ce-ivd spec template

Monoclonal Mouse Anti-Human HLA-DR Antigen/FITC, Clone AB3,
Monoclonal Mouse Anti-Human HLA-DR Antigen/RPE, Clone AB3,
Przeznaczenie
nr kat. F 7266
nr kat. R 7267
Do badań diagnostycznych in vitro.
Produkty o nr kat. C 7266 i R 7267 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. Uważa się, że
przeciwciała przeciw HLA-DR stosowane wraz z panelem innych przeciwciał (1-3) pełnią zasadniczą rolę we
wstępnej ocenie ostrej białaczki, chronicznej białaczki limfocytów T i B i białaczki szpikowej. Produkty o nr kat.
F7266 i R7267 nie są przeznaczone do typowania komórek. Interpretację wyników powinien przeprowadzić
pracownik uprawniony do wykonywania takich badań w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy
diagnostyczne.
Wstęp
Główna funkcja cząsteczek antygenu ludzkich leukocytów (HLA) polega na prezentacji peptydów antygenowych
receptorowi limfocytów T regulując w ten sposób wywołanie reakcji immunologicznej (4). Cząsteczki HLA są
kodowane przez grupę ściśle sprzężonych genów zlokalizowanych na krótkim ramieniu chromosomu 6.
Oznaczono trzy klasy cząsteczek HLA (I, II i III). Ludzkie geny klasy II znajdują się w regionie HLA-D i składają
się z trzech typów zwanych DQ, DP i DR (4). Produkty genów klasy II tworzą heteronabłonkowe
transmembranowe białko składające się z ciężkiego łańcucha  (~34 kDa) i lekkiego łańcucha  (~28 kDa) (4).
Łańcuch  DR z ekspresją jednego genu niepolimorficznego, natomiast łańcuch  DR z ekspresją dziewięciu
wysoce polimorficznych genów (4).
Występuje konstytucyjna ekspresja antygenu HLA-DR na komórki zawierające przeciwciała, takie jak limfocyty
B, monocyty i komórki dendrytyczne, ale może on również być wykryty na aktywowanych limfocytach T i
aktywowanych granulocytach (4, 5). Czasami ekspresja antygenu HLA-DR występuje w komórkach o
naturalnej cytotoksyczności (1). Ekspresję antygenu stwierdzono w przypadkach różnych typów ostrych
białaczek limfoblastycznych, ostrych białaczek szpikowych oprócz AML-M3, przewlekłych białaczek
limfoblastycznych, przewlekłych białaczek szpikowych oraz NHL limfocytów B i T (1-3, 6, 7). Jednak antygen
normalnie nie występuje na guzach komórek niekrwiotwórczych i szpiczakach rozsianych (6).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-HLA-DR, F 7266 i R 7267 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego przeciwciała
monoklonalnego. Koniugaty są dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy
bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu
przeznaczone jest dla maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG2a, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Przeciwciało
nr kat.
Fluorochrom
Negative Control nr
kat.
F 7266
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0933
R 7267
RPE (R-Phycoerythrin)
X 0950
Immunogen:
Limfocyty B z chłoniaka grudkowego.
Swoistość
Antygen przeciw ludzkiemu HLA-DR, AB3, reaguje z determinantą DRw52 cząsteczki HLA-DR. Specyficzność
badano przy pomocy transfektantów z ekspresją HLA-DRw52. Antygen przeciw ludzkiemu HLA-DR, AB3, nie
reaguje z transfektantami z ekspresją antygenu HLA-DP i antygenu HLA-DQ. Przeciwciało zostało przekazane
Ósmym Międzynarodowym Warsztatom: Ludzkie antygeny różnicowania leukocytów 2000-2004 (8th
International Workshop on Human Leucocytes Differentation Antigens 2000-2004).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie
fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po
wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone.
(107146-002)
F7266/ R7267/PL/TJA/27.11.03 p.1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4.
4.
Wymieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L antygenu przeciw-HLA-DR skoniugowanego z
fluorochromem.
5.
Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu,
skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz: tabela).
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 ºC przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie przygotować zawiesinę komórek
w płynie odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01
mol/L PBS o pH 7,4.
8.
Analizować na cytometrze przepływowym.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas
każdego testu odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty
fluorochromu są wrażliwe na działanie światła, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili
wykonania analizy należy chronić próbki przed działaniem światła.
Zjawisko ulatniania zostało opisane dla przeciwciał antygenu HLA-DR skoniugowanych z FITC przy
zastosowaniu odczynników lizatu opartych na chlorku amonu (NH4Cl). Można zredukować to zjawisko
dodając paraformaldehyd do odczynników lizatu (8).
Piśmiennictwo
1.
2.
Van Dongen JJM, Adriaansen HJ. Immunobiology of leukaemia. In: Henderson ES, Lister TA, Greaves
MF, editors. Leukemia. Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo: WB Saunders Company;
1996. p. 83-130.
Mittelman M, Karcher DS, Kammerman LA, Lessin LS. High Ia (HLA-DR) and low CD11b (Mo1)
expression may predict early conversion to leukemia in myelodysplastic syndromes. Am J Hematol
1993;43:165-71.
3.
De Zen L, Orfao A, Cazzaniga G, Masiero L, Cocito MG, Spinelli M, et al. Quantitative multiparametric
immunophenotyping in acute lymphoblastic leukemia: correlation with specific genotype. I. ETV6/AML1
ALLs identification. Leukemia 2000;14:1225-31.
4.
Naverrete CV. The HLA system in blood transfusion. Bailliere’s Clin Haematol 2000;13:511-32.
5.
Erber WN, Pinching AJ, Mason DY. Immunocytochemical detection of T and B cell populations in routine
blood smears. Lancet 1984;i:1042-5.
6.
Falini B, Martelli F, Tarallo F, Moir DJ, Cordell JL, Gatter KC, et al. Immunohistological analysis of human
bone marrow trephine biopsies using monoclonal antibodies. Br J Haematol 1984;56:365-86.
7.
Smith MEF, Holgate CS, Williamson JMS, Grigor I, Quirke P, Bird CC. Major histocompatibility complex
class II antigen expression in B and T cell non-Hodgkin's lymphoma. J Clin Pathol 1987;40:34-41.
8.
Prince HE, York J, Kuttner DK. Reduction of escapee formation in flow cytometric analysis of lymphocyte
subsets. J Immunol Methods 1994;177:165-73.
Objaśnienia symboli
(107146-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
F7266/ R7267/PL/TJA/27.11.03 p.2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17