VII. Fizjologia bakterii

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne
Ćwiczenie 1. Rodzaje pożywek i ich zastosowanie
a. Podłoże stałe - proste
Agar zwykły (AZ)
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
b. Podłoża wzbogacone
Agar z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK)
typ hemolizy………………………………………………………
wygląd kolonii………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
Bulion cukrowy (BC)
Typy wzrostu………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
c. Podłoża wybiórczo-namnażające
bulion z żółcią i zielenią brylantową
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………….………………………………………
………………………………………………………………………...
podłoże SF wg Leifsona
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
d. Podłoża wybiórczo-różnicujące
podłoże Chapmana (Ch)
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
podłoże Mac Conkey’a (MC)
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
e. Podłoża specjalne
podłoże Tarrozziego-Wrzoska
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
podłoże Löwensteina-Jensena
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
podłoże Sabourauda
…………………….………………………………………………..…
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………...
f. Podłoża transportowe
bakteriologiczny zestaw transportowy nr 1
…………………….………………………………………………..…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………….………………………………………………..…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………….………………………………………………..…………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Ćwiczenie 2. Badanie właściwości biochemicznych drobnoustrojów
a. wykonanie próby na katalazę
Zasada metody: Próbę wykonuje się przez umieszczenie badanych bakterii, pobranych z
hodowli na pożywce stałej, w kropli 3% wody utlenionej na szkiełku podstawowym.
Uwalnianie pęcherzyków tlenu świadczy o wyniku dodatnim - zdolności produkcji katalazy
Wykonanie:
1. Przygotować szkiełko podstawowe
2. Nanieść na szkiełko1 kropę 3% wody utlenionej
3. Wyjałowić i ostudzić ezę z oczkiem, pobrać 1 kolonię za pomocą jałowej ezy i umieścić w
3% wodzie utlenionej
4. Opisać zaobserwowane zmiany
Szczep badany
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus viridans
obserwowane wyniki
Wnioski ............................................................................................................................
b. wykonanie próby na oksydazę
Zasada metody: Pasek impregnuje się odczynnikiem na oksydazę (tetrametyl-pfenylodiamina) i kwasem askorbinowym. Bakterie wytwarzające oksydazę, w obecności tlenu
atmosferycznego i cytochromu c utleniają fenylodiaminę do indofenolu.
Wykonanie:
1. Dwa paski bibuły filtracyjnej położyć na szkiełka podstawowe i nasączyć paroma
kroplami odczynnika do wykrywania oksydazy
2. Jałową ezą pobrać 1 kolonię szczepu Pseudomonas aeruginosa i rozprowadzić na pasku,
następnie wyjałowić ezę i na drugi pasek pobrać szczep Escherichia coli
Zaobserwować zmianę zabarwienia w czasie 0.5 - 2 minut
Szczep badany
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia coli
obserwowane wyniki
Wnioski ............................................................................................................................
c. ocena zdolności biochemicznych bakterii na podłożach stałych i płynnych
podłoże Kliglera - badanie zdolności bakterii do rozkładu cukrów (glukoza, laktoza –
gazowo lub bezgazowo) oraz zdolności redukcji tiosiarczanu do siarkowodoru.
Podłoże czyste
Obserwowane zmiany
Wnioski ............................................................................................................................
woda peptonowa z 10% laktozą pod parafiną - badanie zdolności bakterii do rozkładu
laktozy w warunkach beztlenowych
Podłoże czyste
Obserwowane zmiany
Wnioski ............................................................................................................................
woda peptonowa z tryptofanem - badanie zdolności bakterii do rozkładu tryptofanu do
indolu
przed odczytem na powierzchnię podłoża nawarstwić 1-2 krople odczynnika Ehrlicha lub
Kovacha
Podłoże czyste
Obserwowane zmiany
Wnioski ............................................................................................................................
woda peptonowa z mannitolem i rurką Durhama - badanie zdolności bakterii do
gazowego rozkładu mannitolu
Podłoże czyste
Obserwowane zmiany
Wnioski ............................................................................................................................
podłoże Christensena - badanie zdolności bakterii do wytwarzania ureazy i rozkładu
mocznika
Podłoże czyste
Obserwowane zmiany
Wnioski ............................................................................................................................
d. wykorzystanie komercyjnych testów API do oceny zdolności biochemicznych bakterii
Zasada metody: Sprawdzanie właściwości biochemicznych drobnoustrojów jest jednym z
etapów diagnostyki mikrobiologicznej. W badaniach tych wykorzystuje się najczęściej
reakcje kataboliczne, tj. zdolność do rozkładu substratów za pomocą enzymów
komórkowych. Produkty tych reakcji wykrywa się za pomocą wskaźników, odczynników lub
specjalnych testów. Paski API 20 E składają się z 20 mikroprobówek zawierających
odwodnione substraty. Integralną częścią testu API 20 E jest też test na oksydazę. Substraty
zostają uwodnione poprzez dodanie zawiesiny bakterii. Uwodnione substraty stanowią
również podłoża do hodowli bakterii. Procesy metaboliczne zachodzące podczas inkubacji
powodują zmiany koloru, które są albo spontaniczne, albo wywołane przez dodanie
odczynników.
Odczyt testu:
Dodać do mikroprobówek TDA, VP, IND odpowiednie odczynniki wg schematu:
1. test TDA: dodać 1 kroplę odczynnika TDA (chlorek żelaza). Czerwono-brązowy kolor
wskazuje na reakcję pozytywną
2. test VP: dodać po 1 kropli z każdego odczynnika VP1 (α-naftol) i VP2 (KOH).
Odczekać przynajmniej 10 min; różowy lub czerwony kolor wskazuje na reakcję
pozytywną; jeśli po 10 min pojawi się blado różowy kolor, reakcję należy uznać za
negatywną
3. test IND: dodać 1 kroplę odczynnika JAMES; różowy kolor powstający w całej
probówce wskazuje na reakcję pozytywną
Odczytać pozostałe testy wg załączonej instrukcji a wyniki wpisać do tabeli:
TEST
wynik
Określana cecha
ONPG
ADH
LDC
ODC
CIT
H2S
URE
TDA
IND
VP
GEL
GLU
MAN
INO
SOR
RHA
SAC
MEL
AMY
ARA
OX
Wnioski:........................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................
.......................................................................................................................................................