Analiza cytologiczna i molekularna dwóch linii

PROJEKT realizowany w Zakładzie Cytologii
Analiza cytologiczna i molekularna dwóch linii indukowanych komórek pluripotencjalnych
iPS NNeo oraz iPS BC1W65.5
opieka merytoryczna i metodyczna dr Iwona Grabowska, dr Karolina Archacka
opieka metodyczna Katarzyna Ilach
12 osób – 6 z koła Epigenetyki oraz 6 z koła Biologii Medycznej – 6 zespołów dwuosobowych
0. Przygotowanie szkła laboratoryjnego, roztworów, miejsca pracy i inne niezbędne czynności
1. Przygotowanie MEF i hodowla komórek iPS.
A. uzyskiwanie inaktywowanych mysich zarodkowych fibroblastów (MEF) – 3 tygodnie – 4 osoby
B. nauka hodowli komórek iPS – max. 12 osób – 2 tygodnie
2. Analiza komórek iPS.
A. Genotypowanie komórek iPS – 2 osoby
hodowla komórek iPS – 7 dni (codzienna zmiana pożywki)
izolacja DNA – 2 dni
reakcja PCR – 1 dzień
elekroforeza, dokumentacja wyników – 1 dzień
B. Kariotypowanie komórek iPS – 2 osoby
hodowla komórek iPS – 7 dni (codzienna zmiana pożywki)
utrwalenie, przygotowanie komórek, wykonanie rozrzutów – 3 dni
barwienie preparatów – 1 dzień
analiza preparatów - ± ∞
C. Krzywa wzrostu komórek iPS – 2 osoby
hodowla komórek iPS – 1 tydzień (codzienna zmiana pożywki)
codzienne określanie liczby komórek (przez ok. 7 dni! po min.. 2 godziny dziennie)
podsumowanie wyników – 1 dzień
D. Porównanie różnicowania komórek iPS – 6 osób
hodowla komórek iPS w pożywce zawierającej LIF – 3 dni – (codzienna zmiana pożywki) pasażowanie i/lub utrwalenie
hodowla komórek iPS w pożywce bez LIF – 7 dni (codzienna zmiana pożywki)
utrwalenie
1) barwienie barwnikiem Giemsy i May-Grunwalda – 2 osoby
2) immunolokalizacja markerów pluripotencji i różnicowania – 2 osoby
3) immunolokalizacja zmodyfikowanych epigenetycznie histonów – 2 osoby
analiza preparatów - ± ∞
Przybliżony plan zadań
tydzień
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
0
1A
1B
2A
Zadanie
2B
2C
2D.1
2D.2
2D.3
opracowanie i podsumowanie wyników
przygotowanie sprawozdania/plakatu
analiza preparatów, która może być wykonana w „dowolnym” czasie