INSTRUKCJAWYKONANIA Ć WICZENIA nr 2 NISZCZENIE

INSTRUKCJA
WYKONANIA
Ć W I C Z E N I A nr 2
NISZCZENIE MIKROORGANIZMÓW
Zad.1
Cel: Porównanie skuteczności jednorazowej obróbki termicznej w parze bieżącej i w parze nasyconej
pod ciśnieniem
Materiały:
1. Statyw z dwoma probówkami zawierającymi po 5 ml, jałowego bulionu odżywczego każda
2. pipeta automatyczna i jałowe końcówki
3. Dermatograf
4. Skalpel
5. Przyprawa ziołowa
Wykonanie:
1. Probówki zawierające jałowy bulion odżywczy oznaczyć numerem stanowiska i grupy oraz
symbolem K i A
2. Do oznaczonych probówek przenieść jałowym skalpelem po ok. 0,2 g przyprawy
3. Probówki oznakowane K i A poddać działaniu odpowiedniego czynnika termicznego (patrz:
tabela 1)
4. Poddane obróbce termicznej probówki oznakowane K i A ustawić w statywie obok probówki
kontrolnej; całość inkubować w 37OC/24h-48oC
5. Dokonać odczytu wyników i zapisać je w Tabeli 1 przyjmując następującą zasadę
brak wzrostu (klarowne podłoże) = ( - )
wzrost (widoczne zmętnienie całego podłoża lub wzrost w formie kożuszka na powierzchni
podłoża) = ( + )
6. Dokonać oceny skuteczności porównywanych metod obróbki termicznej.
Tab.1. Wyniki inkubacji posiewów materiału poddanego lub nie poddanego działaniu określonej
obróbki termicznej
Wynik inkubacji
Oznakowanie próby
Działający czynnik
Urządzenie
posiewów
St 1K
St 1A
St 2K
St 2A
St 3K
St 3A
St 4 K
St 4A
St 5K
St 5A
Próba kontrolna
100o C / 15 min.
121o C / 15 min 100o C / 15 min.
121o C / 15 min 100o C / 15 min.
121o C / 15 min 100o C / 15min.
121o C / 15 min 100o C / 15 min.
121o C / 15 min -
aparat Kocha
autoklaw
aparat Kocha
autoklaw
aparat Kocha
autoklaw
aparat Kocha
autoklaw
aparat Kocha
autoklaw
-
Wnioski:
Data ....................
zaliczenie ....................
Zad. 2
Cel: Ocena skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje.
Materiały:
1. Probówka z 24h hodowlą Seratia marcescens na bulionie odżywczym
2. Płytki z agarem odżywczym (AO)
3. Pipeta automatyczna i jałowe końcówki
4. Jałowe wymazówki
5. Dermatograf
Wykonanie:
1. Przenieść po 0,1 ml hodowli bulionowej Seratia marcescens na płytkę z AO
2. Rozprowadzić materiał po powierzchni podłoża jałową wymazówką.
3. Oznakować płytki w sposób pozwalający na identyfikację
4. Płytki ustawić na stole w odległości ~ 1m od źródła promieni UV.
5. Zsunąć wieczka płytek w sposób pozwalający na bezpośrednie działanie promieni UV,
6. Płytki z posianym szczep doświadczalnym eksponować na działanie promieni UV przez 1, 3, 5, 10
i 15 min
7. Po każdym interwale czasowym ekspozycji płytki oznaczyć dodatkowo, odpowiednio 1,3,5,10,15,
co odpowiada czasowi ekspozycji każdej z płytek
8. Płytki inkubować w 37OC/24h
9. Określić skuteczność bakteriobójczą różnych czasów ekspozycji na działanie promieni UV
• brak wzrostu na eksponowanej części płytki = proces skuteczny = ( + )
• wzrost na eksponowanej części płytki = proces nieskuteczny = ( - )
• wzrost
mniej
intensywny
na
eksponowanej
części
płytki
w
porównaniu
z częścią osłoniętą = redukcja liczby skuteczność częściowa = ( +/- )
Tab. 2 Skuteczność bakteriobójcza określonego czasu ekspozycji na działanie promieni UV (260 nm)
Czas ekspozycji w min.
próba kontrolna
1
3
5
10
15
Serratia marcescens
Wnioski:
Data ....................
zaliczenie ....................
Zad. 3
Cel: Skuteczność wyjaławiania przy pomocy filtrów membranowych.
Materiały:
1. Probówka typu Eppendorf z 24h hodowlą Escherichia coli na bulionie odżywczym
2. Wirówka laboratoryjna
3. Płytki z agarem odżywczym (AO)
4. Jałowa strzykawka 20 mL,
5. Filtr strzykawkowy Millex GV 0,22 µm
6. Jałowe bagietki
7. Dermatograf
Wykonanie:
1. Próbówkę typu Eppendorf zwirować w wirówce (8000 obr/3min)
2. Do strzykawki pobrać supernatant.
3. Oznakować płytkę w sposób pozwalający na identyfikację
4. Przez filtr strzykawkowy przepuścić 0,1 mL supernatantu na płytkę.
5. Jałową bagietką rozprowadzić próbę po powierzchni płytki,
6. Płytki inkubować w 37OC/24h
7. Określić skuteczność wyjaławiania przy pomocy filtrów membranowych
a. brak wzrostu na eksponowanej części płytki = proces skuteczny = ( + )
b. wzrost na eksponowanej części płytki = proces nieskuteczny = ( - )
Wnioski:
Data ....................
zaliczenie ....................