FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CA 125 Klon M11
Transkrypt
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CA 125 Klon M11
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CA 125 Klon M11 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR701 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CA 125, klon M11, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji surowiczych raków jajnika (1, 2). Przeciwciała przeciwko CA 125 mogą być równieŜ uŜyteczne w identyfikacji międzybłoniaka (3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu Antygen rakowy 125 (1), MUC16 (4). Podsumowanie i wyjaśnienie CA 125 jest duŜą przezbłonową glikoproteiną typu I, składającą się z ponad 22000 aminokwasów z niewielką domeną wewnątrzkomórkową i duŜą domeną zewnątrzkomórkową (4). Jest ona kodowana przez gen MUC16 zmapowany do 19p13.3 metodą analizy sekwencji (1). CA 125 jest wydzielana przez retikulum endoplazmatyczne aparat Golgiego w mechanizmie, który jest niezaleŜny od sygnałów. Struktura CA 125 została precyzyjnie określona, lecz niewiele wiadomo na temat funkcji białka, jakkolwiek wydaje się ono być elementem przypominającego mucynę kompleksu glikoproteinowego o wysokiej masie cząsteczkowej (4). CA 125 podlega ekspresji na powierzchni komórek błon embrionalnych oraz dorosłych komórek wywodzących się płodowej perydermy (5). Antygen podlega ekspresji w komórkach guzów jajnika, lecz moŜna go równieŜ odnaleźć w surowicach pacjentów z gruczolakorakami jajnika, trzustki, wątroby i okręŜnicy (6). Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: M11 (7). Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Antygen CA 125 otrzymany z płynu wysiękowego z jamy otrzewnowej. Swoistość W testach Western blot, przeciwciało znakuje wiele odcinków antygenowych, w tym odcinki cząsteczkowe rozpoznawane przez monoclonal anti-CA 125, klon OC125 (7). Testy kompetycyjne wykazały, Ŝe przeciwciało monoklonalne, klon M11 nie współzawodniczy z przeciwciałem monoklonalnym klon OC125 o wiązanie z antygenem CA 125 (7). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). (119372-001) Dako Denmark A/S IR701/PL/SSM/2009.02.18 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisanej dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować jajowód, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn błonowy i wyjątkowo cytoplazmatyczny. Charakterystyka działania Tkanki normalne: W jajowodzie, wierzchołek rąbka szczoteczkowatego komórek nabłonkowych wykazuje umiarkowany do silnego odczyn barwienia. Rozproszone komórki nabłonkowe równieŜ wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Przeciwciało znakuje równieŜ komórki dendrytyczne grudek chłonnych oraz nabłonek gruczołowy stercza. Tkanki patologiczne: Przeciwciało dało odczyn dodatni w przypadku 18/25 surowiczych raków jajnika i 4/20 śluzowatych raków jajnika (1). W innnym badaniu, przeciwciało dało odczyn dodatni w przypadku 22/22 surowiczych raków jajnika, 5/10 śluzowych raków jajnika, 6/7 endometrilanych raków jajnika i 10/10 raków jajnika (2). Przeciwciało dało takŜe odczyn dodatni w 4/4 przypadków międzybłoniaka. Piśmiennictwo 1. Heinrich JKR, Böttcher-Luiz F, Andrade LLA, Davidson S, Bonds L, Stephens J, et al. HER-2 and cancer antigen 125 evaluation in ovarian borderline tumors by immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization. Int J Gynecol Cancer 2004;14:1078-85. 2. Okamoto S, Ito K, Sasano H, Moriya T, Niikura H, Terada Y, et al. Ber-EP4 and Anti-Calretinin antibodies: A useful combination for differential diagnosis of various histological types of ovarian cancer cells and mesothelial cells. Tohoku J. Exp. Med 2005;206:31-40. 3. Attanoos RL, Webb R, Dojcinov SD, Gibbs AR. Value of mesothelial and epithelial antibodies in distinguishing diffuse peritoneal mesothelioma in females from serous papillary carcinoma of the ovary and peritoneum. Histopathology 2002;40:237-44. 4. Rump A, Morikawa Y, Tanaka M, Minami S, Umesaki N, Takeuchi M, et al. Binding Ovarian Cancer Antigen CA125/MUC16 to mesothelin mediates cell adhesion. J Biol Chem 2004;279:9190-8. 5. Leake J, Woolas RP, Daniel J, Oram DH, Brown CL. Immunocytochemical and serological expression of CA 125: a clinicopathological study of 40 malignant ovarian epithelial tumors. 1994;24:57-64. 6. Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-K. CA 125. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Greenwich Medical Media; 2003. p. 35-6. 7. O’Brien TJ, Raymond LM, Bannon GA, Ford DH, Haradottir H, Miller FC, et al. New monoclonal antibodies identify the glycoprotein carrying the CA 125 epitope. Amer J Obstet Gynecol 1991;165:1857-64. (119372-001) Dako Denmark A/S IR701/PL/SSM/2009.02.18 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Objaśnienie symboli N ume r ka ta log owy Tempe ratura prze chow ywan ia Zu Ŝyć p rzed Wyró b medyczny do d ia gno styki in vi tro Zawa rto ść w ysta rcza na <n> testów Produ cent S prawd zić w instrukcj i sto sowa nia Nu mer serii (119372-001) Dako Denmark A/S IR701/PL/SSM/2009.02.18 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17