HCYS - Roche

0105385415190COINV3.0
HCYS
Homocysteina – test enzymatyczny
Substraty
Informacja o zamówieniach
05385415 190
Homocysteine Enzymatic Assay (100 testów)
ID systemowe 07 7487 1
05385504 190
HCYS Calibrator Kit (2 × 3 mL)
HCYS Control Kit Control 1 (2 × 3 mL)
HCYS Control Kit Control 2 (2 × 3 mL)
NaCl Diluent 9 % (6 × 22 mL)
ID systemowe 07 7493 6
ID systemowe 07 7490 1
ID systemowe 07 7492 8
ID systemowe 07 5635 0
05142423 190
20756350 322
Polski
Analizatory, w których mogą być używane
odczynniki cobas c pack
COBAS INTEGRA 400 plus
COBAS INTEGRA 800
ADA
Informacja o aplikacjach
Test HCYS, ID systemowe 0‑006
Ado
Zastosowanie
Test in vitro do ilościowych oznaczeń L‑homocysteiny w ludzkiej surowicy i
osoczu w systemach COBAS INTEGRA. Test stosowany jest w
diagnostyce pacjentów z podejrzeniem hiperhomocysteinemii lub
homocystynurii.
Podsumowanie1,2,3
Homocysteina (Hcy) jest zawierającym grupę tiolową aminokwasem
syntetyzowanym podczas wewnątrzkomórkowej demetylacji metioniny.
Homocysteina całkowita (tHcy) jest sumą wszystkich form Hcy, włączając w
to formy utlenione, związane z białkami i wolne.
Podniesiony poziom tHcy okazał się niezwykle ważnym czynnikiem
rokowniczym w przebiegu chorób układu krążenia.1,2,3 Nadmiar Hcy we krwi
poprzez swoje drażniące właściwości może uszkodzić tętnice, w efekcie
powodując ich zapalenie i odkładanie się złogów mogących.
Podniesienie poziomu tHcy powodują 4 główne czynniki:
NH3 + NADH + 2‑ketoglutaran
1. genetycznie uwarunkowane niedobory enzymów metabolizujących Hcy,
takich jak syntaza beta-cystationinowa (CBS), syntaza metioninowa
(MS) i reduktaza metylenotetrahydrofoliowa (MTHFR);
2. niedobory żywieniowe witamin grupy B takich jak B6, B12 i kwasu
foliowego;
3. niewydolność nerek w zakresie skutecznego wskaźnika oczyszczania z
aminokwasów; i
4. interakcje lekowe, np. z tlenkiem azotu, metotreksatem i fenytoiną
interferującymi w metabolizm Hcy. Podniesiony poziom tHcy łączy się
również z chorobą Alzheimera4, chorobami neuropsychiatrycznymi5 i
osteoporozą.6 Niedawno określono ogólne wytyczne dotyczące
oznaczania tHcy.7,8
Zasada pomiaru
Test Homocysteine Enzymatic Assay oparty jest na nie stosowanej
dotychczas metodzie wykorzystującej zasady cyklu enzymatycznego, za
pomocą którego można oznaczyć produkt konwersji kosubstratu zamiast
oznaczania samego kosubstratu lub produktów Hcy pochodzących z
konwersji Hcy. W tej metodzie utleniona Hcy jest najpierw redukowana do
wolnej Hcy, która następnie reaguje z kosubstratem S-adenozylometioniną
(SAM) tworząc metioninę (Met) oraz S-adenozylohomocysteinę (SAH) w
obecności katalizatora S-metylotransferazy Hcy. SAH jest oznaczana za
pomocą reakcji sparowanych enzymów, gdzie SAH jest hydrolizowana do
adenozyny (Ado) i Hcy przez hydrolazę SAH, a Hcy jest włączona w cykl
reakcji konwersji Hcy, w której przebiegająca reakcja cykliczna wzmacnia
sygnał wykrywania. Utworzona Ado jest natychmiast hydrolizowana do
inozyny i amoniaku. Na koniec dehydrogenaza glutaminowa (GLDH)
katalizuje reakcję amoniaku z 2‑ketoglutaranem i NADH tworząc w efekcie
NAD+. Stężenie Hcy w próbce jest proporcjonalne do ilości NADH
skonwertowanego do NAD+ (ΔA340 nm).
2016-03, V 3.0 Polski
Inozyna + NH3
GLDH
Glutaminian + NAD++ H2O
Odczynniki - roztwory robocze
R1
Odczynnik NADH
S‑adenozylometionina 0.1 mmol/L; TCEPa) > 0.5 mmol/L;
2‑ketoglutaran < 5.0 mmol/L; NADH > 0.2 mmol/L; bufor, pH 9.1
(25 °C); konserwant, stabilizator
R2
Odczynnik enzymatyczny
S‑metylotransferaza homocysteiny (HMTaza) 5.0 kU/L,
dehydrogenaza glutaminowa (GLDH) 10 kU/L, kazeina
(wołowa) ≤ 0.2 %, bufor, pH 7.2 (25 °C), konserwant, detergent
SR
Odczynnik startowy
Deaminaza adenozynowa (wołowa) 5.0 kU/L, hydrolaza
S‑adenozylohomocysteinowa (SAHase) 3.0 kU/L, kazeina
(wołowa) ≤ 0.2 %, bufor, pH 7.2 (25 °C), konserwant, stabilizator
a) Tris(2‑karboksyetylo)fosfina
R1 jest na pozycji A, R2 jest na pozycji B, a SR jest na pozycji C.
Zalecenia i środki ostrożności
Należy przestrzegać wszelkich zaleceń oraz środków ostrożności
zawartych w rozdziale 1, "Wstęp".
Postępowanie z odczynnikami
Gotowy do użycia
Przechowywanie i trwałość
W temp. 2‑8 °C
Do daty ważności na
etykiecie cobas c pack
System COBAS INTEGRA 400 plus
W analizatorze w temperaturze 10‑15 °C
4 tyg.
System COBAS INTEGRA 800
W analizatorze w temp. 8 °C
4 tyg.
Pobieranie i przygotowanie materiału
W celu pobrania i przygotowania materiału należy stosować jedynie
przeznaczone do tego probówki lub pojemniki.
Sprawdzono i zaakceptowano możliwość stosowania jedynie materiałów
biologicznych wymienionych poniżej.
Surowica
Osocze: Osocze krwi pobranej na heparynę litową, K2-EDTA i K3-EDTA .
Ważne jest, aby próbki krwi odwirować w celu oddzielenia osocza od
elementów morfotycznych natychmiast po pobraniu Jeżeli nie jest to
możliwe, pobrane próbki krwi należy przechować w lodzie i odwirować w
ciągu godziny. Próbki, które uległy hemolizie, lub próbki mętne lub w dużym
stopniu lipemiczne nie nadają się do oznaczeń Hcy.
Podane rodzaje próbek oznaczono przy użyciu wybranych probówek do
pobierania materiału dostępnych na rynku w czasie wykonywania
oznaczeń. Oznacza to, że nie przetestowano probówek od wszystkich
producentów. Systemy pobierania próbek pochodzące od różnych
producentów mogą zawierać różniące się materiały, co w pewnych
przypadkach może mieć wpływ na wynik oznaczeń. W przypadku
1/4
HCYS
0105385415190COINV3.0
HCYS
Homocysteina – test enzymatyczny
Substraty
stosowania probówek pierwotnych (systemów pobierania krwi) należy ściśle
przestrzegać zaleceń ich producenta.
Przed oznaczeniem odwirować próbki z widocznym zmętnieniem lub
obecnością strątów.
Trwałość:8,9,10
Całkowita objętość
Kalibracja
Kalibratory
HCYS Calibrator Kit
Współczynnik rozcieńczenia
kalibratora:
1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:18
automatycznie wykonywane przez
analizator
Tryb kalibracji
Logit/log 5
Powtórzenia kalibracji
Zalecana w duplikacie
Częstość wykonywania kalibracji
Pełna kalibracja
4 dni w temp. 15‑25 °C
4 tyg. w temp. 2‑8 °C
10 mies. w temp. ‑20 °C
Materiały dostarczone w zestawie
Patrz "Odczynniki - roztwory robocze" w części o odczynnikach.
Niezbędne materiały dodatkowe (niedostarczone w zestawie)
NaCl Diluent 9 %, nr kat. 20756350 322, ID systemowe 07 5635 0 do
automatycznego rozcieńczania i serii rozcieńczeń kalibratora.
NaCl Diluent 9 % należy umieścić na wcześniej zdefiniowanej pozycji na
odpowiednim statywie. W analizatorze COBAS INTEGRA 400 plus/800
pozostaje stabilny przez następne 4 tygodnie.
Oznaczenie
W celu optymalnego działania testu należy stosować się do zaleceń
zawartych w niniejszej ulotce dotyczących konkretnego analizatora. Należy
postępować zgodnie z poniższą instrukcją obsługi dla operatora,
uwzględniając typ aparatu.
Aplikacja dla surowicy i osocza
Definicja testu COBAS INTEGRA 400 plus
Rodzaj pomiaru
Absorbancja
Model kalkulacyjny absorbancji
Kinetyczna
Rodzaj reakcji
R1/R2-S-SR
Kierunek reakcji
Malejący
Długość fali A/B
340/659 nm
Odczyt pierwszy/ostatni
50/62
Jednostka
µmol/L
Parametry pipetowania
Rozcieńczalnik
(H2O)
R1
175 µL
–
R2
27 µL
–
Próbka
14 µL
–
SR
18 µL
–
Całkowita objętość
234 µL
Definicja testu COBAS INTEGRA 800
Rodzaj pomiaru
Absorbancja
Model kalkulacyjny absorbancji
Kinetyczna
Rodzaj reakcji
R1/R2-S-SR
Kierunek reakcji
Malejący
Długość fali A/B
340/659 nm
Odczyt pierwszy/ostatni
73/95
Jednostka
µmol/L
Parametry pipetowania
Rozcieńczalnik
(H2O)
R1
175 µL
–
R2
27 µL
–
Próbka
14 µL
–
SR
18 µL
–
HCYS
234 µL
▪ co 7 dni
▪ po zmianie serii odczynnika
▪ jeśli wymagają tego procedury
kontroli jakości
Spójność pomiarowa: Niniejsza metoda była standaryzowana wobec
materiału referencyjnego NIST SRM 1955.
Kontrola jakości
Do kontroli należy używać materiałów wyszczególnionych w części
"Informacja o odczynnikach". Można stosować również inny odpowiedni
materiał kontrolny.
Częstotliwość i zakres przeprowadzania kontroli muszą być dostosowane
do indywidualnych wymogów danego laboratorium. Uzyskane wartości
winny zawierać się w wyznaczonych granicach. Wskazane jest, by każde
laboratorium opracowało procedury naprawcze, które należy wdrożyć, gdy
wyniki uzyskane dla materiałów kontrolnych znajdą się poza podanym
zakresem.
Procedury kontroli jakości należy stosować zgodnie z właściwymi
zaleceniami organów państwowych oraz lokalnymi wytycznymi.
Wyliczenie
Analizatory COBAS INTEGRA automatycznie obliczają stężenie
oznaczanej substancji dla każdej próbki. Więcej informacji zawarto w
rozdziale "Dane Analityczne" na stronie internetowej Online Help
(analizatory COBAS INTEGRA 400 plus/800).
Ograniczenia - substancje interferujące
Kryterium: Odzysk w ± 1.5 µmol/L wartości początkowych dla próbek
≤ 15 µmol/L oraz w ± 10 % dla próbek > 15 µmol/L.
Żółtaczka:11 Brak istotnej interferencji do wartości wskaźnika
I wynoszącego 20 dla przybliżonego stężenia związanej i niezwiązanej
bilirubiny (przeciętne stężenie bilirubiny związanej i niezwiązanej:
342 µmol/L lub 20 mg/dL).
Hemoliza:11 Brak istotnej interferencji do wartości indeksu H 100
(przybliżone stężenie hemoglobiny: 62 µmol/L lub 100 mg/dL).
Lipemia (Intralipid):11 Brak istotnej interferencji do wartości wskaźnika L
wynoszącego 250. Brak istotnej zależności pomiędzy wskaźnikiem L
(odnosi się do zmętnienia), a stężeniem triglicerydów.
Leki: Brak interferencji z najczęściej używanymi lekami w stężeniu
terapeutycznym.12,13 Wyjątki: 0.5 mmol/L glutation, 100 μmol/L cystationina,
0.5 mmol/L pirogronian.
Pacjenci leczeni metotreksatem, karbamazepiną, fenytoiną, tlenkiem azotu,
lekami przeciwdrgawkowymi lub trójoctanem 6‑azurydyny mogą mieć
wyższe stężenie Hcy, wynikające z interferencji leków z metabolizmem
Hcy.7,10
S‑adenozylohomocysteina (SAH) powoduje znaczne interferencje dodatnie.
Niemniej SAH jest wykrywalna tylko w prawidłowym osoczu w stężeniach
poniżej nmol/L i nie stanowi w związku z tym istotnego czynnika
interferującego.14
Sugeruje się dodawanie 3‑deazoadenozyny w celu hamowania produkcji
Hcy w erytrocytach. Niemniej do testu Homocysteine Enzymatic Assay nie
można używać próbek zawierających 3‑deazoadenozynę, ponieważ
hamuje ona kluczowe enzymy użyte w teście.
W bardzo rzadkich przypadkach gammapatii, szczególnie typu IgM
(makroglobulinemia Waldenströma), wyniki mogą być niemiarodajne.15
2/4
2016-03, V 3.0 Polski
0105385415190COINV3.0
HCYS
Homocysteina – test enzymatyczny
Substraty
Dla celów diagnostycznych wyniki powinny być interpretowane z
uwzględnieniem historii choroby, badań klinicznych oraz innych danych o
pacjencie.
WYMAGANA CZYNNOŚĆ
Programowanie specjalnego cyklu mycia: W odniesieniu do pewnych
kombinacji testów przeprowadzanych jednocześnie w analizatorach
COBAS INTEGRA obowiązkowe jest stosowanie specjalnych cykli mycia.
Dalsze instrukcje oraz najnowsza wersja Dodatkowych Cykli Mycia, zob.
ulotka metodyczna odczynnika CLEAN.
Tam, gdzie to konieczne, przed podaniem wyników testu należy
wprowadzić mający na celu uniknięcie efektu przeniesienia specjalny
program dodatkowego cyklu mycia.
Szczegółowe dane o teście
Dane uzyskane przy użyciu analizatorów podano poniżej. Wyniki uzyskane
w poszczególnych laboratoriach mogą się różnić.
Precyzja
Precyzję oznaczono w oparciu o surowice ludzkie i próbki kontrolne
zgodnie z wymogami CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)
EP5 dla powtarzalności (n = 21) i precyzji pośredniej (2 próbki w serii,
2 serie na dzień, przez 21 dni). Uzyskano następujące wyniki:
Powtarzalność
Średnia
µmol/L
OS
µmol/L
WZ
%
Granice i zakresy
Zakres pomiarowy
3‑50 µmol/L
Dolna i górna granica zakresu pomiaru zależy od aktualnej wartości
kalibratora.
Próbki o wartościach przekraczających liniowość reakcji należy rozcieńczać
automatycznie przy użyciu funkcji Rerun. Rozcieńczenie próbek za pomocą
funkcji Rerun wynosi 1:5. Wyniki próbek rozcieńczonych za pomocą funkcji
Rerun są automatycznie mnożone przez współczynnik 5.
Dolna granica pomiaru
Granica próby ślepej, Granica wykrywalności oraz Granica oznaczalności
Homocysteine Control 1
12.2
0.1
1.0
Homocysteine Control 2
38.9
0.5
1.3
Sur. ludzka 1
8.47
0.09
1.1
Sur. ludzka 2
13.5
0.1
0.9
Sur. ludzka 3
31.2
0.3
0.9
Sur. ludzka 4
45.5
0.6
1.4
Precyzja pośrednia
Średnia
µmol/L
OS
µmol/L
WZ
%
Homocysteine Control 1
12.2
0.2
1.4
Granica próby ślepej
= 3 µmol/L
Homocysteine Control 2
38.9
0.6
1.5
Granica wykrywalności
= 3 µmol/L
Sur. ludzka 1
8.47
0.11
1.3
Granica oznaczalności
= 5.5 µmol/L
Sur. ludzka 2
13.5
0.2
1.4
Sur. ludzka 3
31.2
0.5
1.4
Sur. ludzka 4
45.5
0.8
1.7
Granice próby ślepej, wykrywalności i granicę ilościową określono zgodnie
z wymogami EP17‑A CLSI (Instytutu Standardów Klinicznych i
Laboratoryjnych; dawniej NCCLS).
Granica próby ślepej jest 95. percentylem wartości z n ≥ 60 pomiarów
próbek nie zawierających analizowanych substancji w kilku niezależnych
seriach. Granica dla próby ślepej jest równa stężeniu, poniżej którego
próbki wolne od substancji badanej znajdowane są z
prawdopodobieństwem 95 %.
Granica wykrywalności jest określona na podstawie granicy dla próby ślepej
i odchylenia standardowego próbek o niskim stężeniu.
Granica wykrywalności odnosi się do najniższego dającego się oznaczyć
stężenia substancji analizowanej (wartość ponad granicę próby ślepej z
95 % prawdopodobieństwem).
Granica oznaczalności ilościowej to najniższe stężenie substancji
analizowanej, mierzone w sposób powtarzalny przy błędzie całkowitym
wynoszącym 30 %. Została wyliczona przez oznaczenia próbek o niskim
stężeniu homocysteiny.
Wartości oczekiwane
W większości laboratoriów klinicznych w USA, 15 µmol/L jest wartością
odcięcia dla prawidłowego stężenia Hcy u dorosłych.
W laboratoriach europejskich jako wartość odcięcia dla prawidłowego
stężenia Hcy u dorosłych stosowana jest wartość 12 μmol/L:8
Ważne są wiek, ciąża i wydolność nerek. Pod uwagę należy wziąć pobór
kwasu foliowego, innych suplementów czy wzbogacanych pokarmów.
Grupa
Suplementacja
folianami
Niesuplementowani
Ciąża
8
10
Dzieci < 15 lat
8
10
Dorośli 15‑65 lat
12
15
Dorośli > 65 lat
16
20
Na czczo/podstawowe tHcy,
µmol/L
W oparciu o populację pacjentów każde laboratorium powinno określić
poziom wartości oczekiwanych lub wyznaczyć własne zakresy wartości
referencyjnych.
2016-03, V 3.0 Polski
Porównanie metod
Wartości Hcy dla próbek pobranych od ludzi uzyskane w analizatorze
COBAS INTEGRA 800 (y) porównano z uzyskanymi za pomocą tego
samego odczynnika w analizatorze COBAS INTEGRA 400 (x).
Ilość próbek (n) = 56
Passing/Bablok16
Regresja liniowa
y = 1.00x + 0.144 µmol/L
y = 1.04x - 0.224 µmol/L
τ = 0.967
r = 0.998
Stężenia próbek mieściły się w granicach pomiędzy 3.39 i 46.8 µmol/L.
Literatura
1 Eikelboom JW, Lonn E, Genest J Jr, et al. Homocyst(e)ine and
cardiovascular disease: A critical review of the epidemiologic evidence.
Ann Intern Med 1999;131(5):363-375.
2 Scott J, Weir D. Homocysteine and cardiovascular disease. Q J Med
1996;89(8):561-563.
3 Nygard O, Nordrehaug JE, Refsum H, et al. Plasma homocysteine
levels and mortality in patients with coronary artery disease. N Engl J
Med 1997;337(4):230-236.
4 Seshadri S, Beiser A, Selhub J, et al. Plasma homocysteine as a risk
factor for dementia and Alzheimer's disease. N Engl J Med
2002;346(7):476-483.
5 Stanger O, Fowler B, Piertzik K, et al. Homocysteine, folate and vitamin
B12 in neuropsychiatric diseases: review and treatment
recommendations. Expert Rev Neurother 2009;9(9):1393-1412.
6 McLean RR, Jacques PF, Selhub J, et al. Homocysteine as a predictive
factor for hip fracture in older persons. N Engl J Med
2004;350(20):2042-2049.
7 Refsum H. Total Homocysteine: Guidelines for Determination in the
Clinical Laboratory. Clin Lab News 2002 May;12-14 (www.aacc.org).
8 Refsum H, Smith AD, Ueland PM, et al. Facts and Recommendations
about Total Homocysteine Determinations: An Expert Opinion. Clin
Chem 2004;50(1):3-32.
3/4
HCYS
0105385415190COINV3.0
HCYS
Homocysteina – test enzymatyczny
Substraty
9
Fiskerstrand T, Refsum H, Kvalheim G, et al. Homocysteine and other
thiols in plasma and urine: Automated determination and sample
stability. Clin Chem 1993 Feb;39(2):263-271.
10 Rasmussen K and Moller J. Total homocysteine measurement in
clinical practice. Ann Clin Biochem 2000;37:627-648.
11 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of
Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.
Clin Chem 1986;32:470-475.
12 Breuer J. Report on the Symposium “Drug effects in Clinical Chemistry
Methods”. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386.
13 Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry:
recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug
interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-385.
14 Loehrer FM, Angst CP, Brunner FP, et al. Evidence for disturbed Sadenosylmethionine: S-adenosylhomocysteine ratio in patients with
end-stage renal failure: a cause for disturbed methylation reactions?
Nephrol Dial Transplant 1998;13(3):656-661.
15 Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry
assays: mechanisms, detection and prevention.
Clin Chem Lab Med 2007;45(9):1240-1243.
16 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure
for method transformation. Application of linear regression procedures
for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin
Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790.
W niniejszej ulotce metodycznej jako separatora dziesiętnego,
oddzielającego liczbę całkowitą od części dziesiętnych ułamka dziesiętnego
stosuje się zawsze kropkę. Separatorów oddzielających tysiące nie używa
się.
Symbole
Oprócz znaków zawartych w standardzie ISO 15223‑1, firma Roche
Diagnostics używa następujących symboli i znaków.
Zawartość zestawu
Objętość po rekonstytucji lub wymieszaniu
Istotne dodatki oraz zmiany zostały oznaczone na marginesie.
© 2014, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
HCYS
4/4
2016-03, V 3.0 Polski