INFORM EBER (Epstein-Barr Virus Early RNA) Probe

INFORM EBER (Epstein-Barr Virus Early RNA) Probe
800-2842
05278660001
50
PRZEZNACZENIE
Sonda INFORM EBER Probe firmy Ventana Medical Systems, Inc. (Ventana) jest
przeznaczona do identyfikacji metodą hybrydyzacji in situ (ISH) i mikroskopii świetlnej
komórek posiadających fragment RNA (kwasu rybonukleinowego) kodowany przez wirus
Epstein-Barr (EBER) w skrawkach tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w
parafinie. Sonda INFORM EBER Probe swoiście hybrydyzuje do transkryptów EBER
RNA. Dodatnie wyniki oznaczenia pomagają w rozpoznaniu komórek zakażonych
wirusem Epstein-Barr. Sonda INFORM EBER Probe jest przeznaczona do użycia z
zestawem ISH iVIEWBlue Detection Kit oraz innymi odczynnikami pomocniczymi do
barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w obojętnej zbuforowanej formalinie i
zatopionych w parafinie lub preparatów cytologicznych w automatach z rodziny
BenchMark, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA.
Wystąpienie reakcji barwnej lub jej brak stwierdza się pod mikroskopem świetlnym.
Dodatni wynik ułatwia klasyfikację próbek prawidłowych i zmienionych chorobowo, służąc
jako metoda uzupełniająca konwencjonalne badanie histopatologiczne lub
cytopatologiczne. Interpretacja kliniczna każdego stwierdzonego wybarwienia lub jego
braku powinna być uzupełniona badaniami morfologicznymi oraz wykonywaniem
odpowiednich prób kontrolnych. Ocena wyniku powinna być dokonywana przez
wykwalifikowanego patologa, z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników
innych metod diagnostycznych.
Ten produkt przeznaczony jest do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
ZASADY PROCEDURY
INFORM EBER Probe jest produktem przeznaczonym do użycia z zestawemVENTANA
ISH iVIEWBlue Detection Kit oraz odczynnikami pomocniczymi w aparatach do barwienia
BenchMark, BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
Zestaw do wykrywania zawiera przeciwciało pierwotne oraz przeciwciało wtórne
sprzężone z biotyną, które z kolei sprzężone są z peroksydazą chrzanową (HRP) lub
fosfatazą alkaliczną (AP) stosowaną w charakterze enzymu chromogenicznego. W
procesie barwienia błękitem ISH następuje hybrydyzacja sond znakowanych fluoresceiną
ze swoistymi sekwencjami RNA wykrywanymi w komórkach lub tkankach. Kolejny etap
stanowi dodanie koniugatu streptawidyna–enzym AP (fosfataza alkaliczna), który wiąże
się z biotyną obecną na przeciwciałach wtórnych. Sonda znakowana fluoresceiną jest
następnie uwidaczniana za pomocą fosforanu 5-bromo-4-chloro-3-indolylu (BCIP) oraz
błękitu tetrazolowego (NBT) — w postaci niebieskiego osadu łatwego do wykrycia pod
mikroskopem świetlnym.
Protokół barwienia obejmuje wiele kroków, w których odczynniki są inkubowane przez
odpowiedni czas i w konkretnych temperaturach. Po zakończeniu każdego kroku inkubacji
automat BenchMark, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA do barwienia preparatów
płucze skrawki w celu usunięcia niezwiązanego materiału, a następnie nakłada roztwór
nakrywający, który minimalizuje parowanie odczynników na bazie wody z powierzchni
szkiełka zawierającego preparat. Interpretacji wyników dokonuje się przy użyciu
mikroskopu świetlnego. Wyniki pomagają w diagnostyce różnicowej procesów
patofizjologicznych, które mogą, ale nie muszą mieć związku z dodatnim odczynem
wywoływanym przez sondę.
Rysunek 1 przedstawia reakcję Blue ISH.
Blue Signal
Enhancer
BCIP
NBT
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Wirus Epsteina-Barra (Epstein-Barr Virus (EBV), który zakaża limfocyty B, jest przenoszony
przede wszystkim za pomocą śliny. EBV należy do rodziny wirusów Herpes (wirusy
opryszczki). Objawy kliniczne zakażenia obejmują immunosupresję oraz niezwykłą ekspansję
atypowych limfocytów T CD8+. W tych komórkach EBV powoduje utajone, trwające przez
całe życie zakażenie i w tym czasie zaledwie kilka genów wirusa ulega ekspresji.
Do dwudziestego roku życia u >90% populacji stwierdza się kontakt z EBV. Wirus EBV
jest potencjalnie onkogenny i łączono go z chłoniakiem Burkitt’s, rakiem nosogardzieli,
chłoniakiem z komórek B, poprzeszczepowym zespołem limfoproliferacyjnym, a niedawno
z chorobą Hodgkin’s (ziarnicą złośliwą), chłoniakami z obwodowych komórek T oraz
rakiem żołądka. EBV wykrywany jest także u chorych na AIDS.1,2
Każdy test INFORM EBER zawiera mieszankę sond oligonukleotydowych znakowanych
fluoresceiną w rozpuszczalniku formamidowym. Niniejsza sonda została zaprojektowana
do stosowania razem z automatami do barwienia preparatów BenchMark, BenchMark XT
lub BenchMark ULTRA. Test INFORM EBER jest stosowany do wykrywania wczesnych
transkryptów RNA związanych z zakażeniem wirusem EBV. Transkrypty RNA gromadzą
się w jądrach komórek zainfekowanych wirusem EBV.
Streptavidin Alkaline
Phosphatase (SA-AP)
Biotinylated Goat
anti-Mouse Antibody
Mouse antiFluorescein
Antibody
HO
O
O
O
Fluorescein hapten
COOH
Fluorescein-labeled
Probe
Target
Sequence
Region
ISH iVIEWBlue Detection
Rysunek 1. Blue ISH Reakcja
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
Rysunek 1. Ilustracja próbki wybarwionej za pomocą sondy VENTANA INFORM EBER
Probe. Ciemnoniebieskie miejsca oznaczają zainfekowane komórki.
2012-01-09
1/4
INFORM EBER Probe zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań.
Jeden dyspenser 5 ml odczynnika INFORM EBER Probe zawiera około 750 ng/ml sond
znakowanych fluoresceiną w buforze hybrydyzacyjnym na bazie formamidu.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA dołączonej do
opakowania, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady
przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do
zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości,
(5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
16269PL Rev E
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
PROCEDURA BARWIENIA
Razem z zestawem nie są dostarczane takie odczynniki, jak zestawy detekcyjne
VENTANA i składniki pomocnicze.
Sondy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w automatach do barwienia
BenchMark, BenchMark XT i BenchMark ULTRA razem z zestawami do detekcji i
akcesoriami firmy VENTANA.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury hybrydyzacji in situ (ISH) znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania
odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także ze względu na warunki
środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być zwiększenie lub
zmniejszenie hybrydyzacji sondy i kondycjonowania komórek lub wstępna obróbka proteazą dla
poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej metody detekcji i preferencji badacza.
PRZECHOWYWANIE
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego podawania i stabilności sondy, po każdym użyciu należy
założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dyspenser w lodówce w pozycji pionowej.
Na każdym dyspenserze sondy podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany
odczynnik pozostaje stabilny do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować
odczynnika po upływie terminu ważności.
PRZYGOTOWANIE PREPARATU
Do stosowania z tą sondą nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w
formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania automatu do barwienia
BenchMark, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania
tkanek jest 10% obojętna zbuforowana formalina (NBF).2 Tabela 1 zawiera listę
zalecanych środków utrwalających oraz środków utrwalających niekompatybilnych z tą
sondą. Z pytaniami dotyczącymi zalecanych środków utrwalających należy zwracać się do
lokalnego przedstawiciela serwisu.
Zalecane środki utrwalające
Niekompatybilne środki utrwalające
Obojętna zbuforowana formalina (NBF)
Formalina z cynkiem
Alkoholowy roztwór formaliny
PREFER
Bouin’s
Mieszanina alkoholu, kwasu octowego i
formaliny (AFA)
Tabela 1. Zalecane i niekompatybilne środki utrwalające
Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ reaktywność sekwencji kwasów
nukleinowych w ciętych skrawkach tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Wycinki grubsze niż 4 µm mogą wymagać silniejszego traktowania proteazą niż w
warunkach zalecanych i mogą przejawiać większe pęcherzenie jądrowe niż wycinki
cieńsze ze względu na nadmiar parafiny w tkance. Pęcherzyki jądrowe mają postać
dużych lub małych pęcherzyków lub przegrody w jądrze. Zwykle artefakt ten nie wpływa
na zliczanie sygnałów. Jednak w przypadkach nasilonego występowania pęcherzyków
jądrowych może dojść do takiego zniekształcenia obrazu jąder lub sygnałów, że ich
zliczenie będzie niemożliwe. Próbki takie mogą wymagać odparafinowania w łaźniach
ksylenowych i alkoholowych, a następnie powtórzenia odczynu w urządzeniu, bądź też
użytkownik może wybrać opcję przedłużonego odparafinowania w procedurze barwienia
(patrz Rozwiązywanie problemów).
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Ostrzeżenie, produkt zawiera formamid. Formamid jest toksyczny drogą wziewną
i umiarkowanie toksyczny w przypadku połknięcia. Jest drażniący dla skóry, oczu i
błon śluzowych oraz jest wchłaniany przez skórę. Może być szkodliwy dla płodu.
Podczas pracy z odczynnikami należy zachować środki ostrożności. Postępując z
materiałami podejrzewanymi o karcynogenność lub toksycznymi, należy nosić
jednorazowe rękawice i odpowiednią odzież ochronną.
Przed rozpoczęciem barwienia w aparacie należy się upewnić, że pojemnik na
zlewki jest pusty. Nieprzestrzeganie tej instrukcji może spowodować przepełnienie
pojemnika na zlewki, co może doprowadzić do pośliźnięcia i upadku.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
potencjalnie niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych
środków ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. W przypadku
kontaktu z wrażliwymi miejscami obficie spłukiwać wodą. Unikać wdychania oparów
odczynników.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników, ponieważ mogłoby to
doprowadzić do uzyskania błędnych wyników.
Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody utylizacji produktu, należy
skontaktować się z odpowiednimi instytucjami lokalnymi lub krajowymi.
Dodatkowe informacje znaleźć można w karcie charakterystyki bezpieczeństwa
produktu.
2012-01-09
2/4
Odwodnienie iVIEWBlue Assay
Firma Ventana zaleca następującą procedurę.
1.
Aby usunąć płynne szkiełko, opłukać szkiełka w 2 zmianach łagodnego roztworu
detergentu do mycia naczyń (nie używać detergentów przeznaczonych do
zmywarek automatycznych).
2.
Dokładnie przepłukać preparaty wodą destylowaną. Płukać przez około 1 minutę.
Strząsnąć nadmiar wody.
3.
Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (80%) na około 1 minutę.
4.
Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (90%) na około 1 minutę.
5.
Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (100%) na około 1 minutę.
6.
Przenieść preparaty do drugiej kąpieli etanolowej (100%) na około 1 minutę.
7.
Przenieść preparaty do kąpieli acetonowej i zanurzyć kolejno 10 razy.
8.
Przenieść preparaty do pierwszej kąpieli ksylenowej na około 30 sekund.
9.
Przenieść preparaty do drugiej kąpieli ksylenowej na około 30 sekund.
10. Umieścić szkiełka nakrywkowe na preparatach.
Uwaga: aby zagwarantować całkowite odwodnienie, należy często zmieniać kąpiele
etanolowe. Można także dodać trzecią kąpiel w etanolu 100%.
Procedury kontroli jakości
Dodatnie preparaty kontrolne
Każda wykonywana procedura barwienia musi uwzględniać badanie dodatnich preparatów
kontrolnych. Kontrole potwierdzają, że sonda została faktycznie zastosowana i że aparat
działał prawidłowo. Preparat powinien zawierać zarówno komórki bądź składniki tkankowe
dające dodatnią, jak i ujemną reakcję barwną. W charakterze preparatów kontrolnych należy
używać materiału cytologicznego, biopsyjnego, pobranego chirurgicznie lub świeżego
materiału z autopsji, jak najszybciej przygotowanego i utrwalonego w identyczny sposób, jak
próbki pochodzące od pacjenta. Kontrolom takim powinny być równolegle poddawane
wszystkie etapy procedury, od przygotowania do barwienia. Użycie próbek utrwalonych lub
przetworzonych inaczej niż próbki pochodzące od pacjenta umożliwia wyłącznie potwierdzenie
prawidłowego działania odczynników i aparatu. Do optymalnej kontroli jakości i wykrywania
nieznacznego pogorszenia jakości odczynników lepiej nadają się preparaty dające słaby, a nie
silny odczyn dodatni. Jeżeli za pomocą dodatnich kontroli nie udaje się potwierdzić dodatniego
wyniku barwienia, należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne.
Odczynnik do kontroli ujemnej
Każda wykonywana procedura barwienia musi uwzględniać badanie ujemnych prób
kontrolnych. Ma to na celu monitorowanie niepożądanej reaktywności krzyżowej sond i
przeciwciał ze składnikami komórkowymi. W charakterze ujemnego i dodatniego
preparatu kontrolnego można używać tego samego preparatu. W charakterze
wewnętrznej kontroli ujemnej można wykorzystywać różne próbki pochodzące z
większości tkanek. Preparaty do kontroli ujemnej powinny zostać zweryfikowane przez
Użytkownika. Składniki z założenia niepodlegające barwieniu powinny wykazywać brak
odczynu swoistego i dostarczać informacji o odczynie tła. Jeżeli w badaniu preparatów
stanowiących ujemną próbę kontrolną uzyskuje się niepożądane wybarwienie, wyniki
uzyskane dla próbek pochodzących od pacjenta należy uznać za nieważne.
Odczynnik do kontroli dodatniej
Do weryfikacji testu i przy rozwiązywaniu problemów powinien być używany dodatni
odczynnik kontrolny, ponieważ dostępność DNA i RNA może zależeć od metody
utrwalania i sposobu obróbki wstępnej preparatu.
Odczynnik do kontroli ujemnej
Dla każdego barwionego preparatu należy zastąpić sondę ISH odczynnikiem do kontroli
ujemnej. Kontrola ujemna pomoże w interpretacji wyników badań materiału pochodzącego
od pacjentów. Dostarcza ona informacji o nieswoistym wybarwieniu tła w każdym
preparacie. Zamiast sondy ISH należy do barwienia użyć kontroli ujemnej VENTANA ISH
Negative Control lub Negative Control Probe. Okres inkubacji powinien być taki sam, jak
dla sondy.
16269PL Rev E
Kontrola ujemna jest szczególnie ważna wobec faktu, że jelitowa postać fosfatazy
zasadowej może występować w komórkach innych, niż komórki nabłonkowe rąbka
szczoteczkowego jelit. Ponadto w procesie utrwalania mogą zachować się enzymy zdolne
do rozkładu błękitu tetrazolowego.
Niewyjaśnione rozbieżności
Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do
lokalnego przedstawiciela odpowiedzialnego za wsparcie techniczne. Jeśli jakość wyników
kontrolnych nie jest zgodna ze specyfikacją, wyniki uzyskane dla preparatów z próbek
pochodzących od pacjentów są nieważne. Zob. sekcja Rozwiązywanie problemów
w niniejszej ulotce. Należy zidentyfikować i wyeliminować problem, a następnie powtórzyć
badanie próbek pochodzących od pacjenta.
Weryfikacja barwienia
Przed pierwszym użyciem odczynnika w procedurze diagnostycznej należy zweryfikować jego
działanie w drodze testów na szeregu dodatnich i ujemnych preparatów kontrolnych o znanej
charakterystyce w badaniach ISH (zob. Procedury kontroli jakości opisane wcześniej w tej
sekcji ulotki oraz zalecenia Amerykańskiego Programu Akredytacji Pracowni Patologicznych
College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology
Checklist,4 oraz NCCLS Approved Guideline5). Procedury kontroli jakości należy powtarzać dla
każdej nowej partii odczynników lub każdorazowo po zmianie parametrów testu.
Interpretacja wyników
Zautomatyzowana procedura barwienia preparatów w aparatach VENTANA powoduje
wytrącanie się niebieskiego produktu reakcji w miejscach występowania wykrywanych
fragmentów DNA lub RNA związanych z oznakowaną sondą. Przed przystąpieniem do
interpretacji wyników wykwalifikowany patolog z doświadczeniem w badaniach ISH musi
ocenić dodatnie i ujemne preparaty kontrolne.
Kontrole
W pierwszej kolejności należy zbadać kontrolę dodatnią, aby upewnić się, że wszystkie
odczynniki działają prawidłowo. Obecność niebieskiego produktu reakcji w komórkach
zawierających wykrywane fragmenty świadczy o zajściu reakcji dodatniej.
Kontrolę ujemną należy przeanalizować po kontroli dodatniej, w celu zweryfikowania
swoistości reakcji. W kontroli ujemnej nie powinien występować odczyn swoisty.
Występowanie zabarwienia może świadczyć o nieswoistej reaktywności krzyżowej z
komórkami lub składnikami komórkowymi. Do interpretacji odczynu należy wybierać
jedynie komórki nienaruszone, gdyż w komórkach martwiczych lub zdegenerowanych
często występują odczyny nieswoiste.
Jeżeli w kontrolach dodatnich lub ujemnych nie uda się otrzymać prawidłowej reakcji
barwnej, należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne.
Próbki pochodzące od pacjenta
Próbki pochodzące od pacjenta należy zbadać jako ostatnie. Intensywność odczynu
dodatniego należy oceniać w kontekście barwienia tła występującego w próbce z
odczynnikiem kontroli ujemnej. Wynik ujemny oznacza, że nie wykryto poszukiwanej
sekwencji DNA lub RNA, a nie że sekwencja taka nie występuje w badanych komórkach.
Dokonując interpretacji wyników ISH, należy także ocenić morfologię każdej próbki na
podstawie skrawka wybarwionego hematoksyliną i eozyną. Wyniki badań morfologii pacjenta
oraz istotne dane kliniczne powinny być interpretowane przez wykwalifikowanego patologa.
OGRANICZENIA
2.
3.
4.
Wybarwienie tkanek zależy od sposobu postępowania i przygotowania tkanek przed
barwieniem. Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie, przemywanie,
suszenie, ogrzewanie lub zanieczyszczenie skrawków domieszką innych tkanek lub
płynów może powodować artefakty, wychwytywanie przeciwciał lub wyniki fałszywie
ujemne. Przyczyną sprzecznych wyników może być stosowanie zmiennych metod
utrwalania i zatapiania lub właściwości zależne od tkanek.
Nadmierne lub niecałkowite barwienie kontrastowe może utrudniać prawidłową
interpretację wyników.
Ze względu na różnice w metodach obróbki materiału może zajść konieczność
wydłużenia lub skrócenia czasu trawienia proteazą ISH albo użycia innej proteazy
ISH w poszczególnych preparatach. Każda taka zmiana musi być zweryfikowana
przez użytkownika. Użytkownicy stosujący procedury odbiegające od zalecanych są
odpowiedzialni za interpretację wyników pacjenta w zmienionych warunkach badania.
W tkankach, które nie zostały uprzednio przetestowane, odczynniki mogą
wykazywać nieoczekiwane reakcje. Nie można wykluczyć wystąpienia
nieoczekiwanych reakcji w przetestowanych tkankach z uwagi na zmienność
biologiczną tkanek. Udokumentowane nieoczekiwane reakcje należy zgłaszać
lokalnemu przedstawicielowi odpowiedzialnemu za wsparcie techniczne.
2012-01-09
1.
2.
3.
4.
3/4
Wykazano, że środek utrwalający Bouin’s jest niekompatybilny z sondami ISH. W
próbkach utrwalonych środkiem Bouin’s nie powiodła się detekcja ani jednej kopii genu.
Nie zaleca się stosowania z tym testem środka utrwalającego AFA.
Tkanki utrwalane w formalinie cynkowej nie są barwione równie niezawodnie, jak
tkanki utrwalone w roztworze 10% NBF lub formalinie alkoholowej.
W przypadku stosowania sond znakowanych fluoresceiną razem z zestawem ISH
iVIEWBlue detection kit może wystąpić odczyn cytoplazmatyczny i/lub jądrowy w
komórkach tkanek przewodu pokarmowego. Do wykrycia takiego odczynu
niezbędne jest zastosowanie sondy kontrolnej Negative Control Probe.
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
1.
2.
3.
4.
VENTANA Sonda INFORM EBER Probe, ISH iVIEWBlue Detection Kit i odczynniki
pomocnicze stosowane w automacie do barwienia preparatów VENTANA powodują
wytrącanie niebieskiego osadu w miejscach występowania wykrywanych sekwencji
zlokalizowanych przez sondy ISH.
Weryfikację czułości sondy INFORM EBER Probe przeprowadzono przy użyciu
zestawu ISH iVIEWBlue Detection Kit. Zbadano następujące tkanki: peletkę
zawierająca trombinę, serce myszy SCID, masę z jamy brzusznej, 2 próbki wątroby,
2 próbki mózgu, 3 próbki peletek zawierających agar oraz 10 próbek węzłów
chłonnych. Dla wszystkich 20 próbek tkankowych wykazano akceptowalną
charakterystykę barwienia.
Wynik weryfikacji swoistości sondy INFORM EBER Probe nie wykazał obecności
reakcji krzyżowych na tkanki dodatnie w kierunku wirusa HIV. Ponadto nie
stwierdzono występowania reakcji krzyżowych na próbki tkanek w mikromacierzy
Tour of Body (TOB) zawierającej 29 różnych typów tkanek.
Powtarzalność barwienia dla sond INFORM EBER Probes wyznaczono, barwiąc
pięć próbek tkanek dodatnich w kierunku EBV oraz trzy dodatnie i ujemne kontrolne
linie komórkowe na pięciu automatach do barwienia BenchMark, z których jeden
stosowano do dwóch serii oznaczeń. Powtarzalność dla intensywności sygnału
wyniosła 100%, przy czym wszystkie wybarwione próbki charakteryzowały się
porównywalną intensywnością sygnału. Całkowita powtarzalność dla barwienia tła
wykazała obecność 98% wybarwionych próbek z porównywalnym tłem.
ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW
Problem
Rozwiązanie
Kontrola dodatnia daje wynik
ujemny.
Sprawdzić, czy na szkiełku znajduje się
odpowiednia etykieta z kodem kreskowym.
Tkanka jest zmywana ze szkiełek.
Stosować tylko szkiełka naładowane dodatnio.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
Ograniczenia ogólne
1.
Ograniczenia swoiste
4.
5.
Ambinder RF, et al. Epstein-Barr-Encoded RNA In Situ Hybridization: Diagnostic
Applications. Human Pathology 1994;25:602-605.
Randhawa PS, et al. Renal Allograft Involvement by Epstein-Barr Virus Associated
Post-transplant Lymphoproliferative Disease. American Journal of Surgical
Pathology 1996;20(5):563-571.
College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic
Pathology Checklist, 2001.
CLSI (formerly NCCLS). Quality Assurance for Immunocytochemistry: Approved
Guideline. NCCLS document MM4-A- (ISBN 1-56238-396-5). NCCLS, 940 West
Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 1999.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition.
Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
INFORM, VENTANA, BENCHMARK, ultraView oraz logo VENTANA są znakami
towarowymi firmy Roche.
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
Ventana Medical Systems, Inc. udziela nabywcy licencji na jednorazowe wykorzystanie
rozwiązań objętych patentami USA nr 6045759, 6945128 i 7378058 oraz ich
odpowiednikami w innych krajach.
© 2012 Ventana Medical Systems, Inc.
16269PL Rev E
DANE TELEADRESOWE
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
www.ventana.com
2012-01-09
4/4
16269PL Rev E