VE1 - Roche

do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości,
(5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary
Antibody
POTRZEBNE MATERIAŁY NIEDOŁĄCZONE DO ZESTAWU
Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA
ani elementów pomocniczych, takich jak pozytywne i negatywne kontrolne preparaty
tkankowe.
Nie wszystkie produkty przedstawione na ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
790-4855
06918727001
50
PRZEZNACZENIE
Rysunek 1. Odczyn komórek
nowotworowych w tkance raka okrężnicy
wybarwionych przeciwciałami anti-BRAF
V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary
Antibody.
Przeciwciało anti-BRAF V600E (VE1)
Mouse Monoclonal Primary Antibody
(anti-BRAF V600E (VE1)) może być
używane do wspomagania
identyfikacji zmutowanego białka
BRAF V600E. Przeciwciało jest
przeznaczone do jakościowego
barwienia skrawków tkankowych,
utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie. Wynik powinien zostać
zinterpretowany przez
wykwalifikowanego patologa w
połączeniu z badaniem
histologicznym, odnośnymi danymi
klinicznymi i właściwymi badaniami
kontrolnymi. To przeciwciało jest
przeznaczone do stosowania w
diagnostyce in vitro (IVD).
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Gen BRAF zlokalizowany na chromosomie 7q34 koduje cytoplazmatyczną kinazę
serynowo-treoninową, która działa w dół szlaku sygnalizacji kinaz proteinowych
aktywowanych mitogenami (MAPK). Onkogenne mutacje genu BRAF, występujące
zawsze w domenie kinazy, konstytucyjnie aktywują szlak sygnalizacji MAPK, powodując
nasilenie proliferacji komórek i odporność na apoptozę. Najczęstsza ze wszystkich mutacji
BRAF (mutacja punktowa T1799A) aktywujących szlak MAPK powoduje zastąpienie
waliny (V) kwasem glutaminowym (E) na pozycji 600 sekwencji aminokwasów.1 Mutacje
BRAF V600E wykrywane były w około 8% wszystkich guzów litych, w tym w 43%
czerniaków, 39% raków brodawczakowatych tarczycy, 12% raków surowiczych jajników,
12% gruczolakoraków jelita grubego, 2% raków płuca i innych raków.2 Ponadto mutacja
BRAF V600E opisana została niedawno jako marker molekularny białaczki
włochatokomórkowej.3
Przeciwciało anti-BRAF V600E (VE1) jest monoklonalnym przeciwciałem mysim (klon
VE1) immunizowanym peptydem syntetycznym reprezentującym zmutowaną sekwencję
aminokwasów BRAF na odcinku od aminokwasu 596 do 606 (GLATEKSRWSG). To
przeciwciało skierowane swoiście przeciwko mutacji daje odczyn cytoplazmatyczny.
Przeciwciało różnicuje mutację V600E w białku BRAF od niezmutowanego białka BRAF i
innych mutacji białka BRAF.4-5
PRZECHOWYWANIE
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dostarczenia odczynnika i stabilności przeciwciał należy
po każdym użyciu założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dyspenser w lodówce w
pozycji pionowej.
Na każdym dyspenserze przeciwciał podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje stabilność do daty określonej na etykiecie. Nie
wolno stosować odczynnika po upływie daty ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatów do barwienia VENTANA
BenchMark XT, BenchMark ULTRA oraz BenchMark GX. Zalecanym środkiem do
utrwalania tkanek jest 10% obojętna zbuforowana formalina.6 Preparaty należy
niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem
ulegać osłabieniu.
Zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli pozytywnej i negatywnej przy badaniu
nieznanych preparatów.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
W tym preparacie zastosowano jako konserwant środek ProClin 300. Został on
sklasyfikowany jako drażniący i w wyniku kontaktu ze skórą może wywołać
sensytyzację. Podczas pracy z produktem należy stosować uzasadnione środki
ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi.
Stosować odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i utylizować z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Może ono powodować
nieprawidłowe wyniki.
Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody utylizacji produktu, należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub wojewódzkimi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
PROCEDURA BARWIENIA
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
Anti-BRAF V600E (VE1) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na 50 testów.
Jeden dyspenser anti-BRAF V600E (VE1) o pojemności 5 ml zawiera około 60 μg mysich
przeciwciał monoklonalnych.
Przeciwciała są rozcieńczone w buforze fosforanowym 0,1 M (pH 7,3) z dodatkiem 0,3%
białka nośnikowego, środka Brij 35 w stężeniu 0,05% i konserwantu, środka ProClin300 w
stężeniu 0,05%.
Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 12 μg/ml. Anti-BRAF V600E (VE1) jest mysim przeciwciałem
monoklonalnym, otrzymywanym jako oczyszczony supernatant z hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki dołączonej do opakowania zestawu do
detekcji firmy VENTANA, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii:
(1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone
2015-01-07
FT0700-410g
1/3
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w
automatach do barwienia VENTANA BenchMark XT, BenchMark ULTRA i BenchMark GX
wraz z zestawem do detekcji VENTANA OptiView DAB IHC Detection Kit i akcesoriami.
Zalecane protokoły barwienia — patrz Tabela 1.
Opisywane przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji,
jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem
tego odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
1012094PL Rev D
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia przeciwciałami anti-BRAF V600E (VE1) przy
użyciu zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit w aparatach BenchMark XT,
BenchMark ULTRA i BenchMark GX .
Typ procedury
Metoda
Swoistość
Tabela 2. Swoistość preparatu anti-BRAF V600E (VE1) określono poprzez badanie
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek tkanek prawidłowych.
L. pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Tkanka
L. pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Mózg
0/3
Grasica
0/3
Móżdżek
0/3
Szpik kostny
0/3
Nadnercze
0/3
Płuco
0/13
Jajnik
0/3
Serce
0/3
Trzustka
0/3
Przełyk
0/3
Tarczyca
0/4
Żołądek
0/3
Przytarczyce
0/3
Jelito cienkie
0/3
Przysadka
3/3*
Okrężnica
0/3
Jądra
2/3*
Wątroba
0/3
Sutek
0/16
Ślinianka
0/3
Śledziona
0/3
Nerka
0/3
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między
poszczególnymi aparatami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może być
wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji pierwszorzędowego przeciwciała i
kondycjonowania komórek, zależnie od próbki, zastosowanej metody detekcji i preferencji
użytkownika. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem zawiera
pozycja „Immunohistochemistry Principles and Advances”.7
Migdałek
0/3
Gruczoł krokowy
0/3
Błona śluzowa
trzonu macicy
0/3
Szyjka macicy
0/3
Mięśnie szkieletowe
0/2
Skóra
0/3
POZYTYWNA KONTROLA TKANKOWA
Nerwy (nieliczne)
0/3
Mezotelium
0/2
Pęcherz moczowy
0/3
Opłucna i płuco
0/1
Odparafinowanie
Wybrane
Kondycjonowanie preparatu
komórkowego
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1,
64 minuty
Enzym (proteaza)
Niewymagane
Inhibitor peroksydazy przed
przeciwciałem pierwszorzędowym
Wybrane
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Aparat BenchMark XT
16 minut, 37°C
Aparat BenchMark ULTRA
16 minut, 36°C
Aparat BenchMark GX
28 minut, 37°C
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Tkanka
Do odpowiednich pozytywnych kontroli tkankowych należy gruczolakorak jelita grubego i
rak brodawczakowaty tarczycy z mutacją BRAF V600E.
INTERPRETACJA BARWIENIA
* odczyn jądrowy
Czułość
W komórkach nowotworowych wybarwionych przeciwciałami anti-BRAF V600E (VE1)
Tabela 3. Czułość preparatu anti-BRAF V600E (VE1) określono poprzez badanie różnych
występuje odczyn cytoplazmatyczny. Warunkiem rozpoznania wyniku pozytywnego jest
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek tkanek nowotworowych.
obecność odczynu cytoplazmatycznego w komórkach nowotworowych w tkance
L. pozytywnych/
wybarwionej przeciwciałami anti-BRAF V600E (VE1) i brak odczynu w tkance wybarwionej
wszystkich
kontrolą negatywną Negative Control (Monoclonal). Niekiedy obserwuje się odczyn jądrowy
Nowotwór
przypadków
w komórkach nowotworowych, jednak brak jest informacji na temat znaczenia i istotności
takiego odczynu.
Glejak
0/1
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Użytkownik musi walidować wyniki zoptymalizowane w konkretnym laboratorium
uzyskiwane dla tego odczynnika. Opisywane oznaczenie zostało zoptymalizowane pod
kątem użycia z zestawem do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit i nie zaleca się
stosowania go z zestawem ultraView Universal DAB Detection Kit. Przed upływem 2
godzin od pobrania należy rozpocząć utrwalanie próbki przez co najmniej 12 godzin w 10procentowej obojętnej zbuforowanej formalinie. Nie zaleca się utrwalania tkanek 95procentowym alkoholem, środkiem Prefer, środkiem Z-5 ani mieszaniną alkoholu, kwasu
octowego i formaliny (AFA).
Stwierdzono, że przeciwciała anti-BRAF V600E (VE1) dają niekiedy cytoplazmatyczny
odczyn tła w mięśniach gładkich oraz odczyn jądrowy w komórkach prawidłowego nabłonka
okrężnicy, enterocytach, komórkach Leydiga z jąder, nadnerczach, przysadce i niektórych
komórkach nowotworowych; jednak takich przypadków nie należy uznawać za wyniki
pozytywne testu w kierunku mutacji BRAF V600E. Ponadto opisywane przeciwciała barwią
także rzęski płucne.
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego swoistości, czułości i
powtarzalności, a wyniki zostały zamieszczone w Tabeli 2, Tabeli 3 oraz w sekcji
Powtarzalność.
2015-01-07
FT0700-410g
2/3
Oponiak atypowy
0/1
Wyściółczak złośliwy
0/1
Skąpodrzewiak złośliwy
0/1
Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty (jajnika)
0/1
Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty (jajnika)
0/1
Rak z komórek wyspowych
0/1
Gruczolakorak trzustki
0/1
Nasieniak
0/1
Rak zarodkowy (jądra)
0/1
Rak rdzeniowy tarczycy
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy
21/28
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
0/1
Inwazyjny przewodowy rak sutka
2/132
1012094PL Rev D
Nowotwór
Rak rdzeniasty sutka
Chłoniak rozlany z limfocytów B
L. pozytywnych/
wszystkich
przypadków
1/9
0/1
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuc
0/7
Rak kolczystokomórkowy płuc
0/66
Gruczolakorak płuc
1/61
Rak wielkokomórkowy płuc
0/5
Rakowiak atypowy płuc
0/5
Rak oskrzelikowo-pęcherzykowy
0/4
Rak gruczołowo-płaskonabłonkowy (płuc)
0/2
Rak lity z komórek śluzowych
1/1
Rak neuroendokrynny (przełyku)
0/1
Gruczolakorak przełyku
0/1
Śluzowy gruczolakorak żołądka
0/1
Gruczolakorak przewodu pokarmowego (jelito cienkie)
0/1
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
0/3
Powtarzalność
Przeprowadzono badania powtarzalności dla przeciwciał anti-BRAF V600E (VE1), w celu
określenia:

Odtwarzalności wyników między seriami przeciwciał.

Powtarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami za pomocą aparatu
BenchMark XT.

Odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu aparatu BenchMark XT
oraz aparatu BenchMark ULTRA.

Odtwarzalności wyników między platformami pomiędzy aparatami BenchMark XT i
BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
5.
Davies H, Bignell GR, Cox C, et al. Mutation of the BRAF gene in human cancer.
Nature. 2002;417:949-954.
Vakiani E, Solit DB. KRAS and BRAF: drug targets and predictive biomarkers.
J Pathol. 2011;223:219-229.
Tiacci E, Schiavoni G, Forconi F, et al. Simple genetic diagnosis of hairy cell
leukemia by sensitive detection of the BRAF-V600E mutation. Blood.
2012;119(1):192-195.
Capper D, Preusser M, Habel A, et al. Assessment of BRAF V600E mutation status
by immunohistochemistry with a mutation-specific monoclonal antibody.
Acta Neuropathol. 2011;122;11-19.
Capper D, Berghoff AS, Magerle M, et al. Immunohistochemical testing of BRAF
V600E status in 1,120,tumor tissue samples of patients with brain metastasis. Acta
Neuropathol. 2012;123:223-233.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
Gruczolakorak jelita grubego
64/235
Rak z komórek wątrobowych
0/1
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Rak jasnokomórkowy nerki
0/1
Gruczolakorak prostaty
0/2
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
Mięśniak gładkokomórkowy
0/1
Gruczolakorak endometrium
0/1
BENCHMARK, OptiView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy
Roche.
Rak jasnokomórkowy endometrium
0/1
© 2013 Ventana Medical Systems, Inc.
Rak płaskonabłonkowy macicy
0/2
DANE TELEADRESOWE
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Czerniak złośliwy odbytu
0/1
Rak podstawnokomórkowy
0/1
Rak kolczystokomórkowy
0/1
Nerwiakowłókniak
0/1
Nerwiak niedojrzały zaotrzewnowy
0/1
Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy
0/1
Chłoniak złośliwy rozlany
0/2
Chłoniak Hodgkina
0/1
Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy
0/1
Rak z komórek przejściowych pęcherza moczowego
0/1
Mięsak gładkokomórkowy wysoko zróżnicowany
0/1
Kostniakomięsak
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
Czerniak złośliwy
2015-01-07
FT0700-410g
6.
7.
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
0/1
10/24
3/3
1012094PL Rev D