ASPItest

ms_06675816190V3.0
ASPItest
ASPItest
06675808 190
1 x 1.0 mL
06675816 190
3 x 1.0 mL
Polski
Zastosowanie
Test do ilościowego oznaczania in vitro funkcji płytek krwi aktywowanych
kwasem arachidonowym. Odczynnik jest przeznaczony do oznaczania
funkcji płytek w próbkach pełnej krwi z użyciem analizatora Multiplate.
Podsumowanie
Kwas arachidonowy jest kwasem tłuszczowym omega-6 i występuje w
błonach wielu komórek organizmu. Konwersja kwasu arachidonowego do
tromboksanu regulowana jest enzymem cyklooksygenazą (COX). Enzym
ten istnieje w dwóch postaciach; COX‑1, w postaci istniejącej we
wszystkich tkankach i COX-2, którego obecność indukowana jest stanem
zapalnym. W płytkach znajduje się tylko forma COX‑1, która ulega łatwo
hamowaniu niskimi dawkami kwasu acetylosalicylowego, inaktywującego
kluczowe enzymy biorące udział w metabolizmie arachidonianów. Kwas
acetylosalicylowy powoduje acetylację reszty serynowej 529 łańcucha
polipeptydowego H‑syntazy prostaglandynowej (syntaza PGH), hamując
przez to wytwarzanie PGH2, która jest bezpośrednim prekursorem
tromboksanu. W związku z tym, że płytki nie posiadają jąder, nie są w
stanie odtwarzać białka. Efekt działania kwasu acetylosalicylowego na
COX‑1 jest nieodwracalny i trwa przez całe życie płytki, odnowienie
aktywności cyklooksygenazy następuje dzięki powstającym pokoleniom
nowych płytek, w tempie ok. 10 % dziennie u osobników zdrowych. Niskie
dawki kwasu acetylosalicylowego wystarczają do supresji produkcji
tromboksanu przez COX‑1 do ponad 95 %; supresja taka wystarcza do
hamowania agregacji płytek. Niemniej płytki poddane działaniu kwasu
acetylosalicylowego mogą dalej agregować w obecności silnego agonisty
płytkowego, jakim jest np. kolagen i trombina.1
Kwas arachidonowy sam w sobie nie powoduje aktywacji płytek, przez co
możliwe jest zastosowanie go jako idealnej metody oznaczania nadmiaru
COX‑1 w pytkach. Jeśli aktywność COX‑1 hamowana jest kwasem
acetylosalicylowym lub innym niesterydowym lub niesterydopodobnym
czynnikiem, to agregacja płytek będzie nieznaczna lub nie będzie jej
wcale.2
W związku z tym, że do agregacji dochodzi na drodze połączeń płytkafibrynogen w okolicy receptora glikoproteinowego (GP) IIb/IIIa, agregacja
płytek aktywowana kwasem arachidonowym może być w obecności
antagonistów receptora GPIIb/IIIa lub niedoboru GPIIb/IIIa zredukowana lub
nieobecna, jak to się dzieje np. w trombastenii Glanzmana.
Zasada pomiaru
Odczynnik ASPItest zawiera kwas arachidonowy, który jest konwertowany
przez oksygenazę płytkową do tromboksanu A2.
W teście Multiplate Test Cell aktywowane płytki przylegają i agregują na
drucikach czujnika. Prowadzi to do wzrostu oporności pomiędzy drucikami
czujnika, co jest na bieżąco rejestrowane i przedstawione jako pole pod
krzywą (AUC) w jednostkach umownych (AU*min. lub U; konwersja:
1 U = 10 AU*min).3
Test ASPItest wykrywa hamowanie cyklooksygenazy płytkowej2,4,5 jak
również hamowanie czy nieobecność receptorów GpIIb/IIIa.6,7
Odczynniki - roztwory robocze
▪
06675808190
R1: 1 fiolka do sporządzenia 1.0 mL
Liofilizowany odczynnik zawierający kwas arachidonowy: 15 mM.
5 mikroprobówek do porcjowania.
▪
06675816190
R1: 3 fiolki do sporządzenia 1.0 mL
Liofilizowany odczynnik zawierający kwas arachidonowy: 15 mM.
Zalecenia i środki ostrożności
Przeznaczone wyłącznie do celów diagnostyki in vitro.
Należy stosować standardowe procedury postępowania z odczynnikami.
Wszelkie odpady należy usuwać zgodnie z lokalnymi przepisami.
Karta charakterystyki produktu dostępna na życzenie.
Unikać spienienia odczynników i próbek (materiału od pacjentów,
kalibratorów i kontroli).
2016-12, V 3.0 Polski
Multiplate
Postępowanie z odczynnikami
Ostrożnie rozpuścić zawartość fiolki R1 poprzez dodanie 1.0 mL wody
destylowanej lub dejonizowanej. Delikatnie wymieszać R1 i pozostawić
fiolkę zamkniętą na 10 minut w temp. 18‑25 °C. Obracać delikatnie fiolkę do
momentu uzyskania jednorodnego roztworu. Unikać tworzenia się piany.
Roztwór R1 jest jasnożółty. Kolor nie oznacza zmian funkcjonalności
odczynnika.
Uwaga: W celu uniknięcia próżni fiolki wypełniane są nieaktywnym gazem.
Aby osiągnąć maksymalną stabilność po rekonstytucji, odpipetować
≥ 100 µL porcje odczynnika do mikroprobówek potrzebne w ciągu dnia.
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temperaturze 2‑8 °C.
Liofilizowane odczynniki pozostają stabilne do podanej daty ważności. Jeśli
rekonstytuowane odczynniki nie zostaną podzielone na porcje do
mikroprobówek, oryginalną fiolkę należy przechowywać w pozycji pionowej.
Stabilność rekonstytuowanego kalibratora:
w temp. 18‑25 °C
24 godz.
w temp. 2‑8 °C
24 godz.
w temp. (-15)‑(-25) °C
4 tyg.
po jednorazowym rozmrożeniu w
temp. 18‑25 °C
24 godz.
Zabezpieczyć odczynnik przed wpływem światła słonecznego i
podwyższonej temperatury.
Pobieranie i przygotowanie materiału
Sprawdzono i zaakceptowano możliwość stosowania jedynie materiałów
biologicznych wymienionych poniżej. krew pełna:
Do pobierania próbek używać standardowych probówek i stosować się do
instrukcji ich producenta. Pobieranie krwi należy przeprowadzić tak, by
uniknąć przedłużonego zastoju krwi żylnej i używając igły o dużym
przekroju. Unikać tworzenia się piany w probówce do pobrań.
Dokładnie wymieszać zawartość delikatnie odwracając probówkę.8
Nie zamrażać ani nie przechowywać w chłodziarce. Nie ogrzewać krwi
przed analizą.9
Antykoagulanty stosowane podczas pobierania krwi mają znaczący wpływ
na wyniki testu.9 Zaleca się stosowanie dostępnych w handlu probówek
hirudynizowanych.8,2
Alternatywnie można użyć standardowych probówek litowo-heparynowych
lub cytrynianowych (3.2 % cytrynianu).10,11
Aby uniknąć zbyt dużego stężenia cytrynianu zawsze należy upewnić się,
że probówki cytrynianowe napełnione są do wskazanego poziomu.
System pobierania krwi musi być wystandaryzowany w każdym ośrodku.
Porównanie wyników próbek pobranych od danego pacjenta z zakresem
referencyjnym możliwe jest jedynie wtedy, jeśli próbkę pobierano na ten
sam antykoagulant (tj. heparynę litową lub hirudynę).
Próbki powinno analizować się w czasie 0.5‑3 godzin od pobrania.9
Materiały dostarczone w zestawie
▪ Patrz "Odczynniki - roztwory robocze" w części o odczynnikach.
Niezbędne materiały dodatkowe (niedostarczone w zestawie)
▪
06675662190, Aliquot Vials for ASPItest
▪
06675751001, Hirudin Blood Tubes, 50 probówek
▪
06675760001, Hirudin Blood Tubes, 10 probówek
▪
06675913190, ASA Reagent, 1 x 1.0 mL
▪
06675921190, ASA Reagent, 3 x 1.0 mL
▪
06675590001, Test Cells, 6 x 10 sztuk
▪ Roztwór soli, 0.9 %
1/3
ms_06675816190V3.0
ASPItest
ASPItest
▪ Analizator Multiplate. Dodatkowe wyposażenie, zob. instrukcja obsługi
analizatora i skrócona instrukcja obsługi analizatora
▪ Woda destylowana lub dejonizowana
▪ Ogólne wyposażenie laboratoryjne
Oznaczenie
W celu optymalnego działania testu należy stosować się do zaleceń
zawartych w niniejszej ulotce dotyczących konkretnego analizatora. Należy
postępować zgodnie z poniższą instrukcją obsługi dla operatora,
uwzględniając typ aparatu.
Wszelkie zmiany w aplikacji nie zatwierdzone przez firmę Roche nie
podlegają gwarancji i muszą być zdefiniowane przez użytkownika.
Umieścić R1 i próbki na wyznaczonych pozycjach.
Szczegółowe dane o teście
Reprezentatywne dane uzyskane przy użyciu analizatorów Multiplate
podano poniżej. Wyniki uzyskane w poszczególnych laboratoriach mogą się
różnić.
Precyzja
Precyzję określono oznaczając próbkę pełnej krwi hirudynizowanej w
dwóch aparatach we wszystkich kanałach (tj. ogółem 10 oznaczeń).
Wyliczono średnią, odchylenie standardowe i współczynnik zmienności.
Oznaczenie przeprowadzono na ogółem trzech próbkach krwi używając dla
każdej próbki tego samego urządzenia i tych samych fiolek odczynnika.
Uzyskano następujące wyniki:
Procedura testu dla krwi hirudynizowanej, pobranej na heparynę
litową lub pobranej na cytrynian:
Roztwór soli, 0.9 % (ogrzany do temp. 37 °C)
300 μL
Próbka (18‑25 °C)
300 μL
Inkubacja
180 sekund
R1
20 μL
Czas pomiaru
6 minut
Stężenie końcowe: 0.5 mM kwasu arachidonowego.
Należy dokładnie stosować czas i temperaturę inkubacji. W wypadku
stosowania pipety elektronicznej należy postępować według instrukcji
podawanych przez oprogramowanie analizatora Multiplate.
Kontrola jakości
Do kontroli aktywności i stabilności odczynnika można użyć próbki krwi
prawidłowej.
Patologicznie hamowaną agregację można osiągnąć dodając odczynnik
ASA Reagent.
Należy postępować według dołączonej ulotki metodycznej.
Procedury kontroli jakości należy stosować zgodnie z właściwymi
zaleceniami organów państwowych oraz lokalnymi wytycznymi.
Ograniczenia - substancje interferujące
Upośledzenie czynnościowe płytek zaobserwowano po spożyciu różnych
leków i preparatów ziołowych.12 Agregacja może być nieprawidłowa u
pacjentów z trombocytopenią.13
Użycie nieogrzanego roztworu soli lub skrócenie czasu inkubacji może
doprowadzić do uzyskania fałszywych wyników. Roztwór soli nie może
zawierać żadnych dodatków, takich jak np. ester metylowy.
Może to spowodować uzyskanie wyników fałszywie dodatnich.
Obecność w próbce antagonistów GpIIb/IIIa może prowadzić do osłabienia
agregacji.3
Obecność w próbce kwasu acetylosalicylowego lub niesterydowych leków
przeciwzapalnych (NLPZ) powoduje słabszą agregację.
Dla celów diagnostycznych wyniki powinny być interpretowane z
uwzględnieniem historii choroby, badań klinicznych oraz innych danych o
pacjencie.
Wartości oczekiwane
Wartości oczekiwane ustalono w badaniu, w którym uczestniczyło
50 zdrowych dawców stosując probówki Roche Hirudin Blood Tubes.
Wynik (5. do 95. percentyl):
ASPItest
AUC [U]
71-115
Uwaga: W celu ustalenia wartości referencyjnych dawcom nakazano w
ciągu 10 dni poprzedzających badanie nieprzyjmowanie kwasu
acetylosalicylowego, NLPZ oraz antagonistów receptora ADP.14
W oparciu o populację pacjentów każde laboratorium powinno określić
poziom wartości oczekiwanych lub wyznaczyć własne zakresy wartości
referencyjnych.
Próbka
Średnia AUC [U]
OS AUC [U]
WZ
Próbka 1
121
8
7 %
Próbka 2
103
7
7 %
Próbka 3
105
5
5 %
Literatura
1 Guyer KE. The present state of acetylsalicylic acid and clopidogrel
resistance. Hämostaseologie 2009; 29: 285-290.
2 Jambor C, Weber CF, Gerhardt K, et al. Whole Blood Multiple
Electrode Aggregometry Is a Reliable Point-of-Care Test of
acetylsalicylic acid-Induced Platelet Dysfunction. Anesth Analg
2009;109:25-31.
3 Sibbing D, Braun S, Jawansky S, et al. Assessment of ADP-induced
platelet aggregation with light transmission aggregometry and multiple
electrode platelet aggregometry before and after clopidogrel treatment.
Thromb Haemost 2008; 99: 121-126.
4 Velik-Salchner C, Maier S, Innerhofer P, et al. Point-of-care whole
blood impedance aggregometry versus classical light transmission
aggregometry for detecting acetylsalicylic acid and clopidogrel: the
results of a pilot study. Anesth Analg 2008 Dec;107(6):1798-806.
5 Calatzis A, Rahe-Meyer N, Theisen F, et al. Detection of acetylsalicylic
acid and clopidogrel using multiple electrode aggregometry. European
Journal of Anaesthesiology, V24, June 2007, p 67.
6 Desch S, Siegemund A, Scholz U, et al. Platelet inhibition and GP
IIb/IIIa receptor occupancy by intracoronary versus intravenous bolus
administration of abciximab in patients with ST-elevation myocardial
infarction. Clin Res Cardiol 2011 Oct 21.
7 Halimeh S, Angelis G, Sander A, et al. Multiplate Whole Blood
Impedance Point of Care Aggregometry: Preliminary Reference Values
in Healthy Infants, Children, and Adolescents. Klin Padiatr 2010; 222:
158-163.
8 CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline.
CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute;
2008.
9 Kaiser AF, Neubauer H, Franken CC, et al. Which is the best
anticoagulant for whole blood aggregometry platelet function testing?
Comparison of six anticoagulants and diverse storage conditions.
Platelets. 2011 Oct 14.
10 Rahe-Meyer N, Winterhalter M, Boden A, et al. Platelet concentrates
transfusion in cardiac surgery and platelet function assessment by
multiple electrode aggregometry. Acta Anaesthesiol Scand 2009
Feb;53(2):168-75.
11 Pedersen SB, Grove EL, Nielsen HL, et al. Evaluation of acetylsalicylic
acid response by Multiplate whole blood aggregometry and light
transmission aggregometry. Platelets 2009 Sep;20(6):415-20.
12 CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline.
CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute;
2008, p.31.
13 Hanke AA, Roberg K, Monaca E et al. Impact of platelet count on
results obtained from multiple electrode platelet aggregometry
(Multiplate). Eur J Med Res 2010 May 18;15(5):214-9.
14 CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the
Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition. CLSI document
C28-A3. Clinical and Labatory Standards Institute; 2008.
2/3
2016-12, V 3.0 Polski
ms_06675816190V3.0
ASPItest
ASPItest
W celu uzyskania dalszych informacji należy zapoznać się z dokumentacją
dla danego analizatora, instrukcją obsługi lub skróconą instrukcją obsługi
analizatora Multiplate, ulotką aplikacyjną, informacją o produkcie lub
ulotkami produktowymi dołączonymi do opakowań.
W niniejszej ulotce metodycznej jako separatora dziesiętnego,
oddzielającego liczbę całkowitą od części dziesiętnych ułamka dziesiętnego
stosuje się zawsze kropkę. Separatorów oddzielających tysiące nie używa
się.
Symbole
Oprócz znaków zawartych w standardzie ISO 15223‑1, firma Roche
Diagnostics używa następujących symboli i znaków.
Zawartość zestawu
Analizatory/aparaty, w których można zastosować
odczynniki
Odczynnik
Objętość po rekonstytucji lub wymieszaniu
Globalny Numer Jednostki Handlowej
GTIN
Istotne dodatki oraz zmiany zostały oznaczone na marginesie.
© 2014, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
2016-12, V 3.0 Polski
3/3