Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase Clone T311 Nr

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Tyrosinase
Clone T311
Nr kat. M3623
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję tyrozynazy w
tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy uŜyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Wyniki dodatnie
wykorzystuje się w klasyfikacji czerniaka.1,2 Interpretację kliniczną kaŜdego wybarwienia dodatniego lub jego braku naleŜy uzupełnić
badaniami morfologicznymi i histologicznymi z uŜyciem stosownych kontroli. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog,
w oparciu o historię kliniczną pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonim:
T311, EC 1.14.18.1
Streszczenie i informacje ogólne
Tyrozynaza jest glikoproteinowym enzymem miedziowym biorącym udział w produkcji barwników melaninowych, w tym zarówno
eumelaniny, jak i feomelaniny.1,3 W procesie tym tyrozynaza katalizuje hydroksylację L-tyrozyny do L-dopa, a następnie konwersję L-dopa
do L-dopachinonu.1,3 Jako marker pochodzenia melanosomowego, tyrozynaza zlokalizowana jest w melanocytach, które znaleźć moŜna w
połączeniu skórno-naskórkowym zdrowej skóry, ale nie wykrywa się go w innych zdrowych komórkach.2 Melanocyty występują równieŜ w
pigmentowanych częściach oczu, takich jak tęczówka i naczyniówka. Ekspresję tyrozynazy wykryto równieŜ w zmianach barwnikowych, w
tym w łagodnych znamionach oraz większości pierwotnych i przerzutowych czerniaków złośliwych, ale nie w nowotworach niezawierających
melanocytów.2,4,5 Dodatkowo tyrozynaza moŜe zostać rozpoznana przez autologiczne limfocyty cytotoksyczne T od pacjentów z melanomą,
w związku z czym peptydy tyrozyny mają zastosowanie w szczepionkach czerniakowych.6,7
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Nr kat. M3623
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2,
zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: T3111
Izotyp: IgG2a, kappa
StęŜenie mysich lgG [mg/L]: patrz etykieta na fiolce.
Preparat M3623 moŜe być stosowany w rozcieńczeniu 1:100 podczas IHC przy uŜyciu systemu detekcji EnVision™+. Podane informacje
mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stęŜenie przeciwciał moŜe się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania. Optymalne stęŜenie powinno być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium.
Immunogen
Oczyszczony rekombinant białka tyrozynazy bez grup glikozylowych, składający się z 452 aminokwasów z 511 dojrzałej tyrozynazy ludzkiej.1
Swoistość
Przeprowadzono immunobloting z wykorzystaniem komórek fibroblastów mysich (L-cells) transfekowanych genami tyrozynazy i czterech linii
komórkowych wykazujących ekspresję mRNA tyrozynazy: SK-MEL-13, SK-MEL-19, SK-MEL-30 and SK-MEL-37.1 Zgodnie z
wcześniejszymi raportami, klon T311 we wszystkich pięciu liniach rozpoznawał grupę pięciu białek o masie 70–80 kD.1 Dodatkowe pasmo
55 kD oznaczono w rozdziałach linii komórkowych o duŜej reaktywności (SK-MEL-19).1 Co więcej, w badaniach transfekowanych
fibroblastów, wszystkie trzy linie nie wykazujące ekpresji mRNA tyrozynazy (MZ2-MEL3.1, SK-MEL-187 i MZ2-MEL2.2) dały wynik
negatywny z klonem T311.1 Komórki fibroblastów transfekowane oksydazą kwasu dihydroksyindolooctowego (Tyrosinase-related protein 1,
TRP-1, gp75), równieŜ nie wykazywały reakcji z klonem T311 w badaniach techniką immunofluorescencji i immunoblot dowodząc, Ŝe
przeciwciało nie wykazuje reakcji krzyŜowej z oksydazą kwasu dihydroksyindolooctowego (TRP-1, gp75).1
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany
rozcieńczalnik do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent (rozcieńczalnik do przeciwciał) (nr kat. S0809)
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Mouse IgG2a (nr kat. X0943)
(113052-002)
306320PL_001 s. 1/4
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko tyrozynazie moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się
trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze
buforu i utrzymaniu temperatury w łaźni wodnej (95–99 °C). Do HIER mo Ŝna zastosować alternatywne źródła ciepła po zweryfikowaniu
zgodności z procedurą. Zaleca się stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 40 minut w temperaturze 95–99 °C. Po zako ńczeniu
ogrzewania naleŜy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Po
zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do
szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003). Zaleca się stosowanie preparatu Target Retrieval
Solution pH 9.0 (roztworu do odzyskiwania antygenu, nr kat. S2368) lub 10xConcentrate (10x koncentrat, nr kat. S2367).
Skrawki mroŜakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko tyrozynazie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mroŜakowych lub utrwalonych
rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według procedury, stosownie do wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko tyrozynie dają reakcję cytoplazmatyczną i/lub okołojądrową.
Charakterystyka wydajnościowa
Tkanki zdrowe2
Przy pomocy technik immunocytochemicznych przetestowano z przeciwciałem przeciw tyrozynazie, klon T311 panel 33 zdrowych tkanek i
tylko skóra wykazała dodatnią reakcję.2 W zdrowej skórze immunoreaktywne były melanocyty, natomiast podstawowe keratynocyty skóry nie
wykazały reakcji.1,2
Rodzaj tkanki
Przydatek
Gruczoł sutkowy
Przełyk
Nerki
Wątroba
Gruczoł krokowy
Pęcherz moczowy
Ślinianki
Śledziona
Migdałki
Nadnercze
Szpik kostny
Węzły chłonne
OkręŜnica
Serce
Płuca
Trzustka
Nerwy obwodowe
Mięśnie szkieletowe
Skóra
Pęcherzyk Ŝółciowy
Jelito cienkie
śołądek
(113052-002)
Składniki komórkowe dające odczyn dodatni
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
melanocyty
0
0
0
306320PL_001 s. 2/4
Jądra
Powrózek nasienny
Grasica
Tarczyca
Przytarczyce
Jajniki
Jajowody
ŁoŜysko
Macica
Pochwa
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Tkanki nieprawidłowe2
Klon T311 przetestowano na łagodnych i złośliwych zmianach barwnikowych i zaobserwowano powstawanie odczynu w większości
zbadanych łagodnych znamion i czerniaków. Niską immunoreaktywność tyrozynazy stwierdzono w czerniakach komórek
desmoplastycznych i wrzecionowatokomórkowych.1,2,4,5 Swoistość przeciwciał przeciw tyrozynazie w zmianach barwnikowych została
udokumentowana przez odczyny immunologiczne ponad 70 nie-czerniakowych odmian nowotworów w których nie zaobserwowano
immunoreaktywności co wskazuje, Ŝe ekspresja tyrozynazy ograniczona jest do komórek linii melanocytarnych.2
Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków)
Przerzutowe czerniaki złośliwe (70)
Przerzutowe czerniaki złośliwe komórek
desmoplastycznych/wrzecionowatokomórkowe (5)
Pierwotne czerniaki złośliwe (9)
Pierwotne czerniaki złośliwe typu desmoplastycznego (8)
Pierwotne czerniaki złośliwe typu wrzecionowatokomórkowego (2)
Pierwotne czerniaki złośliwe o cechach
wrzecionowatokomórkowych (1)
Łagodne znamiona barwnikowe (20)
Kłębczak (4)
Naczyniak pericytarny (4)
Samotne guzy włókniste (4)
Nerwiaki (4)
Nerwiakowłókniaki (4)
Złośliwe guzy otoczki nerwu obwodowego (4)
Mięsaki nabłonkowate (4)
Mięsaki maziówki (4)
Guzowaty włókniakomięsak skóry (4)
Złośliwy guz włóknisty z histiocytów (4)
Rak gruczołowy płuc (4)
Rak gruczołowy Ŝołądka (4)
Rak gruczołowy jelita grubego (4)
Rak gruczołowy trzustki (4)
Rak gruczołowy trzonu macicy (4)
Rak gruczołowy jajników (surowiczy brodawkowaty) (4)
Rak gruczołowy jajników (śluzuwkowy) (4)
Rak gruczołowy jajników (śluzowaty) (4)
Rak gruczołowy gruczołu krokowego (4)
Rak tarczycy (pęcherzykowaty) (4)
Rak tarczycy (brodawkowaty) (4)
Rak tarczycy (komórek Hürthle’a) (4)
Rak tarczycy (anaplastyczny) (4)
Rak tarczycy (rdzeniowy) (4)
Rak przytarczycy (4)
Rak komórek wysp trzustkowych (4)
Gruczolak przysadki (4)
Gruczolak kory nadnerczy (4)
Rak kory nadnerczy (4)
Nowotwory komórek ziarnistych (4)
Guz komórek Leydiga (jądra) (4)
Guz komórek Sertoli-Leydiga (jajniki) (4)
Mięsak naczyniowy (4)
Guzy wielkokomórkowe tkanek miękkich (4)
Łagodne nowotwory mieszane (ślinianki przyuszne) (4)
Guz chromochłonny nadnerczy (3)
Mięśniak gładkokomórkowy, macica (4)
Mięsak gładkokomórkowy, macica (4)
Mięsak gładkokomórkowy, tkanki miękkie (4)
Guzy stromalne przewodu pokarmowego (GIST) (4)
Mięsak pęcherzykowaty (4)
(113052-002)
Nowotwory z odczynem dodatnim
63/70
0/5
8/9
1/8
0/2
1/1
20/20
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
1/4 słaba reaktywność ogniskowa w
mucynie
0/4
1/4 słaba reaktywność ogniskowa z
mucyną
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/3
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
306320PL_001 s. 3/4
Włókniakowatość (4)
Struniak (4)
Chrzęstniakomięsak (4)
Kostniakomięsak (4)
Chłoniak typu grudkowego (4)
Chłoniak z duŜych komórek (4)
Chłoniak obwodowych limfocytów T (4)
Chłoniak anaplastyczny z duŜych komórek (4)
Chłoniak Burkitta (4)
Chłoniak ziarniczy z przewagą limfocytów (4)
Chłoniak ziarniczy z przerostem miąŜszu (4)
Chłoniak Ŝołądka typu MALT (4)
Szpiczak/szpiczak mnogi (4)
Białaczka włochatokomórkowa (4)
Mięśniakomięsak zarodkowy (4)
Mięśniakomięsak pęcherzykowaty (4)
Mięsak Ewinga/PNET (4)
Desmoplastyczny nowotwór drobnokomórkowy (4)
Chłoniak limfoblastyczny (4)
Nowotwór rhabdoidny (rhabdoid) (4)
Nerwiak niedojrzały (4)
Kostniakomięsak (4)
Guz Wilmsa (4)
Wątrobiak zarodkowy (4)
Rak przewodowy sutka (4)
Rak zrazikowy sutka (4)
rak komórek nabłonka przejściowego (4)
Rak płaskonabłonkowy płuc (4)
Rak płaskonabłonkowy tkanek głowy i szyi (4)
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy (4)
Rak z komórek wątrobowych (4)
Międzybłoniak (4)
Rak ślinianek (4)
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
0/4
Piśmiennictwo
1. Chen YT, Stockert E, Tsang S, Coplan KA, Old LJ. Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase: implications for vaccine
development. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92(18):8125-9
2. Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Kolb D, Stockert E, Chen YT, Old LJ, Busam K. T311-an anti-tyrosinase monoclonal antibody for
the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues. Pathol Res Pract 2000;196(4):235-42
3. Garcia-Borron JC, Solano F. Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins: beyond the histidine-bound metal catalytic
center. Pigment Cell Res 2002;15(3):162-73
4. Clarkson KS, Sturdgess IC, Molyneux AJ. The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic
lesions: a comparison of the novel T311 antibody (anti-tyrosinase) with S-100, HMB45, and A103 (anti-melan-A). J Clin Pathol
2001;54(3):196-200
5. Hofbauer GF, Kamarashev J, Geertsen R, Boni R, Dummer R. Tyrosinase immunoreactivity in formalin-fixed, paraffin-embedded
primary and metastatic melanoma: frequency and distribution. J Cutan Pathol 1998;25(4):204-9
6. Slingluff CL Jr, Petroni GR, Yamshchikov GV, Barnd DL, Eastham S, Galavotti H, Patterson JW, Deacon DH, Hibbitts S, Teates D,
Neese PY, Grosh WW, Chianese-Bullock KA, Woodson EM, Wiernasz CJ, Merrill P, Gibson J, Ross M, Engelhard VH. Clinical and
immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocytemacrophage colony-stimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells. J Clin Oncol 2003;21(21):4016-26
7. Zajac P, Oertli D, Marti W, Adamina M, Bolli M, Guller U, Noppen C, Padovan E, Schultz-Thater E, Heberer M, Spagnoli G. Phase I/II
clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA-A0201-restricted tumor-associated epitopes and costimulatory
molecules in metastatic melanoma patients. Hum Gene Ther 2003;14(16):1497-1510
Edition 06/07
(113052-002)
306320PL_001 s. 4/4