Nr kat. IR511
Transkrypt
Nr kat. IR511
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Myeloperoxidase Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR511 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Myeloperoxidase, Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała znakują komórki, w których występuje mieloperoksydaza, w tkankach prawidłowych i nowotworowych. Stanowią równieŜ narzędzie uŜyteczne w odróŜnianiu zaburzeń tkanki limfoidalnej i szpikowej. Dodatnie wyniki są pomocne w klasyfikacji tkanek nowotworowych (tj. mieloblastów i niedojrzałych mielocytów w ostrej białaczce szpikowej, białaczce promielocytowej, białaczce mielomonocytowej, chorobie di Gugliemo i białaczce mieloblastycznej) (1). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Mieloperoksydaza (MPO) jest złoŜona z dwóch podjednostek 55–60 kDa i dwóch podjednostek 10–15 kDa (3). Jest to główny składnik ziarnistości azurochłonnych w granulocytach obojętnochłonnych, występuje równieŜ w lizozymach monocytów. In vivo MPO katalizuje tworzenie czynników utleniających i halogenujących o działaniu przeciwbakteryjnym, np. tworzenie kwasu podchlorawego z nadtlenku wodoru i jonów chlorkowych (1, 5). MPO to waŜny znacznik komórek szpikowych — od promielocytów, aŜ po postaci dojrzałe (1). Za pomocą czułych metod wizualizacji immunocytochemicznej w połączeniu ze skutecznymi technikami odmaskowania epitopu wykazano, Ŝe 17–23% ostrych białaczek limfoblastycznych z prekursorowych limfocytów B takŜe wykazuje obecność MPO, co oznacza, Ŝe podczas immunohistochemicznej oceny ostrych białaczek bardzo waŜne jest stosowanie przeciwciał przeciwko MPO razem z przeciwciałami przeciwko np. CD3, CD79α i terminalnej transferazy dezoksynukleotydylowej (TdT) (2, 3). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko stabilizujące i NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L. Immunogen Mieloperoksydaza wyizolowana z ludzkich leukocytów polimorfonuklearnych. Swoistość Te przeciwciała reagują z ludzką mieloperoksydazą. W badaniach metodą immunoelektroforezy krzyŜowej przy uŜyciu 12,5 µL stęŜonego roztworu przeciwciał na cm2 Ŝelu i 2 µL mieloperoksydazy widoczny jest tylko jeden prąŜek odpowiadający mieloperoksydazie. Barwnik: Barwienie charakterystyczne dla peroksydazy. W przypadku 2 µL ludzkiego osocza nie pojawia się Ŝaden prąŜek. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue. Zgodnie z oczekiwaniami — w utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie preparatach z ludzkich migdałków przeciwciało barwi tylko rzadkie granulocyty obojętnochłonne, co wykazano przy uŜyciu czułego systemu wizualizacji w oparciu o streptawidynę-biotynę. Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie (115764-002) Dako Denmark A/S Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. IR511/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przygotowanie próbek i materiały dodatkowe wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i wątrobę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (nr kat. IR600). Interpretacja odczynu Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało daje silny odczyn z komórkami szpikowymi we wszystkich fazach rozwoju. Komórki pochodzenia monocytarnego wykazują zróŜnicowaną reaktywność i zwykle wykazują słaby odczyn dodatni lub brak odczynu. Prekursory komórek erytroidalnych, megakariocyty, komórki limfoidalne, komórki plazmatyczne, komórki dendrytyczne retikulum, komórki tuczne i naczynia krwionośne nie wykazują odczynu. Obserwowano sporadyczne barwienie histiocytów, co moŜe być spowodowane obecnością pozostałości fagocytozy (1). Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało przeciwko mieloperoksydazie barwi mieloblasty i niedojrzałe komórki szpikowe w ostrej białaczce szpikowej, białaczce promielocytowej, białaczce mielomonocytowej, chorobie di Gugliemo i białaczce mieloblastycznej (1). Przeciwciało nie barwi komórek chłoniaka limfoblastycznego ani białaczki limfoblastycznej, przewlekłej białaczki limfoblastycznej, białaczki kosmatokomórkowej, chłoniaków nieziarniczych, chłoniaków z limfocytów T lub B ani choroby Hodgkina (1). Piśmiennictwo 1. Pinkus GS, Pinkus JI. Myeloperoxidase: A specific marker for myeloid cells in paraffin sections. Mod Pathol 1991; 4:733 2. Arber DA, Snyder DS, Fine M, Dagis A, Niland J, Slovak ML. Myeloperoxidase immunoreactivity in adult acute lymphoblastic leukemia. Am J Clin Pathol 2001;116:25–33. 3. Kimura S, Ikeda-Saito M. Human myeloperoxidase and thyroid peroxidase, two enzymes with separate and distinct physiological functions, are evolutionarily related members of the same gene family. Proteins 1988;3:113–20. 4. Weil SC, Rosner GL, Reid MS, Chisholm RL, Lemons RS, Swanson MS, et al. Translocation and rearrangement of myeloperoxidase gene in acute promyelocytic leukemia. Science 1988;240:790–2. 5. Lanza F. Clinical manifestation of myeloperoxidase deficiency. J Mol Med 1998;76:676–81. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (115764-002) Dako Denmark A/S IR511/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17