Całkowity status antyoksydacyjny

CAŁKOWITY STATUS
ANTYOKSYDACYJNY
TYLKO DO ZASTOSOWAŃ BADAWCZYCH
Nr Kat.
NX 2332 5 x 10 ml
5 x 10 t
1. Bufor
2. Chromogen
3. Substrat
Standard
1 x 100 ml
5 x 10 ml
2x
5 ml
5x
1 ml
ZASADA OZNACZENIA
ABTS® (2,2'-Azyno-di-[sulfonian 3-etylbenztiazoliny]) jest
inkubowany przy uŜyciu peroksydazy (metmioglobina)
*+
i H2O2 w celu uzyskania rodniko-kationu ABTS® . Posiada
on względnie stabilny niebiesko-zielony kolor, który mierzy
się przy zastosowaniu długości fali światła wynoszącej 600
nm. Antyoksydanty w dodanej próbce powodują osłabienie
tworzenia się tego koloru w stopniu, który jest proporcjonalny do ich stęŜenia.
III
.
HX-Fe + H2O2
.
IV
ABTS® + X - [Fe = 0]
IV
X - [Fe = 0] + H2O
*+
ABTS® + HX - Fe
III
III
HX-Fe IV =
Metmioglobina
X - [Fe = 0] = Ferrylmioglobina
ABTS®= 2,2'-Azyno-di-[sulfonian 3-ethylbenzthiazoline]
ABTS® jest zarejestrowanym znakiem towarowym
naleŜącym do firmy Boehringer Mannheim.
PRÓBKA
ŚwieŜo pobrana surowica lub heparynizowane osocze.
NaleŜy unikać próbek, w których zaszła hemoliza. Próbka
moŜe być przechowywana
przez czas do 36 godzin w temo
peraturze od +2 do +8 C. Osocze/surowica mogą być
zamroŜone na czas do 14 dni. Unikać powtarzania cykli
zamraŜania i rozmraŜania.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
SKŁADNIKI
StęŜenie w teście
1. Bufor
Sól buforowana fosforanem
80 mmol/l, pH 7.4
2. Chromogen
Metmioglobina
6.1 mol/l
ABTS®
610 mol/l
3. Substrat
Nadtlenek wodoru (w ustabilizowanej formie) 250 mol/l
Standard
Kwas 6-hydroksy-2,5,7,8-tetrametylochroman
-2-karboksylowy
specyficzny dla danej serii
PRZYGOTOWANIE ROZTWORÓW
1. Bufor
Zawartość gotowa do uŜycia. Zachowuje stabilność do
upływu daty waŜności pod warunkiem, Ŝe jest przechowywany w temperaturze od +2 do +8°C.
2. Chromogen
Zrekonstytuować jedną fiolkę chromogenu 2 przy
uŜyciu 10 ml Bufora 1. Zachowuje stabilność przez 2
dni, pod warunkiem, Ŝe jest przechowywany w
o
temperaturze od +2 do +8 C lub przez 8 godzin w
o
temperaturze od +15 do +25 C.
3. Substrat
Rozcieńczyć 1 ml substratu 3 przy uŜyciu 1.5 ml Bufora
1. Zachowuje stabilność przez 24 godziny, pod warunkiem, Ŝe jest przechowywany w temperaturze od +2 do
o
+8 C. Stabilny w stanie nierozcieńczonym do upływu
daty waŜności, kiedy jest przechowywany w
o
temperaturze od +2 do +8 C.
Standard
Zrekonstytuować jedną fiolkę standardu przy uŜyciu 1
ml podwójnie dejonizowanej wody. Jest on stabilny
o
przez 2 dni w temperaturze od +2 do +8 C lub 1 mieo
siąc w -20 C.
Uwaga: JeŜeli tego oznaczenia uŜywa się w systemie
automatycznym, prosimy zapoznać się z arkuszem procedury dla danego systemu, poniewaŜ mogą występować róŜnice dotyczące sposobu rekonstytucji materiału.
PROCEDURA
Długość fali światła:
Kuweta:
Temperatura:
Pomiar:
600 nm
droga światła 1 cm
o
37 C
względem powietrza
Pipetować do kuwety:
DDH2O
Standard
Próbka
Chromogen
Ślepa
próba
Standard
Próbka
20 l
1 ml
20 l
1 ml
20 l
1 ml
Dobrze wymieszać, przeprowadzić inkubację w celu uzyskania odpowiedniej temperatury i zmierzyć początkową
wartość absorbancji (A1).
Substrat
200 l
200 l
200 l
Wymieszać i jednocześnie uruchomić czasomierz.
Zmierzyć absorbancję po upływie dokładnie 3 minut (A2)
A2 - A1 = -A próbki/standardu/ślepa próba (blank)
OBLICZENIA
Całkowity Status Antyoksydacyjny:
Współczynnik =
stęŜenie standardowe
(-A blank - -A standard)
mmol/l = Współczynnik x (-A Ślepa próba - -A Próbki)
UWAGA
WaŜne jest to, aby moŜliwie jak najdokładniej przestrzegać
czasów przeprowadzania określonych czynności w czasie
trwania reakcji. JeŜeli objętości, czasy inkubacji lub temperatury ulegną zmianie, wpłynie to na wynik oznaczenia.
KONTROLA JAKOŚCI
W celu zapewnienia kontroli dokładności i powtarzalności:Test kontrolny Randox Total Antioxidant Control Nr Kat.
NX 2331
LINIOWOŚĆ
Próbki o stęŜeniach większych niŜ 2.5 mmol/l powinny być
rozcieńczone przy uŜyciu 0.9% NaCl i oznaczenie powinno
zostać ponownie przeprowadzone. Rozcieńczenie próbki
powoduje przyrost wartości do 20% i jest to zalecane tylko
w przypadku, gdy jest absolutnie konieczne. Większość
próbek nie będzie wymagała rozcieńczenia, poniewaŜ
uzyskiwane wyniki będą niŜsze niŜ 2.5 mmol/l.
ZAKRESY REFERENCYJNE
Zakres: 1.30 - 1.77 mmol/l Osocze
Zakres ten został zmierzony dla europejskiej populacji roboczej. Zaleca się, aby kaŜde laboratorium określiło swój
własny zakres wartości prawidłowych, poniewaŜ mogą
występować lokalne róŜnice spowodowane na przykład
przez czynniki genetyczne.
OSTRZEśENIA DOTYCZĄCE BEZPIECZEŃSTWA
Tylko do prowadzenia badań diagnostycznych w warunkach in vitro. Nie pipetować przy uŜyciu ust. Zachować
typowe środki ostroŜności obowiązujące przy kontakcie
z odczynnikami stosowanymi w warunkach laboratoryjnych.
Na Ŝądanie dostępne są arkusze danych dotyczących
zdrowia i bezpieczeństwa Health and Safety Data Sheets.
PATENTY
Produkt ten jest objęty patentem UK Patent 2250819 i
patentami i aplikacjami wywodzącymi się z PCT Patent
Application PCT/GB91/02228.
Dodać:
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: [email protected] Website: www.randox.com
Α abcd ABC
INSTRUKCJA-CAŁKOWITY STATUS
ANTYOKSYDACYJNY- NX2332
LITERATURA
Miller, N.J., Rice-Evans, C., Davies, M.J., Gopinathan, V.
and Milner, A., Clinical Science (1993) 84, 407-412
Dostępne są aplikacje dla szeregu róŜnych analizatorów. W sprawie wymagań wynikających z indywidulanych potrzeb prosimy kontaktować się z firmą
Randox lub jej autoryzowanym przedstawicielem.
Wersja zweryfikowana 11/01/00am
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: [email protected] Website: www.randox.com
Α abcd ABC