Nr kat. IR524

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR524
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein, Ready-to-Use (Link), są przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Kwaśne białko włókienkowe gleju (Glial fibrillary acidic
protein, GFAP) jest głównym filamentem pośrednim dojrzałych astrocytów (1), a przeciwciało to przydatne jest w
identyfikacji astrocytów w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN) w warunkach prawidłowych i patologicznych (2 – 4).
Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z
wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z
uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
GFAP to cytopazmatyczne białko filamentowe o masie 50 kDa tworzące część cytoszkieletu w astrocytach, które
okazało się najbardziej swoistym znacznikiem komórek pochodzenia astrocytarnego. W centralnej domenie
pałeczkowej białko GFAP wykazuje znaczącą homologię strukturalną z innymi filamentami pośrednimi (5). W zakresie
funkcji uwaŜa się, Ŝe GFAP jest waŜne dla ruchomości i kształtu przez zapewnienie stabilności strukturalnej procesu
astrocytarnego (1). Na skutek urazu ludzkiego OUN wywołanego obraŜeniami, zaburzeniami genetycznymi lub
środkami chemicznymi astrocyty proliferują i wykazują rozległą hipertrofię masy komórkowej i procesów, przy
znaczącym zwiększeniu produkcji GFAP. W przeciwieństwie, ze wzrostem złośliwości astrocytów wiąŜe się postępujący
spadek produkcji GFAP. Tym samym złośliwe gwiaździaki posiadają mniej komórek nowotworowych o dodatnim,
intensywnym odczynie dla GFAP niŜ mniej złośliwe gwiaździaki i preparaty prawidłowej tkanki mózgowej (5).
Poza OUN czułe metody detekcji mogą wykazać obecność GFAP w komórkach Schwanna, komórkach gleju jelitowego,
nowotworach ślinianek i przerzutowych rakach nerek. Ponaddo immunoreaktywność GFAP wykazano w chrząsce
nagłośni, komórkach przysakdki, niedojrzałych oligodendrocytach, oponiakach brodawkowatych (1) i komórkach
mięśniowo-nabłonkowych piersi (6).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części
instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
GFAP izolowane z rdzenia kręgowego krowy.
Swoistość
Przeciwciało było poddawane absorpcji w fazie stałej z białkami surowicy ludzkiej i wołowej.
W immunoelektroforezie krzyŜowej z uŜyciem 50 µL stęŜonego przeciwciała na cm2 powierzchni Ŝelu nie
zaobserwowano reakcji z 2 µL osocza ludzkiego i 2 µL surowicy krowiej. Przeciwciało wykazuje jeden wyraźny
precypitat (GFAP) z ekstraktem krowiego mózgu. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue.
W testach wykonywanych pośrednią metodą ELISA nie obserwuje się reakcji z ludzkim osoczem ani surowicą wołową.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
(117787-002)
Dako Denmark A/S
IR524/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować mózg i okręŜnicę,
natomiast komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka wydajnościowa” we wszystkich dodatnich preparatach. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Rabbit, (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje astrocyty w mózgu (3), komórki gwiaździste przysadki mózgowej (7), komórki
Schwanna i komórki gleju jelitowego. Dodatkowo znakowane są komórki mięśniowo-nabłonkowe piersi (6). W mózgu
astrocyty wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W okręŜnicy komórki zwojów nerwowychw
splocie Auerbacha i Meissnera wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Nie zaobserwowano odczynu w
pęcherzu, tkance łącznej, wątrobie, tkance limfatycznej, mięśniach, trzustce, skórze i moczowodzie.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało oznakowało wszystkie 23 glejaki wielopostaciowe (GBM). Dla 20 z 23 GBM
przynajmniej 50% komórek złośliwych dało wynik dodatni dla GFAP. Oznaczono tylko 3 z 22 przypadków raka z
przerzutami do mózgu. Odczyn był zogniskowany i ograniczony do mniej niŜ 10% komórek złośliwych (3). 5/5
gwiaździaków półkulowych rzadkiego typu ziarnistego wykazało skupiony odczyn dodatni GFAP z przeciwciałem (4),
które znakowało równieŜ 7/7 Ŝółtakogwiaździaków pleomorficznych (8), oraz komórki gwiaździste płata przedniego w
20/20 nowotworów przysadki mózgowej (7). W rdzeniaku (MB) desmoplastycznym przeciwciało oznakowało 8/11
przypadków. Odczyn występował w postaci skupionych obszarów komórek GFAP-dodatnich o mofrologii
nowotworowej. Tylko 4/31 odmiany „klasycznej” wykazało ten rodzaj komórek nowotworowych, ale w klasycznych
MB komórki GFAP-dodatnie o morfologii reaktywnych astrocytów zaobserwowano w 27/31 przypadków (9).
Wykazano równieŜ, Ŝe przeciwciało znakuje 15/38 nerwiaków osłonkowych (38%) i 2 przypadki nerwiakowłókniaków
splotowatych, podczas gdy 16 przypadków nerwiakowłókniaków skórnych dało wynik ujemny (10). W róŜnych
chorobach piersi pochodzenia nowotworowego i pozanowotworowego procent komórek mięśniowo-nabłonkowych
reagujących z przeciwciałem był znacząco zwiększony w stosunku do piersi prawidłowej, podczas gdy odczynu
dodatniego nie stwierdzono w złośliwych komórkach 183 raków piersi róŜnych typów (6). W badaniu, którym objęto
36 pacjentów przeciwciało nie znakowało oponiaków (11).
Piśmiennictwo
(117787-002)
Dako Denmark A/S
1.
Eng LF, Ghirnikar RS, Lee YL. Glial fibrillary acidic protein: GFAP-thirty-one years (1969-2000). Neurochem
Res 2000;25:1439-51.
2.
Reske-Nielsen E, Oster S, Reintoft I. Astrocytes in the prenatal central nervous system. Acta path microbiol
immunol scand Sect. A 1987;95:339-46.
3.
Oh D, Prayson RA. Evaluation of epithelial and keratin markers in glioblastoma multiforme. An immunohistochemical study. Arch Pathol Lab Med 1999;123:917-20.
4.
Geddes JF, Thom M, Robinson SFD, Revesz T. Granular cell change in astrocytic tumors. Am J Surg Pathol
1996;20:55-63.
5.
Rutka JT, Murakami M, Dirks PB, Hubbard SL, Becker LE, Fukuyama K, et al. Role of glial filaments in cells and
tumors of glial origin: a review. J Neurosurg 1997;87:420-30.
6.
Viale G, Gambacorta M, Coggi G, Dell'Orto P, Milani M, Doglioni C. Glial fibrillary acidic protein
immunoreactivity in normal and diseased human breast. Virchows Arch A Pathol Anat 1991;418:339-48.
7.
Morris CS, Hitchcock E. Immunocytochemistry of folliculo-stellate cells of normal and neoplastic human
pituitary gland. J Clin Pathol 1985;38:481-8.
8.
Powell SZ, Yachnis AT, Rorke LB, Rojiani AM, Eskin TA. Divergent differentiation in pleomorphic xanthoastrocytoma. Evidence for a neuronal element and possible relationship to ganglion cell tumors. Am J Surg
Pathol 1996;20:80-5.
IR524/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
9.
Giangaspero F, Chieco P, Ceccarelli C, Lisignoli G, Pozzuoli R, Gambacorta M, et al. "Desmoplastic" versus
"classic" medulloblastoma: comparison of DNA content, histopathology and differentiation. Virchows Arch A
Pathol Anat 1991;418:207-14.
10. Kawahara E, Oda Y, Ooi A, Katsuda S, Nakanishi I, Umeda S. Expression of glial fibrillary acidic protein
(GFAP) in peripheral nerve sheath tumors. A comparative study of immunoreactivity of GFAP, vimentin, S-100
protein, and neurofilament in 38 schwannomas and 18 neurofibromas. Am J Surg Pathol 1988;12:115-20.
11. Thompson L, Bouffard JP, Sandberg GD, Mena H. Primary ear and temporal bone meningiomas: a
clinicopathologic study of 36 cases with a review of the literature. Mod Pathol 2003;16:236-45 Kawahara.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117787-002)
Dako Denmark A/S
IR524/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17