Dako Omnis
Transkrypt
Dako Omnis
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human E-Cadherin Klon NCH-38 Ready-to-Use (Dako Omnis) Nr kat. GA059 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human E-Cadherin, klon NCH-38, Ready-to-Use (Dako Omnis), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii z urządzeniami Dako Omnis. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji komórek zawierających E-kadherynę w tkankach prawidłowych i nowotworowych oraz do diagnozy róŜnicowej raka przewodowego sutka i raka zrazikowego sutka (1). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu E-CD, uwomorulina, L-CAM, Arc-1 lub cell-CAM 120/180 (2-4) Podsumowanie i wyjaśnienie E-kadheryna to transbłonowa molekuła o masie 120 kDa uczestnicząca w adhezji komórek. Odpowiedni gen zlokalizowano na chromosomie 16q22.1. Zewnątrzkomórkowa domena E-kadheryny uczestniczy w adhezji międzykomórkowej poprzez oddziaływania homofilowe regulowane przez wapń, natomiast domena wewnątrzkomórkowa E-kadheryny łączy się z cytoszkieletem aktynowym za pośrednictwem katenin. Ekadheryna pełni waŜną rolę w adhezji między komórkami nabłonka, polaryzacji nabłonka, róŜnicowania oraz uwarstwieniu komórek gruczołów. Zlokalizowana jest głównie w punktach przylegania i skupia plazminogen urokinazy oraz receptor nabłonkowego czynnika wzrostu w miejscach styku komórek (5, 6). Ograniczenie ekspresji E-kadheryny obserwowano w licznych przypadkach raka. Jest ono zwykle związane z fazą zaawansowania i progresji (5-8). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Klon: NCH-38. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen E-kadheryna (uwomorulina) (9). Swoistość Przeciwciała przeciwko E-kadherynie, NCH-38, rozpoznają dojrzałą postać E-kadheryny o masie 120 kDa oraz jej fragment o masie 82 kDa w testach Western blot lizatów komórek A431 (9). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN3), związek silnie toksyczny w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi. Przechowywanie Skrócona instrukcja uŜytkownika (123711-001) Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Podczas przechowywania korek powinien być zamknięty. Nie naleŜy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Stabilność w urządzeniu wynosi 80 godzin. Pozostały okres stabilności w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Krok Utrwalanie/zatapiani Comments (Komentarze) Utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie Odparafinowanie w urządzeniu P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 1/4 e Obróbka wstępna EnVision™ FLEX, High pH (nr kat.GV804) HIER 30 min Przeciwciało Produkt gotowy do uŜycia Inkubacja 25 min Kontrola negatywna FLEX Negative Control, Mouse (nr kat. GA750) Inkubacja 25 min Wizualizacja EnVision™ FLEX (Code GV800) + EnVision™ FLEX+ Mouse LINKER (nr kat. GV821) Blokowanie: 3 min; Wiązanie: 10 min; Polimeryzacja: 20 min; Chromogen: 5 min Barwnik kontrastowy Hematoxylin (nr kat. GC808) Inkubacja 3 min Tkanka kontrolna OkręŜnica i wątroba Odczyn cytoplazmatyczny/błonowy Szkiełka FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020) Zalecane w celu uzyskania lepszego przylegania skrawków tkankowych do szkiełek. Zamykanie Wymagane niewodne, trwałe zatapianie preparatów Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania. Oprzyrządowanie Dako Omnis Odczynniki znajdują się we fiolkach dostosowanych do urządzenia *UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem. Przygotowlanie próbek Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości 4 µm. Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu epitopu (HIER). Wstępna obróbka tkanek metodą HIER przy uŜyciu rozcieńczonego roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis), nr kat. GV804. Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako Omnis. Informacje na ten temat moŜna znaleźć w podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis. Podczas obróbki wstępnej lub procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020. Procedura barwienia Program: w urządzeniu Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące umieszczania szkiełek mikroskopowych i odczynników w urządzeniu przedstawiono w podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis. Jeśli w uŜytkowanym urządzeniu Dako Omnis protokoły nie są dostępne, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji przeprowadza się w temperaturze 32°C w urz ądzeniu Dako Omnis. Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), nr kat. GV800, łącznie z odczynnikiem EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis), nr kat. GV821. Wizualizacja odbywa się w urządzeniu Dako Omnis. Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis),nr kat. GC808. Barwienie kontrastowe odbywa się w urządzeniu Dako Omnis. Zatapianie: po wykonaniu odczynu w urządzeniu Dako Omnis skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania. Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać pozytywne i negatywne próby kontrolne z zastosowaniem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować okręŜnicę i wątrobę, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka pracy”. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Universal Negative Control, Mouse (Dako Omnis), nr kat. GA750. Interpretacja wybarwienia (123711-001) Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i błonowy. P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 2/4 Charakterystyka działania Tkanki prawidłowe: komórki nabłonka okręŜnicy wykazują silny odczyn. Hepatocyty i komórki przewodowe wątroby wykazują odczyn o nasileniu od umiarkowanego do silnego. Podsumowanie reaktywności w tkankach prawidłowych Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Elementy tkankowe dające dodatni odczyn Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Elementy tkankowe dające dodatni odczyn Nadnercza (3) 3/3 Nabłonek (50–80%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/1 Trzustka (3) MóŜdŜek (3) 3/3 Komórki nabłonka (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/3 Przysadka mózgowa (3) Gruczoł krokowy (3) 3/3 Komórki nabłonka (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/3 Mózgowie (3) 0/3 Ślinianki (3) Szyjka macicy (1) 1/1 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Komórki nabłonka (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny Skóra (3) 3/3 Nabłonek cewek nerkowych (80%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Hepatocyty, błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Przewody Ŝółciowe, błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek oskrzeli i pęcherzyków płucnych (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/3 śołądek (3) Szpik kostny (1) Sutek (3) Jelito grube (3) Przełyk (3) Nerki (3) Wątroba (3) Płuca (3) Mięsień sercowy (3) Mięśnie szkieletowe (3) Nerwy obwodowe (2) Jajniki (3) Przytarczyce (3) Jelito cienkie (3) Śledziona (3) Jądra (3) 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Śródbłonek małych naczyń (50%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/0 Tarczyca (3) 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny Grasica (3) Ciałka Hassalla — korowosiatkowe (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 3/3 Nabłonek (100%), błonowy i cytoplazmatyczny 0/3 Migdałki (3) 2/2 Nerwy (60%), cytoplazmatyczny 2/3 Nabłonek grudek pierwotnych (<1–100%), błonowy i cytoplazmatyczny Macica (3) Tkanki nieprawidłowe: przeciwciało wybarwiło 203/204 przypadków inwazyjnego przewodowego raka sutka, 5/49 przypadków inwazyjnego zrazikowego raka sutka, 3/10 przypadków raka pleomorficznego zrazikowego; 4/4 przypadków cewkowo-zrazikowego raka sutka i 5/ 9 przypadków inwazyjnego raka sutka o niejasnej klasyfikacji typu pomiędzy zrazikowym a przewodowym (1). Piśmiennictwo (123711-001) 1. Singhai R, Patil V, Jaiswal S, Patil S, Tayade M, Patil A. E-Cadherin as a diagnostic biomarker in breast cancer. North Am J Med Sci 2011; 3:227-33. 2. Shiozaki H, Tahara H, Oka H, Miyata M, Kobayashi K, Tamura S, et al. Expression of Immunoreactive Ecadherin adhesion molecules in human cancers. Am J Pathol 1991;139:17. 3. Gabbert HE, Mueller W, Schneider A, Meier S, Moll R, Birchmeier W, et al. Prognostic value of E-cadherin expression in 413 gastric carcinomas. Int J Cancer 1996;69:184. 4. Umbas R, Schalken JA, Aalders TW, Carter BS, Karthaus HFM, Schaafsma HE, et al. Expression of the cellular adhesion molecule E-cadherin is reduced or absent in high-grade prostate cancer. Canc Res 1992; 52:5104. 5. Silye R, Karayiannakis AJ, Syrigos KN, Poole S, Van Noorden S, Batchelor W, et al. E-cadherin/catenin complex in benign and malignant melanocytic lesions. J Pathol 1998;186:350. 6. Heimann R, Lan F, McBride R, Hellman S. Separating favorable from unfavorable prognostic markers in breast cancer: the role of E-cadherin. Canc Res 2000; 60:298. 7. Bracke ME, Van Roy FM, Mareel MM. The E-cadherin/catenin complex in invasion and metastasis. Cur Top Microbiol Immunol 1996; 213 (Pt 1):123-61. 8. Garcia del Muro X, Torregrosa A, Munoz J, Castellsague X, Condom E, Vigues F, et al. Prognostic value of the expression of E-cadherin and ß-catenin in bladder cancer. Eur J Cancer 2000; 36:357. 9. Certyfikat dla przeciwciał 6/8/99. Dostępny w siedzibie firmy Dako. P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 3/4 Wydanie 03/13 (123711-001) P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 4/4