OCENA WZROSTU SIEWEK JABŁONI `ANTONÓWKA
Transkrypt
OCENA WZROSTU SIEWEK JABŁONI `ANTONÓWKA
ZESZYTY NAUKOWE INSTYTUTU SADOWNICTWA I KWIACIARSTWA TOM 16 2008 OCENA WZROSTU SIEWEK JABŁONI ‘ANTONÓWKA’ UPRAWIANYCH W GLEBIE „ZMĘCZONEJ” I PO ZABIEGACH POPRAWIAJĄCYCH JEJ WŁAŚCIWOŚCI Evaluation of the growth of ‘Antonowka’ apple seedlings cultivated in a replant soil and after treatments to improve its properties D a n u t a K r z e w i ńs k a , W a l d e m a r T r e d e r , K r z y s z t o f K l a m k o w s k i , A n n a T r y n g i e l - G a ć, Piotr Sobiczewski Instytut Sadownictwa i Kwiaciarstwa w Skierniewicach ul. Pomologiczna 18, 96-100 Skierniewice e-mail: [email protected] ABSTRACT The aim of the study, conducted in a greenhouse during 2006 and 2007, was to determine the effectiveness of some plants cultivated as a cover crop in eliminating apple replant disease. In a soil with replant disease symptoms, wheat (Triticum vulgare Vill.), triticale (Triticosecale Wittm.), or white mustard (Sinapis alba L.) were cultivated for 1, 2, or 3 successive cycles. In each cycle, the cover plants were grown for 4 weeks, and afterwards their roots were crushed and mixed with the soil. Moreover, trials were conducted to eliminate the disease by adding white mustard seed meal (1.0% v/v) to the soil. ‘Antonowka’ apple seedlings (8 weeks old) were then planted in the treated soil, and after 12-13 weeks their vegetative growth parameters were determined. It was found that almost all of the applied treatments stimulated the vegetative growth of apple seedlings, especially of their above-ground parts. A particularly promoting effect in that respect was obtained after the application of white mustard plant and seed matter. The cultivation of cereals, especially of winter wheat in 3 cycles, significantly reduced the severity of apple replant disease. Key words: soil, replant disease, cover crop, vegetative growth 52 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa, tom 16 WSTĘP „Zmę czeniem” gleby okreś la sięobniż enie jej żyznoś ci z powodu wytworzenia warunków niekorzystnych dla wzrostu roś lin. Skutkiem „zmę czenia” jest choroba replantacji, którąpowodujączynniki biotyczne (grzyby, bakterie, nicienie) (Utkhede i in. 1992; Dullahide i in. 1994; Mazzola 1998) i abiotyczne (zachwianie równowagi pokarmowej, zł a struktura gleby, nieodpowiednie pH) (Traquair 1984). Znaczenie tych czynników moż e byćróż ne w róż nych siedliskach (Mazzola 1998). Choroba replantacji przynosi duże straty w wielu rejonach intensywnej produkcji sadowniczej na ś wiecie, powodując osł abienie wzrostu i owocowania, a nawet zamieranie drzew (Pacholak i Rutkowski 2001; Traquair 1984). Szczególnie sięnasila po posadzeniu roś lin tego samego gatunku po sobie, np. jabł oni po jabł oniach. Szczygiełi Zepp (1998) wykazali, że „zmę czenie” gleby występuje w Polsce w większoś ci sadów (61% spoś ród 244 badanych). Gleba, roś liny i mikroorganizmy tworzązespoł y biologiczne, a niektóre skł adniki tego kompleksu mająnaturalnązdolnoś ć ograniczania „zmę czenia” gleby (Larkin i in. 1993). Zwią zki biologicznie czynne (glukozynolany, fenole, saponiny) wystę pujące w roś linach, np. z rodziny Brassicaceae, mogąbyćwykorzystane do zwalczania glebowych patogenów (Smolińska 2004). Roś liny wysiewane na zielony nawóz mogą ograniczać wystę powanie szkodliwych mikroorganizmów glebowych (allelopatia) oraz poprawićstrukturęgleby (Abawi i Widmer 2000). W badaniach amerykańskich pszenica wysiana jako przedplon przed sadzeniem jabł oni wpł ywał a na polepszenie ich wzrostu, zmieniają c skł ad populacji bakterii fluoryzują cych, uważ anych za poż yteczne w glebie, zwł aszcza jako czynniki biologicznej ochrony (Mazzola i Gu 2002). Celem prowadzonych badań był a ocena wpł ywu uprawy roś lin zboż owych i gorczycy oraz dodawania do gleby nasion gorczycy w formie mą czki na ograniczenie „zmę czenia” gleby i poprawy jej wł asnoś ci. MATERIAŁI METODY Badania prowadzono w latach 2006-2007 w szklarni Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa w Skierniewicach, na glebie „zmę czonej”, Ocena wzrostu siewek jabł oni ‘Antonówka’ uprawianych w glebie „zmę czonej”... 53 5 pochodzą cej z sadu jabł oniowego z Rolniczo-Sadowniczego Gospodarstwa Doś wiadczalnego Przybroda, należą cego do Uniwersytetu Przyrodniczego w Poznaniu. Przeprowadzone badania tej gleby wykazał y istotnie więcej nicieni (Pacholak i Rutkowski 2001) i promieniowców oraz niższą aktywnoś ćenzymów (proteaza, ureaza, dehydrogeneaza) w porównaniu z glebą„nowiną ” (Zydlik 2004, Zydlik informacja ustna). U p r a w a r o śl i n s a n i t a r n y c h Do „zmęczonej” gleby, umieszczonej w pł askiej skrzynce (600 x 400 x 116 mm), wysiewano nasiona roś lin zbożowych: pszenice (Triticum vulgare Vill.) jarą– ‘Zebra’ i ozimą– ‘Finezja’, pszenżyto ozime (Triticosecale Wittm. – ‘Witon’) oraz gorczycębiał ą(Sinapis alba L.), w jednym, dwu lub trzech cyklach uprawowych. W każ dym cyklu roś liny uprawiano przez 4 tygodnie w standardowych warunkach szklarniowych. Po każ dym cyklu częś ćnadziemnąroś lin ś cinano i odrzucano, a system korzeniowy rozdrabniano i mieszano z glebą. Do tak przygotowanej gleby wysiewano nasiona tej samej roś liny sanitarnej w kolejnym cyklu uprawowym. U p r a w a r o śl i n t e s t o w y c h Do 10-litrowych pojemników z glebątraktowanąwedł ug poniższego schematu posadzono 8-tygodniowe siewki jabł oni ‘Antonówka’. W każ dym roku badańroś liny sadzono w trzech terminach: w kwietniu (po jednym cyklu uprawy roś lin sanitarnych), maju (po dwóch) i czerwcu (po trzech cyklach). K o m b i n a c j e d o św i a d c z a l n e gleba „zmęczona” (Z) – kontrola I, gleba „nowina” (D) – kontrola II, gleba „zmę czona” z 1% dodatkiem mą czki z nasion gorczycy (G 1) – w 2006 roku w I i III cyklu uprawy, gleba „zmę czona” – gorczyca (G) – w 2006 roku w II i III cyklu uprawy, gleba „zmęczona” – pszenica jara (PJ), gleba „zmęczona” – pszenica ozima (PO), gleba „zmęczona” – pszenżyto (PZ). 54 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa, tom 16 Każ da kombinacja był a reprezentowana przez 20 siewek (4 pojemniki x 5 roś lin), które uprawiano przez okres 12-13 tygodni w standardowych warunkach szklarniowych. Pomiary i obserwacje Wzrost wegetatywny siewek (wszystkich roś lina testowych): wysokoś ćroś lin (w cm od szyjki korzeniowej do wierzchoł ka pędu), ś wieża masa liś ci (w gramach, bezpoś rednio po oberwaniu z roś liny) ś wież a masa pę du (w gramach, po odcięciu pę du nad szyjkąkorzeniową ), ś wież a masa korzeni (w gramach, po wypł ukaniu korzeni, odcię ciu od pę du i odwirowaniu w wirówce przez 1 minutę . Wymienione parametry okreś lano w trzech terminach: w lipcu (po jednym cyklu uprawy roś lin sanitarnych), sierpniu (po dwóch cyklach uprawy) i wrześ niu (po trzech cyklach uprawy). Wyniki opracowano przy uż yciu metody analizy wariancji, do oceny istotnoś ci róż nic mię dzy ś rednimi użyto testu t-Duncana, przyjmują c poziom istotnoś ci 5%. WYNIKI I ICH OMÓWIENIE W y s o k o śćs i e w e k W 2006 roku w każdym terminie oceny najsł abiej rosł y siewki ‘Antonówki’ w glebie „zmę czonej”. Po jednym cyklu uprawy roś lin sanitarnych większoś ćzabiegów, a w pozostał ych terminach wszystkie zabiegi, istotnie stymulował y wzrost roś lin w porównaniu z siewkami rosną cymi w glebie „zmę czonej” (tab. 1). Po jednym cyklu uprawy roś liny sanitarne wpł ywał y na wzrost siewek w niewielkim stopniu, a najsilniej rosł y siewki w kombinacji z mą czkąz nasion gorczycy, następnie w glebie „nowinie”. Natomiast najsł abiej, poza roś linami kontrolnymi, rosł y siewki w kombinacji z pszenż ytem. Po dwóch cyklach uprawy roś lin sanitarnych najdł uższe przyrosty miał y siewki w kombinacjach z uprawągorczycy i pszenicy ozimej, a po trzech cyklach – z uprawągorczycy i dodatkiem mą czki z gorczycy. Jednakż e siewki ‘Antonówki’ rosną ce po każ dym Ocena wzrostu siewek jabł oni ‘Antonówka’ uprawianych w glebie „zmę czonej”... 55 5 cyklu uprawy roś lin fitosanitarnych był y istotnie niższe niżsiewki z gleby „nowiny”, z wyją tkiem tych po uprawie gorczycy i po dodaniu mączki z nasion. Tabela 1 Przecię tna wysokoś ćsiewki ‘Antonówki’[cm. roś lina -1] – Mean height of ‘Antonovka’ plants [cm.plant-1] Kombinacja Treatment Termin/Cycle Z D G1 G PJ PO PZ 2006 2007 I II III I II III 22,5 a 40,3 c 59,3 d 29,2 b 28,7 b 22,5 a 16,9 a 41,5 d 34,4 c 29,8 bc 34,2 c 24,5 b 22,1 a 37,9 c 37,6 c 37,2 c 32,8 bc 32,8 bc 30,5 b 9,4 a 17,3 c 15,4 c 21,9 d 12,5 b 11,7 ab 11,7 ab 5,0 a 14,2 c 14,9 c 14,5 c 5,9 a 10,4 b 6,5 a 5,2 a 11,4 bc 13,7 c 12,9 c 9,7 b 11,8 bc 10,2 b Analizęstatystycznąwykonano oddzielnie dla każ dego roku i cyklu badań. Średnie w kolumnach oznaczone takąsama literąnie róż niąsięistotnie przy P = 5% zgodnie z testem t-Duncana – Analyses were performed separately for each year and each cycle of the study. Means followed by the same letter within columns do not differ significantly (P = 5%) according to Duncan’s multiple range t-test Z – gleba „zmę czona” – diseased soil D – gleba „nowina” – virgin soil G1 – gleba „ zmę czona” z dodatkiem mą czki z nasion gorczycy 1% – diseased soil with the addition of meal of white mustard seeds(1.0% v/v). G – gorczyca – white mustard as a cover crop PJ – pszenica jara – spring wheat as a cover crop PO –pszenica ozima – winter wheat as a cover crop PZ – pszenż yto – triticale as a cover crop W 2007 roku w każdym cyklu uprawy, podobnie jak w 2006 roku, najsł abiej rosł y siewki ‘Antonówki’ w glebie „zmę czonej”. Po jednym cyklu uprawy roś lin sanitarnych najsilniej rosł y drzewka w glebie „zmę czonej” po uprawie gorczycy, istotnie silniej od rosnących w glebie „nowinie” i w glebie „zmęczonej” z dodatkiem mą czki z gorczycy. Po dwóch cyklach uprawy najsilniej rosł y siewki w glebie z uprawągorczycy. Podobnie rosł y siewki w glebie „nowinie” i w glebie „zmę czonej” z dodatkiem 56 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa, tom 16 mą czki z nasion gorczycy. Po trzech cyklach uprawy najdł uższe przyrosty miał y siewki ‘Antonówki’ w glebie „zmęczonej” z uprawągorczycy i pszenicy ozimej, ale nie róż nił y sięistotnie od rosnących w „nowinie” oraz po dodaniu 1% mą czki z nasion gorczycy. Św i e ża m a s a p ęd u W 2006 roku najwyższąś wież ąmasępędu miał y roś liny rosną ce w glebie z dodatkiem mą czki z nasion gorczycy w pierwszym terminie oceny, natomiast w drugim i trzecim terminie – roś liny rosnące w glebie „nowinie”. Najniż sząmasęmiał y pę dy roś lin kontrolnych (gleba „zmę czona”) oraz po jednym i dwóch cyklach uprawy pszenżyta, choćnie zawsze różnice był y istotne statystycznie (tab. 2). Tabela 2 Śwież a masa pę du ‘Antonówki’[g. roś lina -1] – Fresh weight of ‘Antonovka’ shoots [g. plant-1 ] Kombinacja Treatment I Termin/Cycle Z 2,5 ab D 4,8 c G1 7,9 d G PJ 3,4 b PO 3,1 ab PZ 2,3 a 2006 2007 II III I II III 1,9 a 4,5 c 3,8 bc 3,3 b 3,5 b 2,6 a 1,8 a 4,1 b 4,0 b 4,0 b 3,5 b 3,7 b 3,5 b 0,8 a 1,8 c 1,8 c 2,4 d 1,4 b 1,3 b 1,2 b 0,5 a 1,7 c 1,7 c 1,6 c 0,7 a 1,2 b 0,8 a 0,4 a 1,0 bc 1,2 d 1,2 d 0,9 b 1,2 cd 1,0 bc Objaś nienie patrz tabela 1 . – For explanation see Table 1 W 2007 roku ś wieża masa pę du ‘Antonówki’ był a bardzo zróż nicowana w pierwszym terminie oceny. Istotnie najsilniej rosł y siewki w glebie „zmę czonej” po uprawie gorczycy, a nastę pnie w glebie „nowinie” i w glebie „zmęczonej” z 1% dodatkiem mą czki z nasion gorczycy. Uprawiane zboż a stymulował y przyrost ś wieżej masy pędu ‘Antonówki’. Po trzech cyklach ich uprawy stwierdzono istotne większą masępę du w porównaniu z siewkami rosną cymi w glebie „zmę czonej”, Ocena wzrostu siewek jabł oni ‘Antonówka’ uprawianych w glebie „zmę czonej”... 57 5 natomiast nie stwierdzono róż nic w porównaniu z siewkami z gleby „nowiny” (tab. 2). Św i e ża m a s a l i śc i W 2006 roku ś wież a masa liś ci był a na ogółnajwyż sza na siewkach rosną cych w glebie z dodatkiem mą czki z nasion gorczycy oraz na roś linach rosną cych w glebie nowinie i po 2 cyklach uprawy gorczycy. Istotnie niż sząmasęmiał y liś cie roś lin kontrolnych (gleba „zmęczona”) oraz po jednym cyklu uprawy zbóż(tab. 3). W 2007 roku ś wież a masa liś ci siewek ‘Antonówki’ był a bardzo zróż nicowana w pierwszym terminie oceny. Liś cie z roś lin uprawianych w glebie „zmę czonej” z 1% dodatkiem mą czki z nasion gorczycy i po uprawie gorczycy miał y ponad dwukrotnie wyższąmasęod rosną cych w glebie „zmę czonej”. Uprawiane zboż a, stymulował y przyrost ś wież ej masy liś ci siewek ‘Antonówki’. Jednakże, tylko roś liny po uprawie pszenicy ozimej uzyskał y masęliś ci podobnądo siewek z gleby „nowiny”, w każdym terminie oceny (tab. 3). Tabela 3 Śwież a masa liś ci siewek ‘Antonówki’ [g. roś lina -1] – Fresh weight of ‘Antonovka’ leaves [g .plant-1] Kombinacja Treatment Termin/Cycle Z D G1 G PJ PO PZ 2006 2007 I II III I II III 4,2 a 7,2 b 11,2 c 5,1 a 4,5 a 3,6 a 3,6 a 6,7 d 6,8 d 5,4 bc 5,9 cd 4,7 ab 3,6 a 6,5 b 7,3 b 6,3 b 6,3 b 6,7 b 6,2 b 1,8 a 3,3 c 4,6 d 4,9 d 3,0 bc 2,6 bc 2,3 ab 1,0 a 4,2 bc 4,8 c 4,1 bc 1,7 a 3,5 b 1,8 a 0,8 a 2,8 c 3,7 d 3,6 d 1,8 b 2,7 c 1,8 b Objaś nienie patrz tabela 1 . – For explanation: see Table 1 Św i e ża m a s a s y s t e m u k o r z e n i o w e g o W 2006 roku ś wież a masa systemu korzeniowego był a zróżnicowana w poszczególnych terminach oceny. Po jednym cyklu uprawy roś lin fitosanitarnych najsł abszy system korzeniowy miał y siewki ‘Antonówki’ 58 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa, tom 16 rosną ce w glebie z dodatkiem mączki z nasion gorczycy i po uprawie pszenż yta. W pierwszym i drugim terminie oceny roś liny kontrolne uprawiane w glebie „nowinie” osiągnę ł y istotnie wię ksząmasękorzeni w porównaniu z siewkami po uprawie roś lin sanitarnych (tab. 4). Tabela 4 Śwież a masa korzeni siewek ‘Antonówki’ [g.roś lina -1 ] – Fresh weight of ‘Antonowka’ root [g.plant-1 ] Kombinacja Treatment Termin/Cycle Z D G1 G PJ PO PZ 2007 2006 I II III I II III 8,8 ab 12,8 c 8,0 a 8,9 ab 10,7 bc 8,2 a 9,9 bc 10,6 c 8,3 ab 7,7 a 6,8 a 7,5 a 7,2 a 10,5 b 11,4 b 9,7 ab 11,8 bc 11,8 bc 14,3 c 3,1 a 5,8 b 5,2 b 7,4 c 4,7 b 4,7 b 4,8 b 1,7 a 5,2 d 5,3 d 5,3 d 2,7 b 3,7 c 2,7 b 2,0 a 2,7 a 4,8 bc 5,2 c 4,1b 4,6 bc 4,1 b Objaś nienie patrz tabela 1 . – For explanation see Table 1 W 2007 roku ś wież a masa systemu korzeniowego był a takż e zróż nicowana w poszczególnych terminach oceny, jednakż e w każ dym terminie najniż sze wartoś ci stwierdzono u roś lin kontrolnych (gleba „zmę czona”). Po pierwszym cyklu uprawy roś lin fitosanitarnych najwyż szą ś wieżąmasęmiał y korzenie siewek po uprawie gorczycy. W drugim terminie oceny istotnie większąmasęmiał y korzenie siewek z gleby „nowiny” i po zastosowaniu gorczycy w obu formach. Po trzech cyklach uprawy zbóżi gorczycy ś wież a masa korzeni siewek ‘Antonówki’ był a większa niżsiewek rosną cych w glebie „zmę czonej” i „nowinie” (tab. 4). PODSUMOWANIE Prawie wszystkie zastosowane zabiegi stymulował y wzrost wegetatywny siewek, szczególnie ich czę ś ci nadziemnej. Siewki rosną ce w glebie traktowanej rosł y silniej od rosnących w glebie „zmę czonej”. Ocena wzrostu siewek jabł oni ‘Antonówka’ uprawianych w glebie „zmę czonej”... 59 5 Uprawa roś lin sanitarnych istotnie zmniejsza liczebnoś ćorganizmów szkodliwych w glebie (Schung i Ceynowa 1990) i zwię ksza populację pożytecznych mikroorganizmów (Mazzola i Gu 2002; Traquair 1984). Jeś li przyjmiemy, że gleba jest siedliskiem róż nych organizmów współ żyją cych i wzajemnie sięochraniają cych (Badura 2004), to uzyskane wyniki wskazują na moż liwoś ć wystą pienia zmian w kompleksie mikrobiologicznym gleby „zmę czonej” spowodowanych uprawąroś lin fitosanitarnych, szczególnie po trzech cyklach ich uprawy. Wpł yw gorczycy, zarówno wysiewanej do gleby, jak i dodawanej w formie mą czki z nasion, na wzrost częś ci nadziemnej siewek byłnajwiększy spoś ród zastosowanych zabiegów. Jednakż e trudny do wyjaś nienia byłsł aby rozwój systemu korzeniowego siewek po stosowaniu gorczycy, szczególnie w 2006 roku. Tanner i inni (2006) wykazali, że wzrost korzeni brzoskwini może istotnie zależ ećod skł adu mikrobiologicznego gleby, a poziom rozwoju fizycznego i anatomicznego korzeni od wzajemnych interakcji. Nasze badania nad populacjami bakterii i grzybów zasiedlają cych glebę„zmę czoną ” oraz glebętraktowanąróż nymi zabiegami wskazująna moż liwoś ćwystę powania tego zjawiska (dane niepublikowane). Podzię kowania Autorzy dziękująProf. Eugeniuszowi Pacholakowi za konsultacje przy prowadzeniu badań. Badania prowadzono w ramach projektu: PBZ-KBN-112/P06/02/4/1 LITERATURA A b a w i G.S., W i d m e r T.L. 2000. Impact of soil health management practices on soilborne pathogens, nematodes and root diseases of vegetable crops. Appl. Soil. Ecol. 15: 37-47. B a d u r a L. 2004. Czy znamy wszystkie uwarunkowania funkcji mikroorganizmów w ekosystemach lą dowych? Kosmos Prob. Nauk Biol. 53: 373-379. 60 Zeszyty Naukowe Instytutu Sadownictwa i Kwiaciarstwa, tom 16 D u l l a h i d e S.R., S t i r l i n g G.R., N i k u l i n A. S t i r l i n g A.M. 1994. The role of nematodes, bacteria and abiotic factors in etiology of apple replant problems in the Granite Belt of Queensland. Aust. J. Exp. Agric. 32: 1177-1182. L a r k i n R.P., H o p k i n s D.L., M a r t i n F.N. 1993. Effect of successive watermelon plantings on Fusarium oxysporum and other microorganisms in soil suppressive and conductive to Fusarium wilt of watermelon. Phytopathology 83: 1097-1105. M a z z o l a M. 1998. Elucidation of the microbial complex having a causal role in development of apple replant disease in Washington. Ptytophathology 88: 930-938. M a z z o l a M., Gu Y.H. 2002. Wheat genotype-specific induction of soil microbial communities suppressive to disease incited by Rhizoctonia solani anastomosis group (AG)-5 and AG-8. Phytopathology 92: 1300-1307. P a c h o l a k E., R u t k o w s k i K. 2001. Wpł yw sposobów zapobiegania zmę czeniu gleby na liczebnoś ćnicieni oraz wzrost i plonowanie jabł oni odmiany ‘Elstar’ w warunkach zróż nicowanej wilgotnoś ci gleby. Zesz. Nauk. Inst. Sadow. Kwiac. 9: 7-14. S c h u n g E., C e y n o w a J. 1990. Phytopathological aspects of glucosinolates in oilsed rape. J. Agronomy Crop Sci. 165: 319-328. S m o l i ńs k a U. 2004. Badania nad moż liwoś cią wykorzystania roś lin Brassicaceae, zawierają cych zwią zki biologicznie czynne, w ograniczaniu Sclerotium cepivorum. Rozprawa habilitacyjna. Instytut Warzywnictwa w Skierniewicach. S z c z y g i e łA., Z e p p A.L. 1998. An occurrence and importance of apple replant disease in Polish orchards. Acta Hort. 477: 99-105. T a n n e r S.C., R e i g h a r d G.I., W e l l s C.E. 2006. Soil treatments differentially affect peach tree root development and demography in a replant site. Acta Hort. 713: 381-387. T r a q u a i r J.A. 1984. Etiology and control of orchard replant problems: A review. Can. J. Plant Pathol. 6: 54-62. U t k h e d e R.S., V r a i n T.C., Y o r s t o n J.M. 1992. Effects of nematodes, fungi and bacteria on growth of young apple trees grown in apple replant disease soil. Plant Soil 139: 1-6. Z y d l i k Z. 2004. Effect of locality on microbiological condition of soil from replanted apple orchard. Folia Univ. Agric. Stetinensis, Agricultura 240 (96): 219-224.