tego samego
stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. Zalecane jest rozcieńczanie tych odczynników bezpośrednio
przed użyciem lub rozcieńczenie w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809, chyba że stabilność
rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej potwierdzono w praktyce w ramach procedury wykonywania
odczynu. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne.
Wykonanie odczynu
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB+/HRP, nr kat. K0679, i DAKO EnVision+/HRP,
nr kat. K4004 i K4006. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów w systemach zautomatyzowanych,
takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują głównie odczyn błonowy, choć trudny w ocenie na małych
limfocytach.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało daje silny odczyn z limfocytami T, megakariocytami i komórkami tucznymi
w migdałkach i kępkach Peyera w okrężnicy.
Nieprawidłowe tkanki Przeciwciało dało odczyn w przypadku 2/2 limfoblastycznych białaczek/chłoniaków
z prekursorów limfocytów T, 22/22 obwodowych chłoniaków z limfocytów T, 5/5 chłoniaków anaplastycznych
z dużych komórek i 1/1 angioimmunoblastyznym chłoniakiem z limfocytów T. W innym badaniu
megakarioblasty dawały odczyn w 5/6 ostrych aplazjach szpiku ze zwłóknieniem szpiku (3). W 123/123
chłoniakach Hodgkina, 167/167 chłoniakach typu grudkowego i w 94/94 rozlanych chłoniaków z dużych
komórek przeciwciało nie dało odczynu z żadnymi komórkami nowotworowymi.
Piśmiennictwo
1.
Facchetti F, Chan JKC, Zhang W, Tironi A, Chilosi M, Parolini S, et al. Technical Advance. Linker for
activation of T cells (LAT), a novel immunohistochemical marker for T cells, NK cells, mast cells, and
megakaryocytes. Am J Pathol 1999, 154:1037-46.
2.
Zhu M, Janssen E, Zhang W. Minimal requirement of tyrosine residues of linker for activation of T cells in
TCR signalling and thymocyte development. J Immunol 2003, 170:325-333.
3.
Orazi A, O’Malley DP, Jiang J, Vance GH, Thomas J, Czader MB, et al. Acute panmyelosis with
myelo-fibrosis: an entity distinct from acute megakaryoblastic leukaemia. Mod Pathol 2005, 18:603-14.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Producent
Sprawdzić w instrukcji
Z
s
t
o
s
o
w
a
n
i
u
ż
y
ć
p
r
z
e
d
a
(113370-002)
Dako Denmark A/S ·
M7279/PL/HEW/08.06.05 str. 2/2
Produktionsvej 42
DK-2600 Glostrup
· Denmark
Tel. +45 44 85 95 00
Fax +45 44 85 95 95
CVR No. 33 21 13 17