Monoclonal Mouse Anti-Human CD8, Klon DK25

Monoclonal Mouse Anti-Human CD8, Klon DK25
Nr kat. C 7227
Nr kat. F 0765
Nr kat. R 0806
Nr kat. C 7079
APC-Conjugated
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
RPE-Cy5-Conjugated
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Produkty o nr kat. C 7227, F 0765, R 0806 oraz C 7079 są przeznaczone do stosowania w cytometrii
przepływowej. Pomiar względnej oraz bezwzględnej liczby komórek z dodatnim odczynem CD8 w krwi
obwodowej jest wyjątkowo ważny w ocenie stanu immunologicznego pacjenta (1). Ponadto CD8 posiada
istotną rolę w analizie immunofenotypowej reaktywnych i nowotworowych populacjach komórek T (2).
Interpretację wyników powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta
oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
CD8 jest glikoproteiną transmembranową związaną z dwusiarczkiem o ciężarze cząsteczkowym 68 kDa.
Cząsteczka CD8 służy jako receptor cząsteczek MHC klasy I i może pośredniczyć w funkcji ko-receptora
wiązań ligandów-TCR i aktywacji komórek T. Jej cytoplazmatyczna część jest związana z kinazą tyrozynową
p56lck (1).
Ekspresja CD8 występuje w dużej części tymocytów korowych i około 30% tymocytów rdzeniowych oraz w
klasie I głównego kompleksu zgodności tkankowej ograniczonych, dojrzałych supresorów/cytotoksycznych
komórek T. Ponadto ekspresja CD8 ma miejsce w części limfocytów T oraz komórek NK (1). Zatem
ekspresja CD8 występuje na około 25-35% obwodowych komórek T, a na około 30% komórek NK występują
niskie poziomy ekspresji CD8 (2).
Immunofenotypowanie limfocytów jest szeroko stosowane jako część składowa badań krwi obwodowej w
kierunku diagnozowania upośledzenia odporności, jak np. nabyty zespół upośledzenia odporności (AIDS) (3,4).
Podczas infekcji wirusa cytomegalii odnotowano wzrost odsetka komórek T z dodatnim odczynem CD8 (5).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-CD8, C 7227, F 0765, R 0806 oraz C 7079 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego
przeciwciała monoklonalnego. Koniugaty są dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1%
albuminę surowicy bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL
koniugatu przeznaczone jest dla maksymalnie 106 leukocytów z normalnej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Swoistość
Środki ostrożności
Przeciwcia
ło nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
negatywna nr kat.
F 0765
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
R 0806
RPE (R-Phycoerythrin)
X 0928
C 7079
RPE-Cy5 (R-Phycoerythrin-Cyanine 5)
X 0955
C 7227
APC (Allophycocyanin)
X 0968
Swoistość przeciwciała Anti-CD8, DK25, stanowi równoważnik wobec przeciwciał grupy CD8 OKT8 i Leu-2a
(6).
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na
etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po
wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone.
(107822-002)
C 7227/F 0765/R 0806/C 7079/PL/OKJ/01.07.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4.
4.
Wymieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L przeciwciała przeciw CD8 skoniugowanemu z
fluorochromem.
5.
Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu,
skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz: tabela).
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić komórki w płynie
odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS
o pH 7,4.
8.
Analizować na cytometrze przepływowym.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu
odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na
światło, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili wykonania analizy próbki należy chronić przed
działaniem światła.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
Zaobserwowano, iż koniugaty RPE-Cy5 mogą wiązać się z monocytami, co jest przyczyną
barwienia tła (7).
Piśmiennictwo
1.
Nakauchi H. TC9. CD8 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New
York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 65-7.
2.
Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 1999. p. 55-6.
3.
Watret KC, Whitelaw JA, Froebel KS, Bird AG. Phenotypic characterization of CD8+ T cell populations in
HIV disease and in anti-HIV immunity. Clin Exp Immunol 1993;92:93-9.
4.
Hengel RL, Nicholson JK. An update on the use of flow cytometry in HIV infection and AIDS. Clin Lab
Med 2001;21:841-56.
5.
Collier AC, Meyers JD, Corey L, Murphy VL, Roberts PL, Handsfield HH. Cytomegalovirus infection in
homosexual men. Relationship to sexual practices, antibody to human immunodeficiency virus, and cellmediated immunity. Am J Med 1987;82:593-601.
6.
Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological analysis of human lymphoma: correlation
of histological and immunological categories. Adv Cancer Res 1984;42:67-147.
7.
van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Objaśnienia symboli
(107822-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
C 7227/F 0765/R 0806/C 7079/PL/OKJ/01.07.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17