FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein
Transkrypt
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR079 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciała FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog 1, Clone ES05, Ready-to-Use, (Link) są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w urządzeniach Autostainer Link. Przeciwciało pozwala wykryć homolog 1 białka MutL (MLH1) zarówno w tkance prawidłowej, jak i w nowotworowej. Wyniki ułatwiają klasyfikację nowotworów przewodu pokarmowego. Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez certyfikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Przeciwciała te przeznaczone są do stosowania po pierwotnym rozpoznaniu guza w konwencjonalnym badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych barwień histochemicznych. Streszczenie i informacje ogólne Przeciwciała przeciwko MLH1 słuŜą do immunohistochemicznego (IHC) wykrywania ekspresji białka MLH1 w guzach przewodu pokarmowego i innych powiązanych rakach poza jelitem grubym. Brak ekspresji białka MLH1, ustalony w odczynie immunohistochemicznym, został wykazany w nowotworach jelita grubego i nowotworach endometrium powiązanych z dziedzicznym rakiem jelita grubego niezwiązanym z polipowatością (HNPCC) (1, 2). Patrz dokument General Instructions for Immunohistochemical Staining (Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych) firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC, aby poznać: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Procedurę barwienia, 6) Kontrolę jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretację wyników barwienia, 9) Ograniczenia ogólne. Dostarczony odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowane wobec roztworu Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i zawierające NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: ES05. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Rekombinowane białko odpowiadające 210 aminokwasom ludzkiej cząsteczki MLH1. Swoistość W badaniachWestern-blot lizatów komórkowych ludzkiej linii Caco-2 przeciwciało barwi główny prąŜek o masie cząsteczkowej 88 kDa, odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej MLH1 (3). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny – azydek sodu (NaN3). Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. Przechowywanie (119310-002) 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi. Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. 307804PL_002 1/3 Skrócona instrukcja uŜytkownika Krok Komentarze Utrwalanie Obróbka wstępna Formalina Odczynnik EnVision™ FLEX+, High pH (nr kat. K8004) Rozcieńczenie Bufor rozcieńczenia Kontrola ujemna Wizualizacja Gotowe do uŜycia Wstępnie rozcieńczony Barwnik kontrastowy Kontrola tkankowa Szkiełka EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008) Inkubacja 20 min Inkubacja 20 min, inkubacja w odczynniku Mouse (LINKER) 15 min, inkubacja w odczynniku DAB+ 2 x 5 min Inkubacja 5 min Wyrostek robaczkowy, jelito grube Odczyn jądrowy FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020) Zalecane w celu uzyskania lepszego przylegania skrawków tkankowych do szkiełek Zatapianie preparatu Wymagane niewodne, trwałe zatapianie preparatów Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą zostać odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania Urządzenia Autostainer Link 48 NaleŜy korzystać z fiolek przeznaczonych dla danego urządzenia (nr kat. SK201-SK203) FLEX Negative Control, Mouse (nr kat. IR750) EnVision™ FLEX+ Mouse, High pH (nr kat. K8002). 20 min HIER, 3w1 z uŜyciem urządzenia PT Link i stacji płuczącej PT Link Rinse Station Inkubacja 20 min *UŜytkownik jest zobowiązany zapoznać się z ulotką dostarczoną do opakowania, która zawiera dokładne instrukcje dotyczące procedury barwienia i postępowania z produktem. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm. Obróbka wstępna: Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się, dokonując wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera podręcznik uŜytkownika urządzenia PT Link. W urządzeniach PT Link naleŜy stosować następujące parametry: Temperatura ogrzewania wstępnego: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antyge nu: 97°C przez 20 (±1) minut, schłodzi ć do 65°C. Usunąć statywy na preparaty ze zbiornika PT i natychmiast zanurzyć preparaty w naczyniu/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) z rozcieńczonym buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o temperaturze pokojowej. Pozostawić preparaty zanurzone w buforze Wash Buffer na 1–5 minut. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020. Po zakończeniu barwienia preparatu naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. Procedura barwienia Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). Oprogramowanie urządzenia Autostainer Link zawiera wstępnie zaprogramowane etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące umieszczania preparatów i odczynników przedstawiono w podręczniku uŜytkownika urządzenia Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia o innym natęŜeniu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczących zmiany zaprogramowanego protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka działania”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu odczynnika EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego środka do trwałego zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wyrostek robaczkowy, jelito grube i migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Odczyn komórkowy ma charakter jądrowy. (119310-002) 307804PL_002 2/3 Charakterystyka działania Tkanki prawidłowe: Przeciwciała FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog 1, Clone ES05 znakują jądra róŜnych typów komórek w tkance prawidłowej. Jądra są znakowane przeciwciałem w komórkach wyrostka robaczkowego, sutka, szyjki macicy, jelita grubego, przełyku, nerek, płuc, trzustki, gruczołu krokowego, gruczołów ślinowych, jelita cienkiego, tarczycy, migdałków i macicy. Immunoreaktywność zaobserwowano w komórkach zrębu i nabłonka róŜnych rodzajów tkanek. Przeciwciało znakuje teŜ jądra limfocytów migdałków i przewodu pokarmowego oraz komórki endokrynne przysadki i przytarczyc. Odczyn dodatni zaobserwowano teŜ w elementach innych tkanek, np. w adipocytach, komórkach blastycznych szpiku kostnego, międzybłonku, splotach nerwowych, mięśniach gładkich wyrostka robaczkowego i mięśniówce macicy (4). Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. Lanza G, Gafá R, Maestri I, Santini A, Matteuzzi M, Cavazzini L. Immunohistochemical pattern of MLH1/MSH2 expression is related to clinical and pathological features in colorectal adenocarcinomas with microsatellite instability. Mod Pathol 2002; 15:741-9. Peiró G, Diebold J, Mayr D, Baretton GB, Kimmig R, Schmidt M, et. al. Prognostic relevance of hMLH1, hMSH2, and BAX protein expression in endometrial carcinoma. Mod Pathol 2001; 14:777-83. Räschle M, Marra G, Nyström-Lahti M, Primo Schär P, Jiricny J. Identification of hMutLbeta a Heterodimer of hMLH1 and hPMS1. J Biol Chem 1999; 274:32368-75. M3640 IHC110608-161 Wydanie 09/15 (119310-002) 307804PL_002 3/3