Struktura kropli lipidowych
Transkrypt
Struktura kropli lipidowych
Błona komórkowa neuronu w TEM Grubość: 5 nm 1 2015-11-29 Błona komórkowa neuronu (x436 tys.) 2 2015-11-29 Struktura fosfolipidów fosfatydylocholina 3 2015-11-29 Diagram dwuwarstwy lipidowej 4 2015-11-29 Cholesterol w błonie komórek zwierzęcych 5 2015-11-29 Cholesterol 6 2015-11-29 7 2015-11-29 Stężenie jonów w mM wewnątrz kom. Na+ K+ Mg2+ Ca2+ H+ Cl- 5-15 140 0,5 10-4 10-7,2M 5-15 zewnątrz kom. 145 5 1-2 1-2 10-7,4M 110 8 2015-11-29 Obraz błony w metodzie freeze-fracture 9 2015-11-29 Metoda freeze-fracture 10 2015-11-29 Metoda freeze-fracture zamrożenie tkanki rozłupnie preparatu pokrycie odsłoniętej powierzchni warstwą węgla trawienie tkanki kwasem osadzenie repliki na siatce i pokrycie jej warstwą złota obserwacja w TEM i wykonanie zdjęć 11 2015-11-29 Połączenia międzykomórkowe 12 2015-11-29 Obraz połączenia szczelinowego w TEM 13 2015-11-29 Model połączenia szczelinowego 14 2015-11-29 Struktura koneksyn 15 2015-11-29 Typy koneksonów 16 2015-11-29 Połączenia szczelinowe w mięśniówce macicy świni (Cx-43 z Cy3) circ long 17 2015-11-29 18 2015-11-29 Połączenia szczelinowe w siatkówce myszy 19 2015-11-29 Połączenie zamykające w TEM 20 2015-11-29 Model połączenia zamykającego 21 2015-11-29 Erytrocyty 22 2015-11-29 EDTA (kwas wersenowy) Sól disodowa: wersenian sodu Środek kompleksujący kationy metali np.: Ca2+, Mg2+ Fe3+ Kompleks chelatowy EDTA z jonem metalu Me 23 2015-11-29 Rozpuszczanie błony komórkowej erytrocytów myszy 24 2015-11-29 Transport przez błonę komórkową 25 2015-11-29 26 2015-11-29 27 2015-11-29 Dyfuzja prosta 28 2015-11-29 Ciśnienie osmotyczne P = cRT R = 8,314 [J/(Kmol)] = 0,0821 [dm3atm/(Kmol)] T = 309 [K] , c – stężenie molowe Stężenie molowe Wody destylowanej: 55,56 mol/dm3 Wody w roztworze soli fizjologicznej: 55,06 mol/dm3 Więc: P = 12,68 atm 29 2015-11-29 30 2015-11-29 Micele i liposomy 31 2015-11-29 Liposomy – PEG-Po 5-(4’-acryloyloxyphenyl)-10,15,20-tri(p-tolyl) porphyrin 32 2015-11-29 Struktura kropli lipidowych TEM Fujimoto i wsp. 2011 Skład kropli lipidowych Rdzeń: Tri - trójglicerydy eCh - estry cholesterolu Monowarstwa lipidowa: Ph - fosfolipidy fosfatydylocholina Ch - cholesterol Struktura triglicerydu Białka kropli lipidowych Strukturalne białka PAT: perylipiny, adipofilina, TIP47 Enzymy syntezy lipidów: syntaza acylo-CoA acylotransferaza diacyloglicerolu Lipazy: hormonalnie zależna lipaza adipocytowa lipaza triglicerydów Białka transportu pęcherzyków: Rab, ARF1, SNARE, białka motoryczne Funkcje kropli lipidowych 1. magazynowanie lipidów 2. magazynowanie białek (np. histonów) 3. wewnątrzkomórkowy transport lipidów i białek 4. kontrola metabolizmu lipidów Komórka tłuszczowa - adipocyt LD w komórkach wysp Langerhansa trzustki LD w hepatocytach Krople tłuszczu w zarodkach świni 40 2015-11-29 Oil red O 41 2015-11-29 Drożdże Bodipy FL Goodman i wsp. 2006 Nicień Czerwień Nilu Ruwkun 2009 Przygotowanie materiału do mikroskopu świetlnego 1. Uśmiercenie zwierząt i preparacja wycinków (szybko) 2. Utrwalanie tkanek i komórek (zwykle w temp. 4ºC lub pokojowej, od kilkudziesięciu minut do paru dni w zależności od użytego utrwalacza i wielkości wycinka) 3. Odwodnienie utrwalonego materiału (w etanolu lub w acetonie, od kilkunastu minut do kilku godzin) 4. Przepojenie 5. Zatopienie w parafinie (lub w innych mediach) 6. Skrawanie skrawków 8. Odparafinowanie skrawków 9. Uwodnienie skrawków 10. Barwienie 11. Odwodnienie skrawków 12. Zabezpieczenie preparatów 43 2015-11-29 Metody barwienia (kontrastowania) 1. 2. 3. 4. Histologiczne Histochemiczne Reakcje enzymatyczne Immunocytochemiczne 44 2015-11-29 Trzustka psa, pęcherzyki końcowe części egzokrynowe. Powiększenie: 960. Barwienie: H+E 45 2015-11-29 RER komórka pęcherzykowa trzustki nietoperza 46 2015-11-29 Komórki nerwowe zwoju rdzenowego kota. Powiększenie: 960. Barwienie: osmowanie wg. Kolatscheva + safranina 47 2015-11-29 Komórki nabłonkowe kanalików nerwowych. Powiększenie: 960 Barwienie: met. Fernandez-Galiano 48 2015-11-29 Ad. 2. Reakcje histochemiczne Wykrywanie ściśle określonych składników komórkowych 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. kationów (AS, Zn, Al., Mg, Cu, K, Na, Ca, Fe) anionów, węglanów i fosforanów białek i aminokwasów histonów kwasów nukleinowych lipidów wielocukrów hormonów Przykład: reakcja PAS na glikogen 49 2015-11-29 Reakcja PAS (Periodic Acid Schiff) Reakcja polega na utlenieniu kwasem nadjodowym sąsiadujących ze sobą grup OH. Powstałe w łańcuchu wielocukrów grupy aldehydowe reagują z odczynnikiem Shiffa dając purpurowy produkt reakcji. WYKONANIE REAKCJI: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Odparafinowane skrawki płukać w 70% alkoholu 5 min. w roztworze kw. Nadjodowego Przemyć w 70% alkoholu 1 min. w płynie redukującym Płukanie w 70% alkoholu Barwienie w odczynniku Schiffa Płukanie w bieżącej wodzie Odwodnienie 50 2015-11-29 Tkanka łączna prowadząca naczynia krwionośne w śliniance podżuchwowej. Powiększenie: 200. Barwienie: PAS. 51 2015-11-29 52 2015-11-29 Oil red O 53 2015-11-29 Czterotlenek osmu 54 2015-11-29 Histochemiczna analiza lipidów w zarodkach świni Czerwień oleista Siarczan błękitu Nilu zygota późna blastocysta rozwój in vivo i in vitro cytoplazma: wolne kwasy tłuszczowe krople tłuszczu: wolne kwasy tłuszczowe lipidy nasycone lipidy nienasycone nienasycone estry Osm - etanol Sudan czarny B Romek M, Gajda B, Krzysztofowicz E, Smorag Z. (2010) Theriogenology 74: 265–276 Reakcje enzymatyczne - kwaśna fosfataza 56 2015-11-29 Reakcje immunocytochemiczne 57 2015-11-29 Cytokeratin 7, nowotwór embrionalny 58 2015-11-29