Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen Klon MIB-1

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Ki-67 Antigen
Klon MIB-1
nr kat. M7240
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Mysie przeciwciało monoklonalne przeciw ludzkiemu antygenowi Ki-67 (Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67
Antigen, Klon MIB-1) jest przeznaczone do badań immunohistochemicznych. Przy ponad 400 publikacjach w
literaturze fachowej przeciwciało MIB-1 stało się wzorcowym mysim przeciwciałem monoklonalnym dla wykazania
obecności antygenu Ki-67 w próbkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. W diagnostyce
histopatologicznej oraz biologii komórkowej przeciwciało okazało się cennym narzędziem dla wykazania obecności
antygenu Ki-67 w komórkach normalnych i nowotworowych, np. w tkance miękkiej mięsaka (1), gruczolaku
sterczowym (2) oraz raku sutka (3). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Wstęp
Antygen Ki-67 jest białkiem jądrowym, określonym przez swoją reaktywność z przeciwciałem monoklonalnym z
klonu Ki-67 (4). Zidentyfikowano dwie izoformy o kDa 345 i 395 (5). Preferencyjna ekspresja antygenu Ki-67
występuje podczas wszystkich faz aktywnych cyklu komórkowego (G1, S, G2 i fazy M), lecz nie występuje w
komórkach nieaktywnych (faza G0)(4). Podczas okresu między fazami antygen moŜe być wyłącznie wykrywany
w obrębie jądra, podczas gdy w mitozie większość białka jest przemieszczona na powierzchnię chromosomów.
Antygen ulega gwałtownemu rozkładowi w chwili, gdy komórka wchodzi w stan nieproliferacji (6) oraz nie
występuje ekspresja Ki-67 podczas procesu naprawy DNA (7).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant kultury komórek dializowany
wobec 0,05 mol/L Tris/HCL, 1% albuminy z surowicy wołowej o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: MIB-1 (8). Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysiego Ig: Zobacz informację podaną na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Białko ludzkiego rekombinantu odpowiadające fragmentowi 1002 bp Ki-67 cDNA (8).
Swoistość
Podczas stosowania techniki Western blotting wobec lizatów linii komórek szpiczaka rozsianego, IM-9,
przeciwciało MIB-1 znakuje pasma 345 i 395 kDa identyczne z pasmami znakowanymi przez oryginalne
przeciwciała Ki-67. Ponadto doświadczenia z wykorzystaniem techniki Western blotting i konkurencyjnych
wiązań wyraźnie dowodzą, Ŝe MIB-1, podobnie jak oryginalne przeciwciało Ki-67, reaguje z epitopem
kodowanym przez element powtarzający 66 bp w genie Ki-67. W badaniach immunohistochemicznych
przeciwciała MIB-1 i przeciwciała przeciw Ki-67 dają identyczny wzór barwienia na seryjnych zamroŜonych
skrawkach migdałkowych (8). Przeciwciało MIB-1 rozpoznaje natywny antygen Ki-67 oraz fragmenty
rekombinantu cząsteczki Ki-67 (8).
Jak wykazano w badaniach immunohistochemicznych, przeciwciało reaguje krzyŜowo z białkiem równowaŜnym
do Ki-67 u róŜnych ssaków, m.in. krów, psów, koni, owiec (6) i świń.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie, w stęŜeniu które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z
działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie.
(106767-004)
Dako Denmark A/S
M7240/PL/KIA/2011.09.20 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Obróbka wstępna: Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki
tkanek z HIER przy uŜyciu rozcieńczonego Dako Target Retrieval Solution, Low pH (10x) (nr kat. S1699) lub
rozcieńczonego EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005) przez 20 minut. W trakcie
przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
Skrawki zamroŜone i przygotowanie komórek: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków
mroŜakowych utrwalanych acetonem.
Procedury barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, nr kat. M7240, mogą być uŜywane
w zakresie rozcieńczeń 1:75-1:150 do skrawków tkanek ludzkiego migdałka lub błony śluzowej jelita
utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie, po obróbce wstępnej w postaci 20-minutowego cieplnego
odmaskowania antygenu w roztworze Target Retrieval Solution, Low pH (nr kat. S1699/K8005) i 20-minutowej
inkubacji z przeciwciałem pierwotnym w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w
zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w
kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczony
do tego samego stęŜenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. Zalecane jest rozcieńczanie tych odczynników
bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczenie w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809, chyba
Ŝe stabilność rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej potwierdzono w praktyce w ramach procedury
wykonywania odczynu. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać
dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: Zalecanym system wizualizacji jest EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8000/K8010) lub
Dako REAL™ EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+,Rabbit/Mouse (nr kat. K5007*) przy
przeprowadzeniu 20-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Uwaga: Dla HIER naleŜy uŜyć rozcieńczonego Dako Target Retrieval Solution, Low pH (10x) (nr kat. S1699)
lub rozcieńczonego EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005).
*K5007 jest niedostępny w Stanach Zjednoczonych.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych takich, jak Dako Autostainer i Autostainer Link 48.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
Podczas badań immunohistochemicznych czasami obserwowano oznaczanie komponentów tkanek w
ściankach naczyń i zrębie trzustkowym.
Charakterystyka działania
Komórki oznaczone przez przeciwciało wykazują jądrowy wzór wybarwienia z wyjątkiem komórek mitotycznych,
w których znakowane są chromosomy i cytoplazma.
Tkanki normalne: W jelicie cienkim i w okręŜnicy komórki śluzowe szyjki gruczołu Ŝołądkowego i komórki
kosmków jelitowych reagują dodatnio z przeciwciałem. Podobnie jak to się ma w przypadku komórek ośrodków
zarodkowych kępek Payer’a. Komórki powierzchniowe naskórka i inne komórki błony śluzowej, np. komórki
Paneth’a oraz komórki podśluzówkowej tkanki łącznej reagują całkowicie ujemnie. To samo dotyczy komórek
mięśniowych z wyjątkiem kilku komórek w mięśniach gładkich reagujących dodatnio. Komórki nerek, wątroby,
trzustki i mózgu reagują ujemnie (9).
Tkanki patologiczne: Podczas badań 123 mięsaków tkanki miękkiej przy zastosowaniu przeciwciała MIB-1
wykazano obecność antygenu Ki-67 z największą ekspresją w złośliwej włóknistej histocytomie oraz najniŜszą
ekspresję w tłuszczakomięsakach. Ponadto przeciwciało stosowano skutecznie do wykazania antygenu Ki-67 w
221 przypadkach raka prostaty (2) i 919 przypadkach raka sutka (3). W niektórych przypadkach przeciwciało
wykazało barwienie zarówno błonowe, jak i cytoplazmatyczne. Barwienie błonowe/cytoplazmatyczne wystąpiło w
badaniu 322 przypadków inwazyjnych raków przewodowych sutka i błonowe/cytoplazmatyczne Ki-67 okazało się
być powiązane z występowaniem nowotworów stopnia 3, negatywnym wynikiem ER i amplifikacją HER2 (10).
Odsyłacze
1. Huuhtanen RL, Blomqvist CP, Wiklund TA, Böhling TO, Virolainen MJ, Tukiainen EJ, et al. Comparison of
the Ki-67 score and S-phase fraction as prognostic variables in soft-tissue sarcoma. Br J Cancer
1999;79:945-51.
2. Borre M, Bentzen SM, Nerstrom B, Overgaard J. Tumor cell proliferation and survival in patients with
prostate cancer followed expectantly. J Urol 1998;159:1609-14.
.
3. Seshadri R, Leong AS-Y, McCaul K, Firgaira FA, Setlur V, Horsfall DJ. Relationship between p53 gene
abnormalities and other tumour characteristics in breast-cancer prognosis [published erratum appears in Int
J Cancer 1996;69:354]. Int J Cancer 1996;69:135-41.
4. Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle analysis of a cell proliferationassociated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984;133:1710-5.
5. Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al. Immunobiochemical and
molecular biologic characterization of the cell proliferation-associated nuclear antigen that is defined by
monoclonal antibody Ki-67. Am J Pathol 1991;138:867-73.
6. Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown [review]. J Cell Physiol
2000;182:311-22.
7. Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of an enzyme-linked
immunosorbent assay based on the detection of the Ki-67 protein. J Immunol Methods 1994;177:113-7.
8. Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-67-equivalent murine
monoclonal antibodies (MIB 1-3) generated against bacterially expressed parts of the Ki-67 cDNA containing
three 62 base pair repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993;68:629-36.
9. Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al. Monoclonal antibodies against
recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed
formalin-fixed paraffin sections. J Pathol 1992;168:357-63.
10. Faratian D, Munro A, Twelves C,Bartlett JMS. Membranous and cytoplasmic staining of Ki67 is associated
with HER2 and ER status in invasive breast carcinoma.Histopathology 2009:54:254-257.
(106767-004)
Dako Denmark A/S
M7240/PL/KIA/2011.09.20 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
Nr katalogowy
Temperatura przechowywania
Materiał medyczny
przeznaczony do badań in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji uŜycia
Stosować do
(106767-004)
Dako Denmark A/S
Producent
M7240/PL/KIA/2011.09.20 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17