Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a Clone 010 Nr Kat
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a Clone 010 Nr Kat
Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a Clone 010 Nr Kat. M3571 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało Mouse Anti-CD1a, klon 010 jest przeznaczone do uŜytku laboratoryjnego, do identyfikacji jakościowej w mikroskopie świetlnym komórek dodatnich w tkankach normalnych i nowotworowych, przy uŜyciu technik immunohistochemicznych (IHC). Wyniki dodatnie wspomagają róŜnicowanie grasiczaków i rozrostów T-komórkowych oraz diagnostyki histiocytozy z komórek Langerhansa1. Identyfikacja róŜnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne. Podsumowanie i wyjaśnienie CD1a, jest członkiem rodziny antygenów CD1, jest nie-polimorficzną glikoproteiną powierzchniową komórek związaną z głównym kompleksem zgodności tkankowej MHC klasy I. Jej ekspresja jest związana z Beta-2-mikroglobuliną. 1,2 Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Anti-CD1a, Klon 010 jest dostarczane w objętości 1.0 mL jako supernatant hodowli komórkowej zdializowanej, 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, i zawierającej 15 mmol/L. Izotyp: IgG1, kappa Klon: 0101 StęŜenie mysich lgG mg/L: zobacz etykieta na fiolce. M3571 moŜna uŜywać w rozcieńczeniu 1:50 przy uŜyciu systemu detekcji LSAB2, Liquid DAB. (to jest tylko ogólna wskazówka). Optymalne stęŜenie przeciwciała moŜe się róŜnić od podanego, zaleŜnie od badanej próbki i powinno być ustalone przez kaŜde laboratorium. Immunogen Ludzkie tymocyty Swoistość Anti-Human CD1a, Klon 010 zostało sklasyfikowane jako CD1a na Czwartych Międzynarodowych Warsztatach i Konferencji: Ludzkie antygeny róŜnicowania leukocytów (International Workshops and Conferences on Leucocyte Differentiation Antigens).2 Klon 010 wykazuje immunoprecypitację z antygenem CD1a z lizatu komórek grasicy oraz z lizatu epidermalnych komórek Langenhansa.2 Przeciwciało silnie precypituje natywną molekułę CD1 (masa cząsteczkowa 49 kD) i Beta-2-mikroglobulinę ( masa cząsteczkowa 12 kD), ale nie precypituje cząsteczki CD1 rozciętej trypsyną ( masa cząsteczkowa 27 kD).2 W immunohistochemii wykazano aktywność tego przeciwciała z powierzchniową glikoproteiną CD1a występującą na korowych tymocytach, komórkach Langerhansa oraz komórkach splatających się (retikularnych) w tkankach mroŜonych, jak teŜ w skrawkach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie.1,2 Materiały wymagane, ale nie dostarczone z odczynnikiem Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Jako diluent dla procedur IHC zalecany jest: Dako Antibody Diluent (Nr Kat. S0809) Zalecane jest uŜycie następującej kontroli negatywnej: Mouse IgG1 (Nr Kat X0931) Środki ostroŜności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi. (115012-002) 303743PL_002 str. 1/4 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe Przeciwciała Anti-CD1a, Klon 010, moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatopionych w parafinie Odparafinowane skrawki muszą być przygotowane termicznie przed właściwą procedurą barwienia immunohistochemicznego (IHC) Docelowe odzyskanie epitopu wymaga zanurzenia skrawka tkanki w podgrzanym roztworze buforu i utrzymanie ciepła w łaźni wodnej (95–99 °C), parowniku (95–99 °C), albo w autoklawie (121 °C). W celu zwi ększenia przylegania skrawka do szkiełka podstawowego zaleca się uŜycie szkiełek sialinizowanych Dako Silanized Slides (Nr Kat. S3003). W procedurze 20 minutowego ogrzewania zaleca się uŜycie docelowego roztworu odzyskiwania Dako Target Retrieval Solution (Nr Kat. S1700) albo koncentrat 10x (Nr Kat. S1699). Skrawki mroŜone i rozmazy komórkowe Przeciwciało Anti-CD1a, Klon 010 moŜna uŜyć do znakowania utrwalonych acetonem skrawków mroŜonych i utrwalonych rozmazów komórkowych. Odzyskiwanie epitopu nie jest w tym przypadku wymagane Procedura barwienia NaleŜy postępować zgodnie z procedurą opisaną w instrukcji dołączonej do wybranego systemu detekcji. Interpretacja wybarwienia Odczyn komórkowy w przypadku antygenu CD1a ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.1, 2, 4 Ograniczenia produktu Dla uzyskania optymalnych wyników barwienia skrawków zatopionych w parafinie zaleca się uŜycie jako chromogenu DAB z systemem LSAB2, HLP (płynny DAB). Charakterystyka działania Tkanki prawidłowe Podczas testów przeprowadzonych na skrawkach tkankowych migdałków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE) stwierdzono, Ŝe przeciwciało Anti-CD1a, klon 010, jest immunoreaktywne w przypadku komórek Langerhansa oraz zmiennie immunoreaktywne w przypadku komórek międzypalczastych, a podczas testów przeprowadzonych na zatopionych w parafinie tkankach skóry – znakuje komórki Langerhansa.1 NaleŜy odrzucić wszelkie wybarwienia komórek centrum rozrodczego migdałków. Zaobserwowano barwienie pojedynczych komórek międzypalczastych i tymocytów rdzeniowych w rdzeniu grasicy.1, 2 NaleŜy zwrócić uwagę, Ŝe moŜe wystąpić barwienie komórek mięśni gładkich. Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Nadnercza (3) Szpik kostny (3) Gruczoły sutkowe (3) MóŜdŜek (3) Mózgowie (3) Szyjka macicy (3) Jelito grube (3) Przełyk (3) Serce (3) Nerki (3) Wątroba (3) Płuca (3) Komórki międzybłonka (3) Nerwy obwodowe (3) Jajniki (3) (115012-002) Składniki tkankowe wykazujące odczyn dodatni 0/3 0/3 1/3 0/3 0/3 1/3 0/3 3/3 0/3 0/3 0/3 2/3 0/3 0/3 1/3 Rodzaj tkanki (liczba badanych przypadków) Trzustka (3) Przytarczyce (3) Przysadka mózgowa (3) Gruczoł krokowy (3) Ślinianki (3) Mięśnie szkieletowe (3) Skóra (3) Jelito cienkie (3) Śledziona (3) śołądek (3) Jądra (3) Grasica (3) Tarczyca (3) Migdałki (3) Macica (3) Składniki tkankowe wykazujące odczyn dodatni 2/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 0/3 0/3 0/3 0/3 2/3 0/3 3/3 0/3 303743PL_002 str. 2/4 Tkanki patologiczne Zaprezentowano następujące wyniki barwiąc Anti-CD1a, klon 010 skrawki parafinowe z patologicznych tkanek.1, 4, 5 Tabela 1. Odczyny z Tkankami Patologicznymi Typ tkanki Dodatnio i ujemnie wybarwione elementy tkanki 17/17 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa Kość: Histiocytoza z komórek Langerhansa Płuca: Histiocytoza z komórek 2/2 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa Langerhansa Skóra: Histiocytoza z komórek 13/14 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa Langerhansa Węzły chłonne: Histiocytoza z komórek 1/1 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa Langerhansa Kości czaszki: Histiocytoza z komórek 4/4 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa Langerhansa Podwzgórze: Histiocytoza z komórek 7/7 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa Langerhansa Histiocytoza z komórek Langerhansa: 4/4 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa Eosinophilic granuloma Histiocytoza z komórek Langerhansa: 4/4 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa Płucna Histiocytoza z komórek Langerhansa: 1/1 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa Hand-Schuller-Christian T-ALL/LBL 4/8 dodatnie, komórki nowotworowe Znamię 3/3 ujemne Czerniak 2/2 ujemne Neurofibromaa 2/2 ujemne Adenopatia Rosai-Dorfman 2/2 ujemne Xanthogranuloma juvenilea 3/3 ujemne, komórki nowotworowe Węzeł chłonny hiperplazja podkorowa 3/4 zmienne-dodatnie, normalne komórki dendrytyczne splatajace się Węzeł chłonny limfadenopatia 7/7 dodatnie, normalne duŜe komórki dendrytyczne i komórki welonowate zmienne-dodatnie, normalne komórki dendrytyczne splarajace się Skóra: hiperplazja limfoidalna 2/2 dodatnie, normalne komórki Langerhansa oraz skórne komórki dendrytyczne zmienne-dodatnie, normalne komórki dendrytyczne splatajace się Skóra: Ŝółtak (Xanthoma) 1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa Chłoniak skóry: Mycosis fungoides 2/2 dodatnie, normalne komórki Langerhansa, duŜe komórki dendrytyczne i skórne komórki dendrytyczne Chłoniak skóry: Low-grade B-cell 1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa Chłoniak skóry: T-immunoblastyczny 1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa, duŜe komórki dendrytyczne i skórne komórki dendrytyczne Chłoniak skóry: Anaplastyczne (Kil+) 1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa wielkie komórki Obwodowy chłoniak T-komórkowy 5/5 ujemne Grasica: choroba Hodgkina 2/2 dodatnie, normalne tymocyty korowai duŜe komórki dendrytyczne zmienne - dodatnie, normalne dendrytyczne komórki splatające się Grasica: Thymoma typu korowego 2/2 dodatnie, nowotworowe tymocyty korowe Chłoniak Burkitta 1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa a Wszystkie próbki skóry zawierające normalne epidermalne komórki Langerhansa barwią się dodatnio Anti-CD1a, Klon 010.4 (115012-002) 303743PL_002 str. 3/4 Piśmiennictwo 1. Krenács L, Tiszalvicz L, Krenács T, Boumsell, L. Immunohistochemical detection of CD1a antigen in formalin-fixed and paraffinembedded tissue sections with monoclonal antibody 010. J Pathol 1993; 171:99 2. Boumsell L. Cluster Report: CD1 in Leucocyte Typing IV. Eds. W Knapp, B Dörken, WR Gilks, EP Rieber, RE Schmidt, H Stein, and AEG Dr. von dem Borne. Oxford: Oxford UP, 1989: 251 3. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ. No. 78-127, Current 13. August 16, 1976 4. Emile JF, Wechsler J, Brousse N, Boulland ML, Cologon R, Fraitag S, Voisin MC, Gaulard P, Boumsell L, Zafrani ES. Langerhans’ cell histiocytosis: Definitive diagnosis with the use of monoclonal antibody O10 on routinely paraffin-embedded samples. Amer J Surg Pathol 1995; 19(6):636 5. Mazal PR, Hainfellner JA, Preiser J, Czech T, Simonitsch I, Radaszkiewicz T, Budka H. Langerhans cell histiocytosis of the hypothalamus: Diagnostic value of immunohistochemistry. Clin Neuropath 1996; 15(2):87 Edition 01/15 (115012-002) 303743PL_002 str. 4/4