Specsheet Template CE
Transkrypt
Specsheet Template CE
Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class III, Klon BIRMA-K3 Nr katalogowy C 7238 Nr katalogowy F 7081 Nr katalogowy R 7125 Nr katalogowy C 7126 Przeznaczenie APC-Conjugated FITC-Conjugated RPE-Conjugated RPE-Cy5-Conjugated Do diagnostyki in vitro. C 7238, F 7081, R 7125 i C 7126 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. CD34 występuje na wczesnych hematopoetycznych komórkach pnia i komórkach progenitorowych a także na komórkach endotelialnych. Przeciwciała przeciw CD34 mogą być używane do oznaczania ilościowego i oczyszczania progenitorowych komórek hematopoetycznych w transplantologii i do celów naukowych (1-6). CD34 jest użytecznym markerem komórek pnia i progenitorowych, wykorzystywanym także w klasyfikacji białaczek. Interpretacja badań musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby i innych testów diagnostycznych. Wprowadzenie CD34 jest jednołańcuchowym, przezbłonowym białkiem o masie cząsteczkowej około 116 KD, obecnym na niedojrzałych progenitorowych komórkach hematopetycznych, kapilarnych komórkach endotelialnych, zarodkowych fibroblastach i rzadziej komórkach glejowych tkanki nerwowej (1, 5). Ekspresja CD34 osiąga najwyższy poziom na najmłodszych komórkach progenitorowych i spada w miarę ich dojrzewania (2, 4). CD34 jest antygenem różnicowania leukocytów związanym bardziej z ich stopniem zróżnicowania niż z poszczególnymi liniami leukocytów. Większość niedojrzałych prekursorów limfocytów B (CD19+/CD10+/TdT+) są CD34+ (2, 4, 5). Niedojrzałe prekursory limfocytów T także wykazują ekspresję TdT i CD34 (5). Normalne limfocyty krwi obwodowej, monocyty, granulocyty i płytki nie wykazują ekspresji CD34 (4). Około 60% ostrych białaczek limfoblastycznych i 40% ostrych białaczek mieloblastycznych (AML) i 1% do 5% ostrych białaczek Tkomórkowych wykazuje ekspresję CD34 (4). Przewlekłe białaczki limfatyczne, chłoniaki i szpiczaki są CD34 negatywne (2, 4, 5) W zależności od swoistości epitopowej uwarunkowanej wrażliwością na swoiste enzymy, przeciwciała monoklonalne przeciw CD34 można podzielić na trzy główne klasy: klasę I, klasę II i klasę III. Np., przeciwciała monoklonalne klasy III rozpoznają epitop CD34 odporny na neuraminidazę, chymopapainę i glikoproteazę (1, 3). Odczynnik dostarczony Koniugaty anty CD34, C 7238, F 7081, R 7125 i C 7126, uzyskano z oczyszczonego mysiego przeciwciała monoklonalnego. Koniugaty są dostarczone w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% bydlęcej albuminy (BSA) i 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każda probówka C 7238 zawiera 50 testów (10 L koniugatu dla ponad 106 komórek KG-1a ). Każda probówka F 7081, R 7125 i C 7126 zawiera 100 testów (10 L koniugatu dla ponad 106 komórek KG-1a). Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zob. opis na fiolce. Koniugaty anty CD34 Nr katologowy Nr katalogowy Fluorochrom kontroli negatywnej przeciwciała F 7081 FITC (izotiocyjanian fluoresceiny izomer 1) X 0927 R 7125 RPE (R-fikoerytryna) X 0928 C 7126 RPE-Cy5 (R-fikoerytryna-cyanina 5) X 0955 C 7238 APC (allofikocyanina) X 0968 Immunogen Komórki KG-1a (3). Swoistość Anti-CD34, BIRMA-K3, zostały zaakceptowane przez Sixth International Workshop i Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens (Kobe 1996) oraz badane przez różne laboratoria, które potwierdziły ich reaktyw- ność z CD34 i epitopem klasy III (1). W cytometri przepływowej przeciwciało znakuje komórki KG-1a (linia prymitywnych komórek białaczki szpikowej reagujących z CD34) (3). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. Przechowywanie Przechowywać bez dostępu światła, w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności określonej na probówce. Jeżeli odczynnik jest przechowywany w innych warunkach niż wymienione, ich jakość musi zostać zweryfikowana przez użytkownika. Nie oznacza to niestabilności produktu. Jednak, równocześnie z materiałem pochodzącym od chorego, powinny być wykonane kontrole pozytywna i negatywna. W przypadku wystąpienia (111613-002) C 7238/F 7081/R 7125/C 7126/PL/TIA/010702 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 nieoczekiwanych wyników barwienia, które nie mogą być wytłumaczone wariantami procedur laboratoryjnych oraz w przypadku podejrzenia problemów z przeciwciałem, prosimy o kontakt z naszym serwisem technicznym. Procedura barwienia 1. Pobrać krew żylną do probówki zawierającej antykoagulant. 2. Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na medium izolacyjnym. Alternatywnie, zlizować erytrocyty po kroku 6. 3. Dwukrotnie płukać komórki jednojądrzaste w RPMI 1640 lub PBS, pH 7.2-7.4. 4. Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L znakowanych fluorochromem anty-CD34. 5. Użyć nieaktywnych przeciwciał monoklonalnych tego samego izotopu i znakowanych tym samym fluorochromem jako kontroli negatywnej (zob. tabela) 6. Inkubować bez dostępu światła w temp. 4C przez 30 minut. 7. Dwukrotnie płukać w PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w odpowiednim dla cytometrii przepływowej płynie, np. 0.3 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4. 8. Przeprowadzić analizę cytometryczną. Zaleca się stosowanie pozytywnej i negatywnej kontroli. Ponieważ koniugaty fluorochromów są wrażliwe na światło, próbki powinny być chronione przed światłem w czasie procedury barwienia i do czasu analizy. Swoiste ograniczenia Wykazano, że wiązanie przeciwciała monoklonalnego CD34 może być ograniczone przez utrwalacze obecne w płynach lizujących erytrocyty. Sugeruje to uszkodzenie epitopów CD34. Dlatego utrwalacze powinny być używane ostrożnie jeżeli przeciwciało monklonalne jest wykorzystywane do badń ilościowych (7, 8). Dodatkowo zaobserwowano, że koniugaty RPE-Cy5 mogą wiązać się z monocytami tworząc tło (9). Piśmiennictwo 1. Nishio H, Tada J, Hashiyama M, Hirn J, Ingles-Esteve J, Suda T. MC7. CD34 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 974-84. 2. Civin CI, Trischmann TM, Fackler MJ, Bernstein ID, Bühring HJ, Campos L, et al. M7.1. Report on the CD34 cluster workshop. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 818-25. 3. Höffkes H-G, Lowe JA, Pedersen RO, Schmidkte G, McDonald DF. BIRMA-K3, a new monoclonal antibody for CD34 immunophenotyping and stem and progenitor cell assay. J Hematother 1996;5:261-70. 4. Civin CI, Strauss LC, Fackler MJ, Trischmann TM, Wiley JM, Loken MR. Positive stem cell selection basic science. Prog Clin Biol Res 1990;333:387-402. 5. Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility (review). Blood 1996;87:1-13. 6. Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, Devaux Y, Treille D, Larese A, et al. Surface marker expression in adult acute myeloid leukaemia: correlations with initial characteristics, morphology and response to therapy. Br J Haematol 1989;72:161-6. 7. Macey MG, McCarthy DA, van Agthoven A, Newland AC. How should CD34+ cells be analysed? A study of three classes of antibody and five leucocyte preparation procedures. J Immunol Methods 1997;204:175-88. 8. Serke S, van Lessen A, Huhn D. Quantitative fluorescence flow cytometry: a comparison of the three techniques for direct and indirect immunofluorescence. Cytometry 1998;33:179-87. 9. van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61. Objaśnienia symboli (111613-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed silnym światłem (sprawdź w zasadach przechowywania) Producent Sprawdź w instrukcji stosowania Numer serii C 7238/F 7081/R 7125/C 7126/PL/TIA/010702 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17