QUANTA LiteTM dsDNA

QUANTA Lite® ENA 4
708555
Do diagnostyki in vitro
Złożoność CLIA: Wysoka
Przeznaczenie
QUANTA LiteTM ENA 4 to test immunoenzymatyczny (ELISA) do półilościowego wykrywania przeciwciał
przeciwko Sm, RNP, SS-A (60 kDa i 52 kDa) i SS-B w surowicy ludzkiej. Obecność tych przeciwciał może być
stosowana w połączeniu z objawami klinicznymi i innymi badaniami laboratoryjnymi, aby wspomóc
diagnostykę tocznia rumieniowatego układowego (SLE) i powiązanych chorób tkanki łącznej, takich jak
zespół Sjögrena.
Podsumowanie i wyjaśnienie testu
Przeciwciała przeciwjądrowe (ANA) występują w wielu różnych chorobach tkanki łącznej i jako takie stanowią
czuły cel badania przesiewowego.1 Pomimo tego, że badanie ANA jest doskonałym badaniem przesiewowym
dla SLE (wynik negatywny praktycznie wyklucza aktywne SLE)2, w żadnym wypadku nie jest to badanie
swoiste. Przeciwciała przeciwko ekstrahowalnym antygenom jądrowym (ENA) mogą dostarczać istotnych
informacji diagnostycznych i prognostycznych podczas oceny pacjentów z podejrzeniem różnych chorób
tkanki łącznej, takich jak SLE, zespół Sjögrena i zapalenie wielomięśniowe. Cztery najbardziej użyteczne i
najczęściej badane autoprzeciwciała przeciwko ENA reagują z antygenami Sm, RNP, SS-A i SS-B.
Zestaw QUANTA LiteTM ENA 4 ELISA umożliwia jednoczesne badanie przesiewowe próbek pacjenta w
jednym dołku pod kątem autoprzeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A i SS-B. Próbki, które w tym czułym
badaniu przesiewowym dały wynik negatywny mogą być zgłaszane jako ujemne pod kątem Sm, RNP, SS-A i
SS-B. W niektórych przypadkach próbki te mogą być dalej badane pod kątem innych ENA, takich jak Scl-70 i
Jo-1. Próbki, które w tym badaniu przesiewowym dały wynik pozytywny powinny zostać dodatkowo zbadane z
zastosowaniem innych testów swoistymi wobec ENA, takie jak testy ELISA i podwójnej dyfuzji Ouchterlony,
aby potwierdzić wynik pozytywny i swoistość autoprzeciwciał oraz ewentualnych poziomów ilościowych
swoistego przeciwciała.
Do wykrywania przeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A i SS-B stosowano wiele metod, w tym podwójną
dyfuzję Ouchterlony i test aglutynacji pasywnej. Opracowano także użyteczne klinicznie testy ELISA do
wykrywania przeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A i SS-B. Technika ELISA wykorzystywana w tych
badaniach jest obiektywna, półilościowa i może być dogodnie wykorzystywana do badania dużej liczby
pacjentów.
Zasada badania
Oczyszczone antygeny Sm, RNP, SS-A i SS-B są wiązane z mikrodołkami polistyrenowej płytki w warunkach,
które pozwalają na zachowanie antygenu w stanie natywnym. Wstępnie rozcieńczone kontrole i rozcieńczone
surowice pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków, umożliwiając obecnym przeciwciałom przeciwko
Sm, RNP, SS-A i/lub SS-B związanie się z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest
wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciwludzkiego IgG. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgG znakowanym enzymem
związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po
wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgG znakowanych enzymem, aktywność
pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy.
Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności
barwy, która powstaje w dołkach z próbkami od pacjenta z barwą dołków kontrolnych.
Odczynniki
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Polistyrenowe płytki z mikrodołkami ELISA pokryte oczyszczonymi antygenami Sm, RNP, SS-A i SS-B
(12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze
Kontrola negatywna ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i surowicę ludzką bez ludzkich
przeciwciał przeciwko ENA 4, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml
Słabo pozytywna kontrola testu ENA 4 ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała
surowicy ludzkiej przeciwko RNP, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml
Silnie pozytywna kontrola testu ENA 4 ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała
surowicy ludzkiej przeciwko RNP, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml
Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka – zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną
TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml
Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x – zabarwienie czerwone, zawiera sól
fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć
w sekcji Metody.
Koniugat HRP IgG, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgG, 1 fiolka – zabarwienie niebieskie, zawiera
bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml
Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml
Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344 M, 1 fiolka – bezbarwny, 10 ml
Ostrzeżenia
1.
2.
OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (0,02% chloramfenikol) w
rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka.
Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu
zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają
1
3.
4.
5.
6.
7.
8.
przeciwciał przeciwko HIV, HbsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie
zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego też
względu słabo pozytywną kontrolę testu ENA 4 ELISA, silnie pozytywną kontrolę testu ENA 4 ELISA i
kontrolę negatywną testu ELISA należy obsługiwać w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie
zakaźny.3
Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w
przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z
ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli
do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie
dopuścić do gromadzenia się azydku.
Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być
toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych,
należy unikać kontaktu ze skórą i oczami.
Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania,
spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub
kontaktu ze skórą i oczami.
Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać
wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z
kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być
toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami.
Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej.
Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych
przepisów w zakresie utylizacji odpadów.
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych in vitro.
Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować
osiągnięciem niespójnych wyników.
Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA
wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła.
Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi
urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w
stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest
potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w
akceptowalnych limitach.
2
5.
6.
7.
8.
9.
Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową
odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność
płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy
trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga
staranności i precyzji.
Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej.
Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i
osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania.
Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać
niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest
przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP.
Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem
lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych,
takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację
koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie
wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia.
Warunki przechowywania
1.
2.
3.
Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. Odczynniki są
trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami.
Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce
foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2–8°C.
Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2–8°C.
Pobieranie próbek
Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do
próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne
zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub
lipemicznej surowicy albo próbek.
Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument NCCLS H18-A2 zaleca następujące
warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin.
2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2–8°C. 3) Jeśli
badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w
temperaturze -20°C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze
wymieszane.
Badanie
Dostarczone materiały
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Płytka z mikrodołkami ENA 4 ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem
1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej testu ELISA
1,2 ml wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA
1,2 ml wstępnie rozcieńczonej silnie pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA
50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP
25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x
10 ml koniugatu przeciwciała IgG HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgG
10 ml chromogenu TMB
10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344 M
3
Wymagane materiały nie dołączone do zestawu
Mikropipety na 5, 100, 200–300 i 500 µl
Jednorazowe końcówki mikropipet
Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości
Woda destylowana lub dejonizowana
Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania
Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla
odczytów przy dwóch długościach fali)
Sposób przygotowania
Przed rozpoczęciem
1.
2.
3.
4.
Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20 - 26oC) i dobrze wymieszać.
Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do
płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie
przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml
koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte.
Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2–8oC.
Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl
rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od
przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ słabo pozytywnej kontroli ELISA, silnie pozytywnej kontroli
ELISA i kontroli negatywnej ELISA.
Ustalenie obecności lub nieobecności ENA 4 z zastosowaniem arbitralnych jednostek wymaga dwóch
dołków dla każdej z trzech kontroli oraz jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki od pacjenta.
Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek.
Procedura badania
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE
DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20–26°C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w
uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i
dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną.
Do dołków dodać 100 µl wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA, silnie
pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA, kontroli negatywnej testu ELISA i rozcieńczone próbki
pochodzące od pacjentów. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na
równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki.
Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Dodać 200–300 µl rozcieńczonego
buforu do płukania HRP do wszystkich dołków, a następnie odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze
dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale
pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie
opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w
przypadku dodawania próbki.
Do każdego dołka dodać 100 µl koniugatu IgG HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z
zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych.
Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO
ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ
NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w
etapie 2.
Etap płukania: Powtórzyć etap 3.
Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w
temperaturze pokojowej.
Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas
dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać
płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków.
Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej
godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością
fali może być długość 620 nm.
Kontrola jakości
1.
2.
3.
4.
Aby upewnić się, że wszystkie odczynniki i procedury funkcjonują prawidłowo, każdą serię próbek
należy testować wraz ze słabo pozytywną kontrolą testu ENA 4 ELISA, silnie pozytywną kontrolą testu
ELISA ENA 4 i kontrolą negatywną testu ELISA.
Należy zauważyć, że ponieważ słabo pozytywna kontrola testu ENA 4 ELISA, silnie pozytywna
kontrola ENA 4 i kontrola negatywna testu ELISA są już wstępnie rozcieńczone, to nie będą one
stanowić kontroli w przypadku procedur związanych z rozcieńczaniem próbek.
Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub
krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne
można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze
≤ -20°C.
Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe
kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako
4
nieważne i powinno zostać powtórzone.
a.
Absorbancja wstępnie rozcieńczonej silnie pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA musi być
większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4
ELISA, która z kolei musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli
negatywnej ELISA.
b.
Absorbancja wstępnie rozcieńczonej silnie pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA musi być
większa niż 1,0, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA nie
może przekroczyć 0,2.
c.
Absorbancja słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA musi być przynajmniej dwukrotnie
wyższa od absorbancji kontroli negatywnej testu ELISA lub przekraczać 0,25.
d.
Kontrola negatywna testu ELISA i silnie pozytywna kontrola testu ENA 4 ELISA mają za
zadanie wykazać ewentualne istotne nieprawidłowe działanie odczynnika. Silnie pozytywna
kontrola testu ENA 4 ELISA nie zapewni dokładności przy wartości granicznej badania.
e.
Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie
NCCLS C24-A.
Obliczanie wyników
W pierwszej kolejności jest określana średnia gęstość optyczna każdego zestawu duplikatów. Reaktywność
każdej próbki można następnie wyliczyć, dzieląc średnią gęstość optyczną próbki przez średnią gęstość
optyczną słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA. Otrzymany wynik mnoży się przez liczbę jednostek
przypisanych do słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA, którą można znaleźć na etykiecie.
Gęstość optyczna próbki
Wartość próbki =
(jednostki)
gęstość optyczna słabo pozytywnej kontroli testu ENA 4 ELISA
x słabo pozytywna
kontrola testu ENA 4 ELISA
(jednostki)
Reaktywność w sposób nieliniowy zależy od ilości obecnych przeciwciał. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał
u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku reaktywności, jednak zmiana ta nie
jest proporcjonalna (tzn. podwojenie stężenia przeciwciał nie oznacza podwojenia reaktywności). Jeśli
wymagane jest dokładniejsze oszacowanie ilości przeciwciał pacjenta, należy przeprowadzić badanie
seryjnych rozcieńczeń próbek pochodzących od pacjenta i ostatnie rozcieńczenie w ramach badania z
wynikiem pozytywnym powinno być zaraportowane jako miano przeciwciał pacjenta.
5
Interpretacja wyników
Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w
populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium
powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji
pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami.
Próbka następnie może być sklasyfikowana jako negatywna, słabo pozytywna, średnio pozytywna lub silnie
pozytywna, zgodnie z poniższą tabelą.
Jednostki
Negatywny
<20
Słabo pozytywna
20 – 39
Średnio pozytywna
40 – 80
Silnie pozytywna
>80
Wszystkie próbki pozytywne powinny być ponownie zbadane za pomocą testów swoistych wobec Sm, RNP,
SS-A i SS-B w celu określenia miana i swoistości obecnego przeciwciała.
1.
Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A lub SS-B i sugeruje
możliwość występowania tocznia rumieniowatego układowego (SLE) lubi powiązanych chorób tkanki
łącznej, takich jak zespół Sjögrena.
2.
Wynik negatywny świadczy o tym, że nie występują przeciwciała przeciwko Sm, RNP, SS-A lub SS-B,
bądź ich poziom jest poniżej dolnej wartości granicznej badania.
3.
Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: „Następujące
wyniki uzyskano za pomocą testu INOVA QUANTA LiteTM ENA 4 ELISA. Nie można stosować
zamiennie wartości przeciwciał przeciwko ENA 4 uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych
innych producentów. „Rząd wielkości poziomów raportowanego IgG nie może być skorelowany z
mianem punktu końcowego”.
Ograniczenia badania
1.
2.
3.
4.
5.
Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce
pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać
fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu.
Nie u wszystkich pacjentów z SLE występują przeciwciała przeciwko Sm, RNP, SS-A lub SS-B.
Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami
serologicznymi.
Niektóre próbki mogą mieć niskie miana przeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A i SS-B, które byłyby
poniżej pozytywnej wartości granicznej dla każdego pojedynczego testu, ale ich działanie łączne może
dać pozytywny wynik testu ENA 4 ELISA.
Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica.
Spodziewane wartości
Zdolność testu QUANTA Lite® ENA 4 ELISA do wykrywania przeciwciał przeciwko Sm, RNP, SS-A i SS-B
oceniano przez porównanie z dostępnymi w handlu testami podwójnej dyfuzji firmy INOVA Diagnostics, Inc.
Wyniki testów Ouchterlony oznaczano jako pozytywne, jeżeli linie precypitatu były obecne i jako negatywne
jeżeli nie obserwowano żadnej linii. Próbki o reaktywności w teście ELISA równe lub wyższe niż 20 jednostek
były uważane za pozytywne, podczas gdy próbki o mniejszej reaktywności były negatywne.
Normalny zakres
Wybrano sto jeden losowych próbek surowicy i zbadano je za pomocą zestawu ENA 4 ELISA. Średnia
populacji próbki wyniosła 6,5 jednostki ze standardowym odchyleniem 1,4 jednostki. Zakres populacji wyniósł
od 4,5 do 15 jednostek. Ta próba wykazała, że normalna średnia wynosi ponad 9,6 standardowych odchyleń
poniżej wartości granicznej.
Swoistość i wrażliwość względna
W celu określenia względnej czułości i swoistości testu próbki od 223 pacjentów z dodatnim wynikiem ANA
zawierające przeciwciała przeciwko wielu różnym antygenom jądrowym zbadano zarówno za pomocą metody
Ouchterlony jak i ELISA.
Spośród 223 przetestowanych próbek 124 były pozytywne a 93 negatywne wg obu metod. Jedna z próbek
była pozytywna w teście Ouchterlony, ale negatywna w teście ELISA. Ta próbka dała także wynik pozytywny
w innej dostępnej w handlu metodzie ELISA dla RNP.
Ostatnich 5 próbek było pozytywnych wg ELISA ale negatywnych wg badania Ouchterlony. Każda z tych
próbek była także badana za pomocą innej dostępnej procedury ELISA i dwie z pięciu wykazywały pozytywną
reakcję z SS-A, natomiast pozostałe trzy próbki dały wynik negatywny w każdym ze swoistych testów. Wyniki
badania przesiewowego ENA 4 ELISA przedstawiono w poniższej tabeli.
OT
+
-
ELISA
+
124
1
5
93
Wrażliwość względna
Swoistość względna
Skuteczność względna
6
99,2%
94,9%
97,3%
Precyzja i powtarzalność
Precyzja i powtarzalność badania zostały przebadane przez przeprowadzenie sześciu powtórzeń każdej silnie
pozytywnej i słabo pozytywnej próbki w sześciu oddzielnych badaniach. Średnia reakcyjność silnie
pozytywnych wynosiła 81,8 jednostki, a wartość średnia słabo pozytywnych wynosiła 22,0. Poniżej znajduje
się podsumowanie odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki.
Silnie pozytywna
Słabo pozytywna
SD
CV
SD
CV
Łącznie
3,4
4,2%
0,8
3,6%
W ramach serii
1,6
2,0%
0,7
3,2%
Pomiędzy seriami
3,1
3,8%
0,6
2,6%
7
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
Tan EM: Autoantibodies to nuclear antigens(ANA): Their immunobiology and medicine.
Advances in Immunology 33: 167-239, 1982.
Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus
Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: 1271-1277, 1982.
Centers for Disease Control/National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth
Edition, 2007.
QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc.
Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone©
Wyprodukowano przez:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
Stany Zjednoczone Ameryki
Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745
Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00+ 1 858-805-7950
[email protected]
Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Niemcy
Tel.: +49-6894-581020
Faks.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
628555POL
Merzec 2011
Wersja 0
8