FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD68 klon PG-M1

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD68
klon PG-M1
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS613
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD68, klon PG-M1, Ready-to-Use, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunocytochemii w aparatach Dako
Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciało znakuje makrofagi i stanowi uŜyteczne narzędzie identyfikacji ostrej
białaczki szpikowej (AML) typu M4 (mielomonocytarna) i M5 (monocytarna) oraz mięsaków histiocytarnych (1).
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną,
wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
CD68 to silnie glikozylowane białko błony lizosomalnej o masie cząsteczkowej 110 000. Białko CD68 naleŜy do
glikoprotein lizosomalnych (LGP), białek transportowych błonowo-plazmatycznych biorących udział w endocytozie
i/lub w ruchu lizosomalnym.
CD68 wykazuje silną ekspresję w ziarnistościach cytoplazmatycznych i słabą na powierzchni makrofagów,
monocytów, neutrofili, bazofili i naturalnych komórek cytotoksycznych. Ponadto CD68 wykazuje ekspresję w około
40% limfocytów B krwi obwodowej i słabą ekspresję w 50% limfocytów B w ostrej białaczce limfoblastycznej.
CD68 znajdowany jest równieŜ w cytoplazmie tkanek niekrwiotwórczych, zwłaszcza w wątrobie oraz kanalikach
i kłębuszkach nerkowych (2). W przeciwieństwie do innych antygenów leukocytowych CD, cząsteczka CD68 jest
bardzo heterogeniczna antygenowo i róŜne przeciwciała przeciwko CD68 wykazują róŜną reaktywność komórkową (3).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: PG-M1 (3). Izotyp: IgG3, kappa.
Immunogen
Preparat ludzkich jednojądrowych komórek śledziony, zawierający ponad 80% komórek Gauchera (3).
Swoistość
Przeciwciała Anti-Human CD68, klon PG-M1, zostały zdefiniowane jako anty-CD68 podczas konferencji Fifth
International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens (5. międzynarodowe warsztaty
i konferencja na temat antygenów róŜnicujących ludzkie leukocyty) (1993) (4).
Przeciwciało znakuje komórki COS-1 i WOP transfekowane cDNA CD68. W przeciwieństwie do innych przeciwciał
CD68, znakujących zarówno makrofagi, jak i komórki szpikowe, przeciwciało PG-M1 wykrywa epitopy odporne
na utrwalanie w ograniczonej do makrofagów formie CD68 (3).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(116863-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
IS613/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision( FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8010).
W aparacie Dako Autostainer/Autostainer Plus wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji,
które są aktywne podczas korzystania z następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: CD68PG (bez barwienia kontrastowego) lub CD68PGH (z barwieniem kontrastowym)
W przypadku programów barwienia ≤10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „rinse buffer”. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy
płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision( FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i mózg,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja odczynu
Komórki linii monocytarnych/makrofagowych znakowane przeciwciałem wykazują odczyn cytoplazmatyczny
(rozlany lub ziarnisty).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W prawidłowej krwi obwodowej przeciwciało znakuje wyłącznie monocyty. W szerokim zakresie
testowanych tkanek oznakowane zostały wszystkie makrofagi. W szpiku kostnym dodatnie wyniki dały równieŜ
osteoklasty, podczas gdy granulocyty i prekursory szpikowe dawały wyniki konsekwentnie ujemne. W około 20%
przypadków obserwowano słabą reaktywność części megakariocytów. Jedyne dodatkowo znakowane przez
przeciwciało komórki tkanek prawidłowych to komórki Kupfera w wątrobie, komórki tuczne i komórki maziówki (3).
Makrofagi w ośrodkach rozmnaŜania migdałków wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki
mikroglejowe mózgu wykazują odczyn słaby do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: Spośród 431 nowotworów układu krwiotwórczego reaktywność na przeciwciało ograniczała
się do ostrej białaczki szpikowej typu M4 i M5, prawdziwych mięsaków histiocytarnych i mastocytozy. Konsekwentnie
ujemne wyniki wykazywały ostre białaczki mieloblastyczne typów M1, M2 i M3, złośliwe chłoniaki nieziarnicze
limfocytów B i T, chłoniaki ziarnicze, ostra białaczka limfoblastyczna i przewlekła białaczka szpikowa. Większość
z 370 nowotworów niezwiązanych z układem krwiotwórczym dała z przeciwciałem ujemne wyniki, z wyjątkiem
mięśniaka zarodkowego granulocytarnego (15/15), raka jasnokomórkowego nerki (6/13), glejaków (4/10),
oponiaków (10/18) i czerniaków (5/50) oraz, zgodnie z oczekiwaniami, guz olbrzymiokomórkowy kości (2/2)
i Ŝółtakoziarniaki (7/7), (3). Przeciwciało PG-M1 znakuje niektóre nowotwory niezwiązane z układem krwiotwórczym,
w szczególności około 10% czerniaków (3), w związku z czym diagnoza mięsaków histiocytarnych zawsze powinna
zostać wsparta dodatnim wynikiem badania komórek nowotworowych na obecność przynajmniej jednego innego
znacznika makrofagowego i/lub antygenu leukocytarnego CLA oraz ujemnym wynikiem badania na obecność
antygenów związanych z czerniakami i komórkami nabłonkowymi (1).
(116863-002)
Dako Denmark A/S
IS613/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Falini B, Flenghi L, Pileri S, Stein H, Dürkop H, Pasqualucci L, et al. M15.1. PG-M1 a new mAb directed against
a fixative-resistant, macrophage-restricted epitope of the CD68 molecule. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR,
Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New
York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 928-30.
2.
Goyert SM. MC12. CD68 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of
the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 1015-6.
3.
Falini B, Flenghi L, Pileri S, Gambacorta M, Bigerna B, Durkop H, et al. PG-M1: A new monoclonal antibody
directed against a fixative-resistant epitope on the macrophage-restricted form of the CD68 molecule. Am J
Pathol 1993;142:1359-72.
4.
Cordell JL, Falini B, Flenghi L, Jones DB, Pileri S, Radzun HJ, et al. M15. CD68 cluster workshop report. In:
Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25;
Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 925-7.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(116863-002)
Dako Denmark A/S
IS613/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17