CINtec® p16 Histology
Transkrypt
CINtec® p16 Histology
CINtec® p16 Histology 805-4713 06695248001 825-4713 06695256001 50 250 PRZEZNACZENIE Zestaw immunohistochemiczny CINtec p16 Histology do jakościowego oznaczania białka p16INK4a w skrawkach tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, pochodzących z biopsji szyjki macicy. Przeznaczony do stosowania z preparatami na szkiełkach wybarwionymi H&E, Rysunek 1. Barwienie komórek nabłonka pochodzącymi z takich samych płaskiego szyjki macicy przy użyciu CINtec próbek nabłonka szyjki macicy, p16 Histology. w celu zwiększenia dokładności diagnostycznej i zgodności obserwacji pomiędzy osobami badającymi preparaty pod kątem wewnątrznabłonkowej neoplazji szyjki macicy wysokiego stopnia. Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi. To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA CINtec p16 Histology zawiera jeden składnik: anti-p16INK4a (E6H4), mysie, pierwszorzędowe przeciwciało monoklonalne. Będące inhibitorem kinaz cyklinozależnych białko p16INK4a ma kluczowe znaczenie dla przebiegu cyklu komórkowego i różnicowania komórek1,2,3. Białko p16INK4a uczestniczy w procesie regulacji przejścia z fazy G1 w fazę S z udziałem białka retinoblastoma (pRB) i powoduje wstrzymanie cyklu komórkowego w trakcie różnicowania komórki1,4. Poziom ekspresji białka p16INK4a w prawidłowych, ostatecznie zróżnicowanych komórkach jest niski, zwykle niewykrywalny podczas badań immunohistochemicznych1,5. Wykazano jednak, że w przypadku niektórych nowotworów nadekspresja białka p16INK4a przyczynia się do rozregulowania cyklu komórkowego i transformacji komórek. Wyniki badań naukowych wykazały, że silna nadekspresja białka p16INK4a w tkankach ze zmianami przednowotworowymi i nowotworowymi jest ściśle związana na poziomie molekularnym z ekspresją onkoproteiny E7 wirusa brodawczaka ludzkiego1,6. Preparat CINtec p16 Histology (825-4713) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 250 badań. Jeden dozownik VENTANA 25 ml z odczynnikiem CINtec p16 Histology zawiera około 25,0 μg mysiego przeciwciała monoklonalnego. Preparat CINtec p16 Histology jest rozcieńczony w buforze Tris-HCl 0,05 M z dodatkiem 1% białka nośnikowego i środka ProClin 300 w stężeniu 0,10%, będącego konserwantem. Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 10,0 mg/ml. Stężenie swoistego przeciwciała wynosi około 1,0 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność przeciwciał zawartych w tym produkcie. CINtec p16 Histology to mysie przeciwciała monoklonalne, wyizolowane z supernatantu hodowli komórkowej. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia. MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA ani elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty tkankowe. Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne. PRZECHOWYWANIE Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w pozycji pionowej. Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować odczynnika po upływie terminu ważności. PRZYGOTOWANIE PRÓBKI Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatu do barwienia VENTANA BenchMark XT, BenchMark GX lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna buforowana formalina 7. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli dodatniej i ujemnej przy badaniu nieznanych preparatów. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. ZASADY POSTĘPOWANIA Anti- p16INK4a (E6H4) jest mysim, pierwszorzędowym przeciwciałem monoklonalnym wytwarzanym przeciwko białku p16INK4a. Anti- p16INK4a (E6H4) wiąże się z białkiem p16INK4a w skrawkach tkankowych zatopionych w parafinie oraz barwi jądra komórkowe i/lub cytoplazmę. Przeciwciało można wykryć za pomocą zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit (Cat. No. 760-700; 06396500001) lub ultraView Universal DAB Detection Kit (Cat. No. 760-500; 05269806001). Więcej informacji można znaleźć w ulotce dołączonej do opakowania zestawu OptiView DAB IHC Detection Kit lub ultraView Universal DAB Detection Kit. DOSTARCZANY ODCZYNNIK FT0700-410l 5. 6. 7. 8. Preparat CINtec p16 Histology (805-4713) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań. Jeden dozownik VENTANA 5 ml z odczynnikiem CINtec p16 Histology zawiera około 5,0 μg mysiego przeciwciała monoklonalnego. 2016-02-02 4. 1/4 Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego. W tym preparacie zastosowano jako konserwant ProClin 300. Został on uznany za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas pracy z produktem należy stosować środki ostrożności w uzasadnionym stopniu. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować odzież i rękawice ochronne. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody. Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość nieprawidłowych wyników. W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy skontaktować się z władzami lokalnymi lub krajowymi. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących zagrożeń na stronie www.ventana.com. 1011519PL Rev F PROCEDURA BARWIENIA Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w urządzeniach do barwienia VENTANA BenchMark XT, BenchMark GX lub BenchMark ULTRA razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia zawiera Tabela 1 i Tabela 2. Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA. Tabela 1. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika CINtec p16 Histology z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzenia BenchMark GX, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Rodzaj procedury Metoda Odparafinowanie Wybrana Kondycjonowanie komórek (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1, Standardowa Przeciwciała (pierwotne) Urządzenie BenchMark GX 24 minuty, 37°C Urządzenie BenchMark XT 16 minut, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 20 minut, 36°C Blokowanie (Ultrablock) (Antibody Diluent, P/N 251-018; 05261899001) Urządzenie BenchMark GX 8 minut Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji podstawowego przeciwciała i kondycjonowania komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą (protease), zależnie od próbki, zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii)8. TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ Przykładowe tkanki do dodatniej próby kontrolnej dla tego przeciwciała to prawidłowa tkanka trzustki, prawidłowa tkanka migdałka i rak szyjki macicy. INTERPRETACJA WYBARWIENIA/OCZEKIWANE WYNIKI Wzór barwienia komórek dla CINtec p16 Histology jest jądrowy i/lub cytoplazmatyczny. Nadekspresja biomarkera p16INK4a w skrawkach z biopsji szyjki macicy uwidacznia się jako rozmyte, ciągłe wybarwienie komórek warstwy podstawnej i przypodstawnej nabłonka płaskiego szyjki macicy, przy którym może, ale nie musi, wystąpić wybarwienie komórek warstwy pośredniej lub od warstwy pośredniej do wyższych warstw. Ciągły, rozmyty wzorzec barwienia należy interpretować jako wynik dodatni. Barwienie ogniskowe występuje jako nieciągłe barwienie pojedynczych komórek lub zbitek komórek, zwłaszcza w warstwach innych niż podstawna i przypodstawna. Barwienie ogniskowe należy interpretować jako wynik ujemny. SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA CINtec p16 Histology może dawać dodatnie wyniki barwienia fibroblastów i nabłonka walcowatego szyjki macicy, co nie ma wpływu na interpretację wyniku. CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego specyficzności, czułości i powtarzalności, a wyniki zostały zamieszczone w Tabeli 3, Tabeli 4 oraz w części Powtarzalność. Specyficzność Tabela 3. Specyficzność odczynnika CINtec p16 Histology oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie. Tkanka Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków Rodzaj procedury Metoda Mózg 0/3 Grasica 0/3 Odparafinowanie Wybrana Szpik kostny 3/3 Urządzenie BenchMark GX Cell Conditioning 1, 32 minuty Urządzenie BenchMark XT Cell Conditioning 1, 48 minut Urządzenie BenchMark ULTRA Cell Conditioning 1, 48 minut Móżdżek 0/3 Kondycjonowanie komórek (odsłanianie antygenu) Nadnercze 2/3 Płuco 0/6 Jajnik 0/3 Serce 0/3 Trzustka 3/3 Przełyk 0/3 Przytarczyce 0/1 Żołądek 0/3 Przysadka 3/3 Jelito cienkie 0/3 Jądra 0/3 Okrężnica 0/3 Tarczyca 0/5 Wątroba 0/3 Sutek 2/3 Ślinianka 2/3 Śledziona 3/3 Nerka 0/3 Migdałki 4/4 Gruczoł krokowy 0/3 Macica 0/3 Szyjka macicy 0/46 Mięśnie szkieletowe 0/2 Skóra 0/3 Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika CINtec p16 Histology z użyciem zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz urządzenia BenchMark GX, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Inhibitor peroksydazy przed przeciwciałem pierwszorzędowym Wybrana Przeciwciała (pierwotne) Urządzenie BenchMark GX 8 minut, 37°C Urządzenie BenchMark XT 8 minut, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 12 minut, 36°C Dodatkowe utrwalenie (Antibody Diluent, P/N 251-018; 05261899001) 2016-02-02 FT0700-410l Tkanka Urządzenie BenchMark GX 8 minut 2/4 Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków 1011519PL Rev F Tkanka Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków Tkanka Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków Nowotwór Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 1) 19/48 Czułość Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 2) 35/35 Tabela 4. Czułość preparatu CINtec p16 Histology oceniano na podstawie badania próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie. Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 3) 26/26 Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy 31/32 Nerwy (nieliczne) 0/3 Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków Nowotwór Liczba dodatnich/ wszystkich przypadków Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy 1/1 Czerniak złośliwy odbytu 1/1 Glejak 1/1 Rak podstawnokomórkowy 1/1 Oponiak atypowy 0/1 Rak płaskonabłonkowy 0/1 Wyściółczak złośliwy 1/1 Nerwiakowłókniak 0/1 Skąpodrzewiak złośliwy 0/1 Nerwiak zarodkowy przestrzeni zaotrzewnowej 0/1 Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty 1/1 Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy 1/1 Gruczolakorak jajnika 0/1 Chłoniak Hodgkina (ziarnica złośliwa) 0/1 Rak z komórek wysp trzustki (wyspiak) 0/1 Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy 1/1 Gruczolakorak trzustki 0/1 Rak przejściowokomórkowy pęcherza moczowego 0/1 Nasieniak 0/1 Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości 1/1 Rak zarodkowy 0/1 Kostniakomięsak 1/1 Rak rdzeniasty tarczycy 0/1 Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych 1/1 Rak brodawkowaty 0/1 Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości 1/1 Rak wewnątrzprzewodowy sutka ze wczesnym naciekiem 1/1 Inwazyjny rak przewodowy sutka 2/2 Chłoniak rozlany z limfocytów B 1/3 Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca 1/1 Rak płaskonabłonkowy płuca 0/1 Gruczolakorak płuca 1/1 Rak płaskonabłonkowy przełyku 1/1 Gruczolakorak przełyku 0/1 Przeprowadzono badania powtarzalności dla preparatu CINtec p16 Histology w celu określenia: • Odtwarzalności wyników między partiami przeciwciał. • Odtwarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami z zastosowaniem urządzenia BenchMark XT. • Odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu urządzenia BenchMark XT, urządzenia BenchMark GX oraz urządzenia BenchMark ULTRA. • Odtwarzalności wyników między platformami pomiędzy urządzeniami BenchMark XT, BenchMark GX i BenchMark ULTRA. Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy. Gruczolakorak śluzowy żołądka 1/1 PIŚMIENNICTWO Gruczolakorak przewodu pokarmowego 3/3 Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST) 3/3 Rak wątrobowokomórkowy 0/1 Wątrobiak zarodkowy 0/1 Rak jasnokomórkowy nerek 0/1 Gruczolakorak prostaty 1/2 Mięśniak gładkokomórkowy 1/1 Rak gruczołowy endometrium 1/1 Rak jasnokomórkowy endometrium 1/1 2016-02-02 FT0700-410l Powtarzalność 1. 2. 3. 4. 5. 3/4 Sano T, Oyama T, Kashiwabara K, et al. Expression status of p16 protein is associated with human papillomavirus oncogenic potential in cervical and genital lesions. Am J Pathol. 1998;153:1741-1748. Agoff SN, Lin P, Morihara J, et al. p16(INK4a) expression correlates with degree of cervical neoplasia: a comparison with Ki-67 expression and detection of high-risk HPV types. Modern Pathol. 2003;16:665-673. Negri G, Egarter-Vigl E, Kasal A, et al. p16INK4a is a useful marker for the diagnosis of adenocarcinoma of the cervix uteri and its precursors: an immunohistochemical study with immuncytochemical correlations. Am J Surg Pathol. 2003;27:187-193. Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of p16(INK4a) as a specific marker for dysplasia and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri. Int J Cancer. 2001;92:276-284. Klaes R, Benner A, Friedrich T, et al. p16INK4a immunohistochemistry improves interobserver agreement in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia. Am J Surg Pathol. 2002;26:1389-1399. 1011519PL Rev F 6. 7. 8. Negri G, Vittadello F, Romano F, et al. p16INK4a expression and progression risk of low-grade intraepithelial neoplasia of the cervix uteri. Virchows Arch. 2004;445:616620. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli. © 2015 Ventana Medical Systems, Inc. DANE KONTAKTOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 2016-02-02 FT0700-410l 4/4 1011519PL Rev F