fluorochrome conjugated single reagent

Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, Klon SS2/36
Nr kat. F0826
Nr kat. R0848
FITC-skoniugowany
RPE-skoniugowany
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F0826 i R0848 przeznaczone są do użycia w cytometrii przepływowej. CD10 jest użyteczne do podklasyfikacji
białaczek z limfocytów B, ale może również występować w innych typach komórek białaczkowych (1).
Interpretacja wyników musi być przeprowadzona przez wykwalifikowany personel w powiązaniu z historią
choroby pacjenta oraz wynikami innych testów diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Antygen białaczki limfatycznej ostrej (CALLA) (1).
Wstęp
CD10 jest białkiem o masie 100 kDa należącym do rodziny metaloproteaz transbłonowych typu II, które
również obejmują antygeny leukocytów CD13, CD26, CD73 oraz aminopeptydazę. Gen kodujący CD10
zlokalizowany jest na chromosomie 3. CD10 jest enzymem zależnym od cynku i uważa się, że zmniejsza
odpowiedzi komórkowe wzgledem hormonów peptydowych (2). W limfocytach, CD10 ekspresjonowane jest w
niedojrzałych limfocytach T i prekursorach limfocytów B, jednak jest tracona w momencie osiągnięcia przez te
komórki dojrzałości. CD10, jednakże, ulega powtórnej ekspresji w proliferujących limfocytach B i dojrzałych
neutrofilch (3). W schorzeniach związanych z limfocytami, CD10 ekspresjonowane jest w białaczce limfatycznej
ostrej (ALL) z prekursorów limfocytów B, aczkolwiek jest również obserwowana w części ALL z limfocytów T.
Ponadto, ekspresjonowane jest wybiórczo w białaczce z dojrzałych limfocytów B, m.in. szpiczak mnogi oraz w
chłoniakach (2, 3).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-CD10, F0826 oraz R0848, otrzymano z oczyszczonego monoklonalnego przeciwciała mysiego.
Koniugaty dostarczono w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy wołowej (BSA) i 15
mmol/LNaN3, pH 7,2. Każde opakowanie wystarcza na 100 testów (10 µL koniugatu na 106 leukocytów z
prawidłowej krwi obwodowej człowieka).
Isotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu.
Przeciwciało
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrla ujemna
Nr kat.
F0826
FITC (Izomer 1 Izotiocjanianu Fluoresceiny)
X0927
R0848
RPE (R-Fikoerytryna)
X0928
Immunogen
Komórki białaczki limfatycznej ostrej.
Swoistość
Anty-CD10, SS2/36, zostało zaprezentowane na the Third International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens, a badania przeprowadzone przez różne laboratoria potwierdziły jej
reaktywność względem CD10 (4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Procedura barwienia
(114450-001)
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym.
1.
Pobrać krew żylną do próbówki z antykoagulantem.
2.
Wyodrębnić komórki jednojądrzaste przez wirowanie w medium rozdzielającym. Alternatywnie,
przeprowadzić lizę krwinek czerwonych po etapie 6.
3.
Przemyć komórki jednojądrzaste dwukrotnie używając RPMI 1640 lub PBS, pH 7,2-7,4.
4.
Zmieszać w próbówce 100 µL zawiesiny komórkowej z 10 µL anty-CD10 skoniugowanym z fluorochromem.
5.
Jako kontroli ujemnej użyj niereaktywnego przeciwciała monoklonalnego o tym samym izotypie i
skoniugowanym z tym samym fluorochromem (patrz tabela). Kontrola ujemna może być użyta w objętości 10
uL, kiedy dostosuje się ją do takiego samego stężenia koniugatu, co stosowany konjugat. Jednakże,
optymalna objętość kontroli ujemnej może się różnić, np., w zależności od preparatu i metody preparacyjnej,
zatem powinna być ustalana przez każde laboratorium indywidualnie.
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 °C przez 30 minut.
F0826/R0848/PL/ROP/01.07.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
7.
Przemyć dwukrotnie PBS-em zawierającym 2% BSA. Ponownie wykonać zawieszenie komórek w każdej z
próbówek w medium odpowiednim dla cytometrii przepływowej np. 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz)
w 0,01 mol/L PBS, pH 7,4.
8.
Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
Zaleca się wykonanie kontroli ujemnej i dodatniej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy także
zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło, dlatego należy je
ochraniać w trakcie całej procedury przygotowania i analizy.
Literatura
1.
Béné MC, Faura GC, GEIL (Groupe d’Etude Immunologique des Leucemies). Recent advances in the
cytobiology of leukemias (review). CD10 in acute leukemias. Haematologica 1997;82:205-10.
2.
Barclay AN, Brown MH, Law SKA, McKnight AJ, Tomlinson MG, van der Merwe PA. CD10. Common
acute lymphoblastic leukaemia antigen (CALLA). The leucocyte antigen facts book. 2nd ed. London, San
Diego: Academic Press; 1997. p. 154-5.
3.
Jones M, Mason DY. BC2. CD10 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne
AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan.
New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p.131-32.
4.
Majdic O, Sugita K, Stockinger H, Skrobal A, Knapp W. B4.14. Comparative evaluation of CD10
antibodies. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al.,
editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International
Workshop and Conference; 1986 Sept 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1987. p. 488-9.
Legenda
(114450-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
dziennym
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
F0826/R0848/PL/ROP/01.07.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17