BIOSCOT® Anty-D Linia komórkowa: TH-28/MS

BIOSCOT®
Anty-D Linia komórkowa: TH-28/MS-26
Kod produktu: BM
Odczynnik monoklonalny IgM/IgG pochodzenia ludzkiego do
oznaczeń grup krwi.
Do stosowania w oznaczeniach na szkiełkach mikroskopowych,
w probówkach, mikropłytkach, w pośrednim teście
antyglobulinowym oraz w mikrometodzie kolumnowej i żelowej.
C
0123
IVD
PRZEZNACZENIE
Odczynnik monoklonalny BIOSCOT Anty-D (linia komórkowa TH-28/MS-26)
IgM/IgG pochodzenia ludzkiego służy do oznaczeń antygenu grupowego
krwi D na szkiełkach mikroskopowych, w probówkach, w mikropłytkach, w
pośrednim teście antyglobulinowym oraz w mikrometodzie kolumnowej i
żelowej przez pracowników przeszkolonych w zakresie badań serologicznych.
WPROWADZENIE
Układ grupowy krwi Rh
Aktualna wiedza oraz diagnostyka laboratoryjna przeciwciał anty-D opiera
się na badaniach Levine’a i Stetsona z 1939 r. oraz Landsteinera i Weinera
z 1940 r.
Antygen RhD nie występuje u około 15% osób rasy białej. W tej grupie osób
w ciąży RhD-dodatniej lub po przetoczeniu niezgodnej krwi następuje szybka
odpowiedź immunologiczna, która może wywoływać chorobę hemolityczną
noworodków lub ciężką hemolizę poprzetoczeniową.
Słabe lub częściowe odmiany antygenu D
Słaba odmiana antygenu D („słaby” antygen D) charakteryzuje się
mniejszą liczbą miejsc antygenowych D na erytrocytach, zaś częściowa
odmiana antygenu D (częściowy antygen D) - niepełną liczbą epitopów D
na erytrocytach. Antygen D kategorii VI (DVI) to częściowy antygen D
niezawierający większości epitopów D. Zastosowanie pośredniego testu
antyglobulinowego z użyciem tego odczynnika stosuje się do wykrywania
słabych odmian antygenu D oraz krwinek z antygenem D kategorii VI. Nie
zaleca się stosowania metody szkiełkowej ani mikropłytkowej do wykrywania
krwinek ze słabym lub częściowym antygenem D. Odczynnik ten jest
szczególnie przydatny do testowania pacjentów i dawców krwi.
ZASADA DZIAŁANIA ODCZYNNIKA
Podczas stosowania zgodnie z zaleceniami w przypadku testu dodatniego
odczynnik wywołuje aglutynację (zlepianie) krwinek czerwonych wykazujących
ekspresję odnośnego antygenu. Ujemny wynik testu w postaci braku
aglutynacji erytrocytów oznacza, że dany antygen nie występuje w próbce.
Odczynnik zoptymalizowano do użycia w zalecanych technikach analitycznych
bez konieczności dodatkowych rozcieńczeń ani dodawania innych substancji.
Dostarczany jest odczynnik po filtracji (0,22 µm).
MATERIAŁY
Produkt Anty-D (kod BM) do oznaczeń grup krwi zawiera przeciwciała
uzyskane z linii komórkowych TH-28 i MS-26. Odczynnik zawiera
przeciwciała monoklonalne IgM i IgG pochodzenia ludzkiego w roztworze
buforu zawierającego wielkocząsteczkowe potencjatory chemiczne, 0,1%
(w/v) roztwór azydku sodu oraz materiał pochodzenia bydlęcego. Jedna fiolka
10 ml umożliwia przeprowadzenie ok. 250-400 oznaczeń.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
Wszystkie produkty krwiopochodne należy traktować jako potencjalnie
zakaźne. W badaniach dawców linii komórkowych z których uzyskano
opisywany odczynnik potwierdzono ujemne wyniki testów na obecność
przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego upośledzenia
odporności (HIV), wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV), antygenów
powierzchniowych wirusa zapalenia wątroby typu B (HBsAg), wirusa
Epstein-Barra (EBV) oraz wirusów obecnych w materiale pochodzenia
mysiego (Mouse Antibody Production, MAP). Żaden znany test nie
daje całkowitej pewności, że odczynniki wytwarzane z ludzkiej krwi są
wolne od czynników zakaźnych. Należy zachować ostrożność podczas
stosowania odczynników, niszczenia zużytych opakowań i usuwania ich
zawartości.
Odczynnik zawiera środek konserwujący — roztwór azydku sodu o
stężeniu 0,1% (w/v). Azydek sodu może być trujący po spożyciu. Istnieje
również ryzyko powstania silnie wybuchowych soli w reakcji z ołowiem
i miedzią wchodzącymi w skład rur instalacji wodno-kanalizacyjnej.
Wylewane odpady należy spłukać dużą ilością wody.
Odczynnik powinien być klarowny; zmętnienie może oznaczać skażenie
4.
5.
6.
bakteryjne. Nie należy używać odczynnika, jeśli zawiera widoczne
drobiny, osad lub żel fibrynowy (osad włóknika).
Odczynnik jest przeznaczony wyłącznie do diagnostyki in vitro.
Materiał pochodzenia wołowego wykorzystany w tym produkcie
uzyskano metodami zatwierdzonymi przez USDA (ministerstwo rolnictwa
USA) lub z udokumentowanych źródeł. Uzyskano ujemne wyniki badań
zwierząt, od których pobrano materiał, w kierunku zakaźności i ryzyka
przenoszenia zakaźnych encefalopatii gąbczastych.
Produkt należy utylizować przez autoklawowanie lub zanurzenie w
odpowiednio stężonym roztworze środków odkażających do rana
następnego dnia.
UWAGI DLA UŻYTKOWNIKÓW
Zaleca się wykonywanie kontroli dodatniej i ujemnej dla każdej serii
odczynnika. Jeżeli wynik kontroli różni się od oczekiwanego, wynik oznaczenia
należy uznać za fałszywy.
Nie ma konieczności stosowania kontroli do każdego oznaczenia.
Stosowanie odczynników kontrolnych (np. BIOSCOT Monoclonal Control,
(kod produktu: TT) zaleca się jednie w przypadku oznaczeń grup krwi
pacjentów z autoprzeciwciałami lub zaburzeniami białkowymi. W takich
przypadkach kontrole należy wykonywać równolegle z każdym oznaczeniem
przy użyciu odczynnika.
Przedstawiona charakterystyka odczynnika odnosi się do procedur opisanych
w niniejszej instrukcji. Przydatność odczynnika w metodach innych niż
opisane użytkownik musi określić samodzielnie.
W przypadku zmian charakterystyki analitycznej lub uszkodzenia opakowania
należy się skontaktować z Działem Kontroli Jakości firmy Millipore (UK).
WARUNKI PRZECHOWYWANIA
Zamknięty lub otwarty odczynnik należy przechowywać w temperaturze
2-8°C do daty ważności oznaczonej na etykiecie produktu.
Przechowywanie odczynnika w niewłaściwej temperaturze (np. w warunkach
podwyższonej temperatury lub wielokrotne rozmrażanie i zamrażanie) może
przyspieszyć utratę reaktywności.
POBIERANIE MATERIAŁU DO BADAŃ
Nie ma potrzeby przygotowania pacjenta przed pobraniem próbki. Próbki
krwi żylnej należy pobierać w typowy sposób na cytrynian lub EDTA, a
badanie należy wykonać jak najszybciej po pobraniu krwi. W razie opóźnienia
badania próbki należy przechowywać w temp. 2-8°C. Odczynnik nie nadaje
się do oznaczeń próbek wykazujących makroskopową hemolizę lub
zanieczyszczenia mikrobiologiczne. Przechowywanie próbek w temperaturze
innej od zalecanej może skutkować uzyskaniem fałszywie dodatnich lub
fałszywie ujemnych wyników oznaczeń.
WYMAGANE MATERIAŁY NIEWCHODZĄCE W SKŁAD ZESTAWU
Metoda na szkiełku
mikroskopowym
• Szkiełko podstawowe
• Sól fizjologiczna lub zgodna
surowica (osocze)
• Minutnik laboratoryjny
Metoda mikropłytkowa
• Mikropłytka ze studzienkami „U”
• Sól fizjologiczna (roztwór
izotoniczny)
• Minutnik laboratoryjny
• Wirówka (RCF 100)
• Wytrząsarka do mikropłytek
• Automatyczny czytnik mikropłytek
(wyposażenie opcjonalne)
System Ortho BioVue
• Kasety Ortho BioVue®
Polyspecific lub AHG Anti-IgG
• Sól fizjologiczna (roztwór
izotoniczny), sól fizjologiczna
buforowana fosforanem (PBS) lub
rozpuszczalnik do
erytrocytów Ortho® (0,8%)
• Mikropipety o objętości
dozowania 10, 40 i 50 μl
• Inkubator (temp. inkubacji 37°C)
• Minutnik laboratoryjny
• Wirówka kompatybilna z
kasetami systemu Ortho BioVue
• Czytnik (opcjonalny)
Metoda probówkowa
•Probówka
• Sól fizjologiczna (roztwór
izotoniczny)
• Inkubator (temp. inkubacji 37°C)
• Minutnik laboratoryjny
• Wirówka (RCF 1000)
Pośredni test antyglobulinowy
• Odczynnik zawierający
przeciwciała przeciwko ludzkiej
globulinie
• Erytrocyty uczulone IgG (komórki
kontrolne testu Coombsa)
Karta DiaMed ID (Bio-Rad)
• Karta Coombs anti-IgG ID lub
LISS/Coombs
• Sól fizjologiczna (roztwór
izotoniczny), sól fizjologiczna
buforowana fosforanem (PBS) lub
rozpuszczalnik Diluent 2 ID
• Mikropipety o objętości
dozowania 10, 25 i 50 μl
• Inkubator (temp. inkubacji 37°C)
• Minutnik laboratoryjny
• Wirówka kompatybilna z
kartami ID
• Czytnik (opcjonalny)
ZALECANE METODY
OGRANICZENIA METODY
1.
Wyniki oznaczenia mogą być fałszywie dodatnie w przypadku krwinek z
dodatnim wynikiem bezpośredniego testu antyglobulinowego (DAT). W celu
wykrycia wyników fałszywie dodatnich zaleca się wykonywanie kontroli z
użyciem odczynnika BIOSCOT Monoclonal Control (kod produktu: TT).
1.1.
1.2.
1.3.
1.4.
METODA SZKIEŁKOWA (Niezalecana do wykrywania słabych lub
częściowych odmian antygenu D)
Przygotować 35-50% zawiesinę badanych krwinek czerwonych w
autologicznym (lub zgodnym grupowo) osoczu, surowicy lub soli
fizjologicznej.
Na czyste, oznakowane szkiełko mikroskopowe nanieść 1 kroplę (40 µl)
odczynnika Anty-D.
Dodać 1 kroplę (40 µl) zawiesiny badanych krwinek czerwonych.
Wymieszać antysurowicę z krwinkami na powierzchni o średnicy
około 2 cm przez delikatne poruszanie szkiełkiem. Po 2 minutach
makroskopowo odczytać wynik testu. Należy zwrócić uwagę, by nie
interpretować wysychania mieszaniny jako aglutynacji.
2. METODA PROBÓWKOWA
2.1. Przemyć erytrocyty co najmniej jednokrotnie i przygotować 3-5%
zawiesinę erytrocytów w izotonicznej soli fizjologicznej.
2.2. Do oznakowanej probówki wprowadzić 1 kroplę (40 µl) odczynnika
Anty-D.
2.3. Dodać 1 kroplę (40 µl) zawiesiny badanych krwinek czerwonych.
2.4. Roztwór wymieszać i odwirować z przyspieszeniem 1000 RCF przez
20 sekund.
2.5. Ostrożnie wstrząsnąć probówką, aby oderwać erytrocyty od ścianek
probówki, a następnie makroskopowo skontrolować obecność
aglutynacji.
2.6. W przypadku wyniku ujemnego lub słabo dodatniego można wykonać
weryfikację za pomocą pośredniego testu antyglobulinowego w celu
wykrycia słabych lub częściowych odmian antygenu D.
3.
3.1.
3.2.
3.3.
POŚREDNI TEST ANTYGLOBULINOWY
Wykonać etapy 2.1-2.5
Wymieszać i inkubować w temperaturze 37°C przez 15 minut.
Przemyć krwinki jednokrotnie w izotonicznej soli fizjologicznej,
a następnie ostrożnie zlać roztwór soli.
3.4. Dodać 2 krople (80 µl) odczynnika Anti-Human Globulin, wymieszać
i wirować z przyspieszeniem 1000 RCF przez 20 s.
3.5. Ostrożnie wstrząsnąć probówką, aby uruchomić erytrocyty, a następnie
makroskopowo skontrolować obecność aglutynacji.
3.6. W celu potwierdzenia ujemnego wyniku dodać krwinki czerwone
uczulone przeciwciałami IgG (krwinki kontrolne testu Coombsa).
W wypadku braku aglutynacji test należy uznać za nieważny i powtórzyć.
4.
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
4.5.
4.6.
4.7.
4.8.
TECHNIKA MIKROPŁYTKOWA (niezalecana do wykrywania słabych
lub częściowych odmian antygenu D)
Przygotować zawiesinę 3-5% roztworu badanych erytrocytów
w izotonicznej soli fizjologicznej.
Do odpowiednich studzienek mikropłytki wprowadzić 1 kroplę (40 µl)
odczynnika Anty-D.
Dodać do odpowiednich studzienek równą objętość (40 µl) zawiesiny
erytrocytów.
Wymieszać zawartość studzienek ręcznie lub wytrząsarką
do mikropłytek.
Inkubować mikropłytkę w temp. pokojowej przez 15-20 minut.
Wirować z przyspieszeniem 100 RCF przez 40 sekund.
Odtworzyć zawiesinę erytrocytów ręcznie lub za pomocą wytrząsarki
do mikropłytek.
Odczytać wynik makroskopowo lub za pomocą czytnika. Wynik uzyskany
w czytniku mikropłytek wymaga weryfikacji przez użytkownika.
5. SYSTEM DIAMED ID (BIO-RAD)
5.1. Przygotować 3-5% zawiesinę badanych erytrocytów w izotonicznej soli
fizjologicznej lub PBS albo 0,8% zawiesinę w roztworze Diluent 2 ID.
5.2. Dodać 10 µl 3-5% zawiesiny (lub 50 µl 0,8% zawiesiny) erytrocytów do
mikroprobówki lub karty systemu ID.
5.3. Do odpowiedniej mikroprobówki dodać 25 µl odczynnika Anty-D.
5.4. Ostrożnie wymieszać i inkubować w temperaturze 37°C przez 10 minut.
5.5. Odwirować kartę systemu ID, przestrzegając czasu oraz przeciążenia
podanych przez producenta karty systemu ID.
5.6. Odczytać wynik makroskopowo lub za pomocą czytnika. Wynik uzyskany
w czytniku mikropłytek wymaga weryfikacji przez użytkownika.
6. SYSTEM ORTHO BIOVUE
6.1. Przygotować 3-5% zawiesinę badanych erytrocytów w izotonicznej soli
fizjologicznej lub PBS albo 0,8% zawiesinę w roztworze Ortho 0.8% Red
Cell Diluent.
6.2. Dodać 10 µl zawiesiny 3-5% (lub 50 µl zawiesiny 0,8%) erytrocytów do
komory reakcyjnej kasety Ortho BioVue.
6.3. Do odpowiedniej komory reakcyjnej dodać 40 µl odczynnika Anty-D.
6.4. Ostrożnie wymieszać i inkubować w temperaturze 37°C przez 10 minut.
6.5. Odwirować kasetę, przestrzegając czasu oraz przeciążenia podanych
przez producenta.
6.6. Odczytać wynik makroskopowo lub za pomocą czytnika. Wynik uzyskany
w czytniku mikropłytek wymaga weryfikacji przez użytkownika.
Stosowanie twardych mikropłytek polistyrenowych jest korzystniejsze niż
stosowanie płytek z PCV. Przydatność każdej partii mikropłytek należy
zweryfikować w warunkach stosowanych przez użytkownika.
Nieprawidłowe przechowywanie lub użytkowanie kard ID lub kaset Ortho
BioVue może być przyczyną błędnych wyników oznaczenia. Karty i kasety
należy przechowywać i użytkować zgodnie z instrukcjami producentów.
Kontaminacja badanego materiału lub nieprzestrzeganie zalecanych zasad
oznaczenia mogą prowadzić do uzyskania wyników fałszywie dodatnich lub
ujemnych.
Nie zaleca się stosowania metody szkiełkowej ani mikropłytkowej do
wykrywania słabych lub częściowych odmian antygenu D.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA
Stosując zalecane techniki przeprowadzono badania próbek od zdrowych
dawców, pacjentów leczonych w warunkach klinicznych oraz noworodków
z odczynnikiem Anty-D (linia komórkowa: TH-28/MS-26). Zestaw próbek był
reprezentatywny dla wszystkich głównych fenotypów grupy RhD. Całkowitą
liczbę testów (n) oraz czułość i swoistość obliczoną dla każdej z metod
przedstawiono w tabeli poniżej.
Anty-D (kod produktu BM)
METODA
CZUŁOŚĆ
SWOISTOŚĆ
n
%
n
%
Probówkowa
2261
99,6
1016
100
Mikropłytkowa
17654
99,9
10231
100
Na szkiełku mikrosk.
474
100
130
100
System DiaMed ID
(Bio-Rad)
282
100
218
98,1
System Ortho
BioVue
277
100
225
99,1
Definicje zgodnie z Common Technical Specifications (CTS):
Czułość diagnostyczna: Prawdopodobieństwo uzyskania dodatniego wyniku
badania próbki zawierającej substancję docelową.
Swoistość diagnostyczna: Prawdopodobieństwo uzyskania ujemnego wyniku
badania próbki niezawierającej substancji docelowej.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
Windmann, F.K. ed. Technical Manual 10th Edition. Washington
D.C.: American Association of Blood Banks, 1990.
Race, R.R. and Sanger, R. Blood Groups in Man, 6th Edition.
Oxford: Blackwell Scientific Publications, 1975.
Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology,
4th Edition. Montgomery Publication, 1998.
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United
Kingdom, 5th Edition. The Stationary Office, 2001.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Wielka Brytania
Tel.: +44 (0)1506 404000 Faks: +44 (0)1506 404001
PI129/f
2015-02