Nr kat. IR620
Transkrypt
Nr kat. IR620
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Cytokeratin 17 Clone E3 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR620 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Cytokeratin 17, klon E3, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało jest przydatne w identyfikacji raków płaskokomórkowych (1, 2) oraz gruczolakoraków trzustki (3) i raka sutka (4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Cytokeratyny 17 naleŜą do filamentów pośrednich, tworzących cytoszkielet w prawie wszystkich komórkach eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) naleŜą do rodziny wysoce złoŜonych białek wielogenowych, o masach cząsteczkowych w zakresie od 40 do 68 kDa. CK powszechnie uwaŜane są za najwaŜniejsze markery róŜnicowania nabłonka i do chwili obecnej w róŜnych typach nabłonka ludzkiego wyodrębniono 20 ich odmian (5). CK moŜna podzielić na odmiany kwaśną typu A (klasa I) i obojętno-zasadową typu B (klasa II). CK 17 jest białkiem o masie 46 kDa, które naleŜy do podrodziny A odmiany kwaśnej. Rozkład jego ogranicza się do komórek warstw podstawnych i mioepitelialnych grupy nabłonków złoŜonych i nabłonka przejściowego oraz do zewnętrznej otoczki pnia mieszka włosowego (6). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: E3 (6). Izotyp: IgG2b, kappa. Immunogen Frakcja cytoszkieletu szczurzego nabłonka okręŜnicy (6). Swoistość W jedno i dwuwymiarowej analizie SDS-PAGE i teście immunoblot preparaty cytoszkieletu ekstrahowanego z kilku hodowli komórek i tkanek za pomocą Triton X-100 przeciwciało znakowało prąŜek odpowiadający ludzkiej cytokeratynie 17 (6). Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. (117667-002) Dako Denmark A/S IR620/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować skórę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki nadpodstawne utrwalonego w formalinie nabłonka przełyku (7) i komórki warstwy podstawnej błony śluzowej oskrzeli (1). W szyjce macicy przeciwciało znakuje rezerwowe komórki wewnątrzszyjkowe (2). W przypadku sutków przeciwciało znakuje warstwę podstawną nabłonka przewodowego sutka (4). W skórze komórki mioepitelialne gruczołów potowych wykazują umiarkowany lub silny odczyn plazmatyczny, natomiast w komórkach nabłonka płaskiego brak odczynu. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakowało komórki warstwy rogowaciejącej w 10/22 przypadki inwazyjnego raka przełyku (7). W przypadku badania krtani zaobserwowano odczyn w dysplazji i raku płaskonabłonkowym (8). Przeciwciało znakowało komórki warstwy podstawnej i nadpodstawnej w rozroście komórek podstawnych oraz warstwy komórek podstawnych, pośrednich i szczytowych w metaplazji komórek płaskich błony śluzowej oskrzeli (1). W badaniu raka szyjki macicy przeciwciało znakowało przypadki metaplazji nabłonka w niedojrzały nabłonek wielowarstwowy płaski oraz rogowaciejące i nierogowaciejące raki płaskonabłonkowe (2). W róŜnych podtypach raków gruczołowych trzustki przeciwciało znakowało 38/46 przypadków raka przewodowego trzustki, 5/6 przypadków raka bańki wątrobowo-trzustkowej pochodzącego z przewodów trzustkowo-Ŝółciowych, 17/24 przypadków raka wewnątrzwątrobowych dróg Ŝółciowych, natomiast przeciwciało znakowało tylko 8/184 przypadków raków gruczołowych (typu innego niŜ śluzowe) spoza przewodów trzustkowo-Ŝółciowymi (3). W rakach sutka przeciwciało znakowało 75/532 przypadki (4). Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Fisseler-Eckhoff A, Erfkamp S, Müller K-M. Cytokeratin expression in preneoplastic lesions and early squamous cell carcinoma of the bronchi. Path Res Pract 1996: 92:552-559. Smedts F, Ramaekers F, Link M, Lauerova L, Troyanovsky S, Schijf C, Vooijs G P. Detection of keratin subtypes in routinely processed cervical tissue: implications for tumour classification and the study of cervix cancer aetiology. Virchows Archiv 1994:425:145-155. Chu P G, Schwarz R E, Lau S K, Yen Y, Weiss L M. Immunohistochemical staining in the diagnosis of pancreatobiliary and Ampulla of Vater adenocarcinoma. Am J Surg Pathol 2005:29:359-367. van de Rijn M, Perou C M, Tibshirani R, Haas P, Kallioniemi O, Kononen J, Torhost J, et al. Expression of cytokeratins 17 and 5 indentifies a group of breast carcinomas with poor clinical outcome. Am J Pathol 2002:161:1991-1996. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris, editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62. Troyanovsky SM, Guelstein VI, Tchipysheva TA, Krutovskikh VA, Bannikov GA. Patterns of expression of keratin 17 in human epithelia: dependency on cell position. J Cell Sci 1989;93:419-26. Takahashi H, Shikata N, Senzaki H, Shintaku M, Tsubura A. Immunohistochemical staining patterns of keratins in normal oesophageal epithelium and carcinoma of the oesophagus. Histopathology 1995;26:4 Cohen-Kerem R, Madah W, Sabo E, Rahat M A, Greenberg E, Elmalah I. Cytokeratin-17 as a potential marker for squamous cell carcinoma of the larynx. Ann Otol Laryngol 2004:113:821-827. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (117667-002) Dako Denmark A/S IR620/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17