pobierz

Zadanie 3.1.
Monitoring zmian zdolności chorobotwórczych populacji
organizmów szkodliwych i kwarantannowych ziemniaka
Cel 3.1.1
Analiza zmian w populacjach waŜniejszych patogenów
ziemniaka dla potrzeb prowadzenia hodowli odpornościowej
oraz produkcji
Ewa Zimnoch-Guzowska, Jadwiga Śliwka, , Sylwester Sobkowiak,
Renata Lebecka, Zhimin Yin, Krystyna Michalak, Anna Grupa
IHAR-PIB Radzików, 2015.12.18
1. Zbieranie i izolację sprawcy zarazy ziemniaka – Phytophthora
infestans z różnych miejscowości na terenie Polski, włączanie
wybranych izolatów do kolekcji (współpraca z COBORU)
• Niechronione pola w 8 lokalizacjach
• 10 odmian: Altesse, Denar, Jelly, Kuras, Malaga,
Mondeo, Riviera, Tajfun, Vineta, Zuzanna
• 3 powtórzenia, 3 listki, Suma: 720 izolatów
Lokalizacja
Liczba prób
Objawy w
bulwach
KarŜniczka
20
0
Wrócikowo
32
1
Przecław
92
18 (7)
Węgrzce
28
8 (5)
Uhnin
80
0
Sulejów
5
0
Bobrowniki
40
0
Łącznie
297
27
•Uzyskano: 12 czystych kultur
P. infestans (+1 z Boguchwały),
•10 izolatów włączono do kolekcji
Charakterystyka izolatów P. infestans pod względem wirulencji
względem testerów Black’a i potencjalnych źródeł odporności, test
listkowy, 55 izolatów z roku 2014, 6600 testów
Odmiany:
Craigs
Royal
Tarpan
poraŜone
przez
wszystkie
izolaty
Charakterystyka izolatów P. infestans pod względem innych cech, 84
izolaty z roku 2014
Utrzymywanie kolekcji P. infestans
•
•
•
•
•
Aktualny stan: 1010 izolatów (67 zagranicznych i 943 polskich)
968 izolatów jest przechowywanych w ciekłym azocie
19 zamroŜono w ciekłym azocie
Z ciekłego azotu wyjęto i namnoŜono do róŜnych celów 72 izolaty
Zaktualizowano dane izolatów dostępnych online na stronie IHAR-PIB,
07.12.15:
http://www.ihar.edu.pl/zaklad_genetyki_i_materialow_wyjsciowych_ziemnia
ka.php?panel=1#Pracownia Patogenów Ziemniaka
2. Utrzymywanie reprezentatywnej kolekcji roboczej
bakterii z rodzaju Pectobacterium i Dickeya w stanie
zamroŜenia i jej wzbogacanie o nowe wirulentne izolaty
50 izolatów bakterii zregenerowano i zamroŜono w dwóch kopiach
(T - 35oC, - 80oC).
Kolekcja została wzbogacona o cztery izolaty:
Pectobacterium wasabiae, IHAR Denar1/1/2013,
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, IHAR Ewelina
1/1/2013,
Pectobacterium atrosepticum , IHAR Oberon 1/1/2014
Pectobacterium atrosepticum , IHAR Bard 1/1/2014
3. Badanie wirulencji izolatów Dickeya solani i dobór izolatów
do oceny odporności ziemniaka w latach 2016-2017
Masa zgniłej tkanki bulwy [G] po inokulacji
bakteriami - inkubacja 3 dni w T 26oC.
c.d. badanie wirulencji izolatów bakterii pektynolitycznych
ziemniaka
4. Charakterystyka patogeniczności nowych izolatów PVM i
PVY. Ocena reakcji odmian ziemniaka na izolaty PVM, oraz
szczepy PVY
•
10 izolatów PVY testowano na trzech odmianach ziemniaka rekomendowanych przez
Singh`a: King Edward, Desiree, Pentland Ivory, na odmianie Nicola oraz dwóch
polskich odmianach Etola i Gwiazda i na tytoniu odm. Samsun
•
Na podstawie reakcji trzech odmian King Edward, Desiree, Pentland Ivory oraz reakcji
tytoniu izolaty zaliczono do grup:
– 3 izolaty PVYE (podatność na zakażenie odmian oraz
brak nekroz na liściach tytoniu)
– 7 izolatów PVYN (podatność na zakażenie odmian oraz
nekrozy nerwów na tytoniu)
– 6 izolatów wywoływało objawy choroby PTNRD na bulwach odmian Nicola,
Desiree, Pentland Ivory, Etola, Gwiazda
– 1 izolat
należący do serotypu N nie poraził odmian Etola i Gwiazda, natomiast
poraził 3 odmiany rekomendowane przez Singh`a
Objawy poraŜenia roślin ziemniaka i tytoniu po
zakaŜeniu róŜnymi izolatami PVY (2015)
HR
VCL
MO,DEF
VN
ST
PTNRD
D
10
4. Charakterystyka patogeniczności nowych izolatów PVM
Scharakteryzowano patogeniczność 36 izolatów PVM na roślinach
testowych:
Chenopodium quinoa,
Datura metel,
Gomphrena globosa,
Lycopersicon chilense,
Solanum lycopersicum (pomidor, odm. Najwcześniejszy),
S. rostratum,
1. Izolaty PVM wykazały duŜe zróŜnicowanie biologiczne.
2. Stwierdzono pozytywną reakcję wszystkich ocenianych izolatów
wirusa z przeciwciałami przeciwko PVM.
Rośliny Datura metel (10 dni po inokulacji PVM)
kontrola
S-1
I-64
I-38
Rośliny Lycopersicon chilense (18 dni po inokulacji PVM)
K-1
kontrola
S-1
4. cd. Ocena reakcji odmian ziemniaka na izolaty PVM i PVY
Oceniono reakcję 5 odmian ziemniaka (po 20 roślin) na inokulację
silnym szczepem PVM (Uran).
Odm.: Bogatka i Malaga, nie podległy infekcji,
Odm.: Honorata i Jurata, średnia reakcja,
Odm. Jubilat (80% silne objawy).
Oceniono reakcję 5 odmian ziemniaka na zakaŜenie dwoma szczepami
nekrotycznymi PVY: PVYNW i PVYNTN.
Odm.: Honorata, Jubilat, Kaszub, Lascara – podatne na oba szczepy
(reagowały mozaiką o róŜnym nasileniu, nekrozy na łodygach
zaobserwowano tylko u odmiany Honorata po zakaŜeniu PVYNTN)
Odm. Malaga – odporna na oba szczepy.
5. Prowadzenie kolekcji izolatów wirusów ziemniaka w
roślinach ziemniaka pod indywidualnymi izolatorami
oraz w szklarni, w liofilizatach, -20oC i roślinach in vitro
Utrzymywana była:
kolekcja wirusów ziemniaka w roślinach pod indywidualnymi
izolatorami w polu: PVY, PVX, PLRV, PVM, PVS, TRV, PVA, AMV,
PAMV, TBRV, CMV, BMYV, PSTVd – 43 obiekty
kolekcja szczepów PVY, PVM, PVS, PLRV w roślinach w szklarni – 220
obiektów
kolekcja wirusów w roślinach in vitro: PVA, PVY – 10 obiektów
kolekcja wirusów w liofilizatach – 100 obiektów
kolekcja roślin testowych do wykrywania wirusów w testach
biologicznych:
Nicotiana tabacum odm. Samsun, Nicotiana clevelandi,
Nicotiana benthamiana, Datura stramonium,
Datura metel, L. esculentum odm. Najwcześniejszy
ZEBRANO do zamroŜenia (-25oC; -80oC) do zliofilizowania
220 izolatów (600 próbek)
WIRUS
Liczba
PVY
119
PVM
13
PVS
33
PLRV
12
TRV, PVA, AMV, PAMV, TBRV, CMV, BMYV
43
Razem izolatów
220
6. Udostępnianie patogenów ziemniaka odbiorcom zewnętrznym zgodnie
z zapotrzebowaniem
Udostępniono 17 izolatów P. infestans i 9 izolatów Pectobacterium
Cel 3.1.2.
Śledzenie zmian wirulencji patotypów w populacji grzyba
Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. oraz w populacjach nicieni
(G. rostochiensis, G. pallida) na terenie Polski
1.Utrzymywanie i namnaŜanie stałej, wzorcowej kolekcji patotypów grzyba S.
endobioticum.
2.Utrzymywanie i rozmnaŜanie odmian róŜnicujących ziemniaka do identyfikacji
patotypów S. endobioticum oraz odmian krańcowo podatnych do namnaŜania narośli
rakowych S. endobioticum.
3.Pozyskiwanie z WIORiN prób gleby i poraŜonych rakiem roślin ziemniaka,
namnaŜanie i utrzymanie izolatów S. endobioticum w postaci narośli rakowych;
identyfikacja izolatów S. endobioticum.
4.Ocena odporności odmian ziemniaka na wirulentne patotypy S. endobioticum (do
10 odmian).
cd. Cel 3.1.2.
5. Pozyskiwanie gleby zasiedlonej cystami mątwika o niezidentyfikowanym
patotypie mątwika od WIORiN z terenów Polski, na których wykryte zostały
nowe ogniska choroby. Przygotowanie prób gleby do dalszych analiz,
namnaŜanie oraz identyfikacja patotypu z wykorzystaniem róŜnicujących
genotypów ziemniaka zgodnie z procedurą Kort’a.
6. Przekazywanie certyfikatów potwierdzających identyfikację patotypu po
zakończeniu badań inspektorom PIORiN oraz stronie przekazującej materiały
do badań.
7. NamnaŜanie bulw odmian i genotypów ziemniaka róŜnicujących patotypy
mątwika oraz prowadzenie kolekcji zidentyfikowanych patotypów mątwika.
8. Opracowanie wyników, w tym uaktualnianie mapy występowania patotypów
mątwików na terenie kraju.
Reakcja odmian róŜnicujących na patotypy i izolaty
S. endobioticum
Synchytrium endobioticum
Patotypy wzorcowe
Odmiany róŜnicujące
Izolaty
1(D1) 2(Ch1) 3(M1) 18(T1) 39(P1) #1/13 #2/13 #3/13
Deodara / Tomensa / Eersteling
+
+
+
+
+
+
+
+
Producent / Combi / Irga / Talent
Delcora / Desiree
-
+
+
+
+
+
+
+
-
+
-
+
+
±
+
-
Miriam
Karolin
Ulme / Gawin / Saphir
-
±
-
-
+
-
+
±
-
±
-
±
-
-
Asche Sämling
+
+
+
Sissi
+
Bałtyk
+
+
Giewont
+
+
+
Universal
+
+
+
Blanik
+
Nicola
+
+ - reakcja pozytywna (widoczne duŜe narośla rakowe po 4 tyg. inkubacji),
± - reakcja pośrednia (proliferacja jest znacznie słabsza, widoczne są równieŜ liczne nekrozy),
- - reakcje negatywna (brak proliferacji),
+
-
-
Reakcja odm. Asche Sämling na testowane izolaty
S. endobioticum
#1/1
3
#2/1
3
#3/1
3
Izolat #3/13 reaguje identycznie jak patotyp 3(M1).
Izolat #1/13 moŜe naleŜeć do patotypu 4(P1) lub 5(K1).
Reakcja odm. Otolia na polskie patotypy S. endobioticum
2(Ch1)
3(M1)
18(T1)
39(P1)
Odmiana Otolia reaguje krańcową odpornością na w/w patotypy.
Identyfikacja patotypów mątwika (Kort,1977)
Odporność na patotyp
Forma ziemniaka
Ro1
Ro2
Ro3
Ro4
Ro5
Pa1 Pa2
Pa3
Odmiana Desiree
+
+
+
+
+
+
+
+
Odmiana Maris Piper
-
+
+
-
+
+
+
+
S. kurtzianum hybr.60.21.19
-
-
+
+
+
+
+
+
S. vernei hybr. 58.1642/4
-
-
-
+
+
+
+
+
S. vernei hybr.62.33.3
-
-
-
-
+
-
-
+
S. vernei hybr. 65.346/19
-
-
-
-
-
+
+
+
S. multidissectum hybr. P55/7
+
+
+
+
+
-
+
+
Prowadzenie hodowli genotypów
ziemniaka poraŜonych cystami nieznanego
patotypu mątwika
Uaktualniona mapa występowania patotypów mątwika
Kolor czerwony
Kolor Ŝółty
Kolor pomarańczowy
Kolor zielony
- patotyp Ro1 G. rostochiensis
- patotyp Ro5 G. rostochiensis
- patotypy Ro1 i Ro5 G. rostochiensis
- patotyp Ro1 G. rostochiensis
-
identyfikacja w latach 2008-2013.
identyfikacja w latach 2008-2013.
identyfikacja w latach 2008-2013.
identyfikacja w roku 2015.
Wymierne rezultaty realizacji celu 3.1.2
• Utrzymano kolekcję patotypów S. endobioticum z regionu EPPO i Polski i
odmian ziemniaka do róŜnicowania patotypów
• Wśród badanych izolatów sprawcy raka ziemniaka zidentyfikowano 3
patotypy S. endobioticum.
• WyróŜniono odmianę Otolia, która charakteryzuje się krańcową
odpornością na polskie patotypy S. endobioticum.
• Wśród badanych izolatów mątwika ziemniaczanego zidentyfikowano
patotyp Ro1.
• Wykonano 10 analiz mikologicznych i oznaczeń do gatunku.
• Wykonano 1270 testów charakteryzujących chorobotwórczość izolatów S.
endobioticum i Globodera sp.
• Zgromadzono w kolekcji roboczej 120 izolatów i ras/patotypów S.
endobioticum, G. rostochiensis i G. pallida.
• Opublikowano 4 raporty o identyfikacji patotypów i odporności odmian
na wirulentne patotypy raka ziemniaka. Wyniki identyfikacji patotypów S.
endobioticum, G. rostochiensis i G. pallida przekazano do PIORiN i
COBORU
Cel 3.1.3
Monitorowanie i ocena zmian w populacjach najważniejszych
gospodarczo patogenów pochodzenia wirusowego i grzybowego
oraz szkodników na potrzeby zrównoważonej i efektywnej
ochrony ziemniaka
Sławomir Wróbel, Józefa Kapsa
Zakład Nasiennictwa i Ochrony Ziemniaka w Boninie
1. Ustalenie punktów badawczych w rejonach największej
koncentracji produkcji ziemniaka w Polsce
Rumsko
Sławutówko
Karwno
Bonin
Szymankowo
Mechowo
Partnerami w realizacji celu 3, byli producenci
ziemniaka w wybranych miejscowościach:
Bonin (punkt własny w Zakładzie Nasiennictwa i Ochrony
Ziemniaka IHAR-PIB),
Karwno (gospodarstwo indywidualne),
Mechowo (gospodarstwo indywidualne),
Rumsko (Grupa Producentów Rolnych „NATURA” Sp. z o.o.),
Sławutówko (gospodarstwo indywidualne),
Szymankowo (Agriana Sp. z o.o.),
2. Monitoring mszyc (wektorów wirusów) w północnych rejonach
kraju na podstawie ich odłowów do żółtych naczyń i
identyfikacja gatunków
Terminy odłowu pierwszych mszyc
Bonin
Karwno
Mechowo
Rumsko
Sławutówko
Szymankowo
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
Maj
Czerwiec
Myzus persicae
Aphis nasturtii
Lipiec
Aphis fabae - mszyca nieziemniaczana
Odłowy mszyc prowadzono na plantacjach towarowych ziemniaka, z wyjątkiem Bonina, gdzie
Ŝółte szalki były ustawione na czarnym ugorze w łanie ziemniaków (poletko mszycowe).
Monitoring prowadzono w okresie od maja do końca sierpnia. Oznaczone ilości i gatunki mszyc
publikowano na bieŜąco na stronie http://ziemniak-bonin.pl w zakładce Monitoring.
2. Monitoring mszyc (wektorów wirusów) w północnych rejonach
kraju na podstawie ich odłowów do żółtych naczyń i
identyfikacja gatunków
Liczebności odłowionych mszyc w sezonie wegetacyjnym w
poszczególnych miejscowościach
400
Suma mszyc [szt]
350
300
250
200
150
100
50
0
Bonin
Karwno
Myzus persicae
Mechowo
Sławutówko
Aphis nasturtii
Szymankowo
Aphis fabae
Wodzierady
3. Monitorowanie terminów występowania, określanie presji infekcyjnej
grzybów (Alternaria sp., Phytophthora infestans) w uprawach ziemniaka w
wybranych lokalizacjach na terenie Polski północnej
Występowanie pierwszych infekcji zarazowych na
wybranych plantacjach ziemniaka w Polsce
Województwo
Gmina
Miejscowość
Odmiana
BBCH
Termin
wystąpienia
Łódzkie
Wróblew
ORACZEW
Gala
65
23.06.2015
Mazowieckie
Ostrów
Mazowiecka
JASIENICA
Rudawa
62
25.06.2015
Wielkopolskie
Kórnik
PIERZCHNO
Lady Rosetta
72
20.07.2015
BONIN
Irga
70
15.07.2015
Zachodniopomorskie
Manowo
MIERZYM
Irga
72
22.07.2015
3. Monitorowanie terminów występowania, określanie presji infekcyjnej grzybów
(Alternaria sp., Phytophthora infestans) w uprawach ziemniaka w wybranych
lokalizacjach na terenie Polski północnej
Na podstawie wyników obserwacji rozwoju patogenów na poletkach doświadczalnych
w Boninie i Mierzymiu moŜna stwierdzić, Ŝe: w rejonie Polski płn. presja infekcyjna grzybów z rodzaju
Alternaria oraz sprawcy zarazy ziemniaka Phytophthora inestans
nie była wysoka w sezonie 2015 (tab.).
Poziom presji infekcyjnej sprawcy zarazy ziemniaka w sezonie 2015
Patogen
Data wystąpienia
choroby
rAUDPC
Wielkość
zniszczenia %
BONIN
02.07.2015
0,1601
67,5
MIERZYM
29.06.2015
0,2466
70,0
BONIN
15.07.2015
0,1895
65,0
MIERZYM
22.07.2015
0,1989
60,1
Miejscowość
Alternaria spp.
Phytophthora
infestans
Sucha plamistość liści - sprawca Alternaria solani Sorauer (syn. Macrosporium solani /ELL. et Mart./.
Choroba pojawia się w końcu czerwca lub na początku lipca.
Gatunki grzyba Alternaria, sprawcy alternariozy
Brunatna plamistość liści - sprawca Alternaria alternata (Fr) Keissler (syn. A. tenuis Nees). Choroba
pojawia się w okresie kwitnienia (skala BBCH fazy 50 - 69).
4. Analiza składu gatunkowego grzybów z rodzaju Alternaria z poraŜonego
materiału roślinnego pozyskanego z Polski północnej, próba zastosowania
nowych technik w róŜnicowaniu gatunku grzyba, izolacje wybranych patogenów
(Alternaria sp., Phytophthora infestans) do kolekcji roboczych
• Zbiór izolatów z 3 wybranych odmian (Miłek, Irga , Kuras) do oceny składu gatunkowego
sprawców alternariozy przeprowadzono w terminie od 29. 06. 2015 do 14. 09. 2015. Badania
prowadzono w odstępach 7-dn.
• Z zebranego materiału z objawami choroby zgromadzono izolaty gat. Alternaria alternata i
Alternaria solani. Ocena składu gatunkowego przeprowadzona na podstawie oceny
mikroskopowej zarodników i wstępnie met. PCR. Potwierdzenie metodą PCR zostanie
wykonana w terminie późniejszym (I–III. 2016).
• Ogółem zebrano 37 izolatów grzyba z rodzaju Alternaria: 25 izolatów A. alternata i
12 izolatów A. solani.
• Z poletek doświadczalnych w 2015, zebrano i oczyszczono do kolekcji roboczych:
6 izolatów Ph. infestans i
2 izolaty Helminthosporium solani .
4. Analiza składu gatunkowego grzybów z rodzaju Alternaria z poraŜonego
materiału roślinnego pozyskanego z Polski północnej, próba zastosowania
nowych technik w róŜnicowaniu gatunku grzyba, izolacje wybranych patogenów
(Alternaria sp., Phytophthora infestans) do kolekcji roboczych
ZróŜnicowanie gatunkowe grzybów z rodzaju Alternaria w sezonie wegetacyjnym 2015
Terminy wystąpienia alternariozy w sezonie 2015
Odmiany
29.06.
06.07.
13.07.
20.07.
27.07.
03.08.
10.08.
17.08.
24.08.
31.08.
AA
AA
AA
AA
AA
AA+AS
AA+AS
AA+AS
AA+AS
AA+AS
Irga
-
-
AA
AA
AA
AA
AA
AA+AS
AA+AS
AA+AS
Kuras
-
-
-
-
AA
AA
AA+AS
AA+AS
AA+AS
AS
Miłek
07.09.
14.09.
BRAK izolatów,
naturalne
zniszczenie roślin
AA+AS
AA+AS
AA- Alternaria alternata, AS- Alternaria solani
5. Cząstkowy raport do europejskiej sieci monitorowania zmian w populacjach sprawców
zarazy ziemniaka i alternariozy (Euroblight) podsumowanie i analiza stopnia realizacji
celów cząstkowych, opracowanie raportu oraz upowszechnianie uzyskanych wyników
Cząstkowy raport do europejskiej sieci monitorowania zmian w populacjach sprawców
zarazy ziemniaka i alternariozy (Euroblight) z Polski został przygotowany i zostanie
wykorzystany przez osoby odpowiedzialne za tworzenie europejskiego raportu zbiorczego
(J.G. Hansen – Dania) wraz z wynikami z innych krajów w roku 2016, podobnie jak
wcześniejsze raporty, np raport z lat 2013-2014
(www.euroblight.net.fileadmin/euroblight/workshops/Brasov/PPT/Hansen_01.pdf)
Ocena zagroŜenia występowania alternariozy i zarazy na plantacjach ziemniaka w Polsce w sezonie 2015
Nasilenie choroby w ciągu sezonu wegetacyjnego 2015
Choroba
maj
czerwiec
lipiec
sierpień
wrzesień
brak zagroŜenia
zagroŜenie
średnie
duŜe zagroŜenie
alternarioza
zaraza
ziemniaka
Cel 3.1.4
Optymalizacja metod zwalczania i ocena chorobotwórczości
Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus na terenie Polski
1. pozyskiwanie z Wojewódzkich Inspektoratów Ochrony Roślin izolatów Clavibacter michiganensis
subsp. sepedonicus (Cms)
2. przeprowadzenie doświadczenie mikropoletkowego z wykorzystaniem róŜnych profili glebowych,
monitorowanych pod względem temperatury i wilgotności. Ocena wpływu tych czynników na
poziom poraŜenia bulw potomnych ziemniaków sztucznie zakaŜanych wybranymi szczepami Cms,
3. izolację Ŝywych komórek bakteryjnych z badanego materiału mikropoletkowego na poŜywki
półselektywne MNTA i NCP-88 oraz poŜywki wzrostowe YGM,
4. prowadzenie testów immunologicznych IF z uŜyciem przeciwciał poliklonalnych i monoklonalnych
w celu diagnostyki poraŜenia przez Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus materiałów z
doświadczenia mikropoletkowego,
5. przeprowadzenie w fitotronie oceny chorobotwórczości na roślinie bioindykatorowej (bakłaŜan) z
zastosowaniem inokulum sporządzonego z pozyskanych izolatów Cms zgodnie z obowiązującą
procedurą EPPO,
6. opracowanie metody badań skuteczności działania bakteriobójczego środków dezynfekcyjnych,
zastosowanych na powierzchnie sztucznie zakaŜone zawiesiną szczepów Cms,
7. aktualizację broszury dla rolników dotycząca integrowanej produkcji ziemniaka w zakresie Cms.
1.
Z
siedmiu
Wojewódzkich
Laboratoriów Państwowej Inspekcji
Ochrony
Roślin
i
Nasiennictwa
pozyskano po pięć ekstraktów z bulw
ziemniaka, poraŜonych latentnie przez
Clavibacter
michiganensis
ssp.
sepedonicus
(Cms),
razem
35
ekstraktów.
L.p
Nazwa ekstraktu z
bulw ziemniaka
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
Koszalin 1
Koszalin 2
Koszalin 3
Koszalin 4
Koszalin 5
Katowice 1
Katowice 2
Katowice 3
Katowice 4
Katowice 5
Kraków 3237
Kraków 3647
Kraków 3437
Kraków 3326
Kraków 3002
Białystok 1435/14
Białystok 1649/14
Białystok 1513/14
Białystok 1541/14
Białystok 1190/14
Pruszcz G. 2131/15
Pruszcz G. 1144/15
Pruszcz G. 13419/14
Pruszcz G. 12209/14
Pruszcz G. 6054/14
Kielce 1991
Kielce 1924
Kielce 1701
Kielce 1981
Kielce 1834
Wrocław 1871
Wrocław 1966
Wrocław 1953
Wrocław 1955
Wrocław 1831
Odmiana
ziemniaka
Cykada
Denar
Vineta
Bryza
Tajfun
Bryza
Vineta
Bellarosa
Tajfun
Bryza
Tajfun
Irga
Ibis
Owacja
Bellarosa
Kuras
Ametyst
Irys
Irga
Kuba
bd
bd
bd
bd
bd
Owacja
Tajfun
Irga
Bellarosa
Lord
Tajfun
Vineta
Vineta
Vineta
Kuba
Potwierdzona obecność
Cms (test PCR i IFAS)
Test biologiczny
+
+
+
+
+
-
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Molekularna charakterystyka szczepów bakterii CMS
BPIOR 527-Ref.
Kraków 3437
Pruszcz 13419/14
Koszalin 4
Koszalin 1
Białystok 1190
Kraków 3002
Koszalin 5
Kielce 1924
Kielce 1981
Kielce 1701
Wrocław 1871
Kielce 1834
Białystok 1513
Reakcją PCR, z użyciem pary
specyficznych starterów PSA1 i PSA-R :
zidentyfikowano 13
czystych kultur bakterii
pozyskanych z 35 ekstraktów z
WIORiN .
2. i 4. Celem doświadczenia mikropoletkowego była ocena chorobotwórczości
wybranych izolatów Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus w stosunku do
roślin ziemniaka uprawianych w różnych warunkach glebowych.
• Odmiany ziemniaka
• Irys
• Tetyda
• 4 izolaty Cms, którymi
inokulowano sadzeniaki
• 9742/12 Warszawa
• 1/3542/12 Łódź
• 1604 Kraków
• 5853 Gorzów Wielkopolski
• Warstwa orna profilu glebowego
• piasek (I)
• piasek gliniasty (V)
• 192 rośliny ziemniaka
Objawy porażenia roślin i bulw ziemniaka przez Cms
Liczba ROŚLIN ziemniaka z objawami Cms
Izolat Cms
Piasek (I)
Liczba BULW ziemniaka z objawami Cms
Piasek gliniasty (V)
Irys
Tetyda
Irys
Tetyda
9742/12
Warszawa
0
0
1
0
1/3542/12
Łódź
4
0
0
1604 Kraków
0
0
5853 Gorzów
Wielkopolski
0
0
Fot. IHAR-PIB
O/ Jadwisin
Izolat Cms
Piasek (I)
Piasek gliniasty (V)
Irys
Tetyda
Irys
Tetyda
9742/12
Warszawa
0
0
0
1
0
1/3542/12
Łódź
3
0
0
0
0
1
1604 Kraków
0
0
0
0
0
0
5853 Gorzów
Wielkopolski
0
0
0
0
Indeks porażenia bulw* badanych odmian w zależności od izolatu Cms,
którym inokulowano sadzeniaki oraz profilu glebowego
*- obliczony na podstawie testu IFAS przeciwciała poliklonalne, z uwzględnieniem
liczby komórek Cms w preparacie w rozcieńczeniu ekstraktu z bulw 100 x
X- liczony według Townsenda – Heubergera
3. Po zbiorze bulw potomnych z doświadczenia mikropoletkowego wykonano
zawiesiny ekstrak-tów roślinnych i poddano je krioprezerwacji zgodne z procedurą
dla testu IF. Izolacja komórek bakteryjnych z materiału mikropoletkowego
przeprowadzona została metodą posiewów na poŜywkach półselektywnych MNTA i
NCP-88 oraz reakcją PCR.
Z 32 zawiesin otrzymano
23 czyste kultury Cms
V Tetyda d2
V Tetyda d2
V Tetyda d3
V Tetyda d4
V Irys c4
V Irys a2
V Irys a4
Irys c1
Irys a2
V Tetyda b3
Irys c 4
V Irys c 3
Irys a4
Irys a1
Irys c3
Irys c3
Irys a3
V Tetyda b1
I Tetyda d3
V Tetyda d1
V Tetyda d1
I Tetyda d1
I Tetyda b2
I Tetyda b2
I Tetyda d2
V Irys a3
V Irys a3
V Tetyda b2
Liczba
prób
Profil
glebow
y
Izolat Cms
Odmiana
1*
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
9742/12 Warszawa
9742/12 Warszawa
1/3542/12 Łódź
1/3542/12 Łódź
1604 Kraków
1604 Kraków
5853 Gorzów Wlkp.
5853 Gorzów Wlkp.
9742/12 Warszawa
9742/12 Warszawa
1/3542/12 Łódź
1/3542/12 Łódź
1604 Kraków
1604 Kraków
5853 Gorzów Wlkp.
5853 Gorzów Wlkp.
9742/12 Warszawa
9742/12 Warszawa
1/3542/12 Łódź
1/3542/12 Łódź
1604 Kraków
1604 Kraków
5853 Gorzów Wlkp.
5853 Gorzów Wlkp.
9742/12 Warszawa
9742/12 Warszawa
1/3542/12 Łódź
1/3542/12 Łódź
1604 Kraków
1604 Kraków
5853 Gorzów Wlkp.
5853 Gorzów Wlkp.
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Irys
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
Tetyda
5. Ocena chorobotwórczości 4 izolatów:
•Cms 9742/12 Warszawa,
•Cms 1/3542/12 Łódź,
•Cms 1604 Kraków,
•Cms 5853 Gorzów Wielkopolski.
Metodyka:
•Siewki bakłaŜana odmiany Black Beauty,
•40 dni obserwowacji objawów ,
•5-cio stopniowa skala objawów,
•dwa testy inokulując kaŜdorazowo po 10 siewek bakłaŜana w stadium trzeciego liścia
dla kaŜdego izolatu.
Izolat
Cms 1/3542/12 Łódź
Cms 9742/12 Warszawa
Cms 1604 Kraków
Cms 5853 Gorzów Wlkp.
wirulencja, wyraŜona w %
powierzchni liści z
charakterystycznymi zmianami
chorobowymi
30
65
66
72
Ocena wg 5-cio stopniowej
skali objawów*
4-5
4-5
4-5
3
*- 1 brak objawów; 2 lekkie tłuste plamy na liściach; 3 jasnozielone przebarwienia na liściach; 4 chlorozy
pomiędzy wiązkami przewodzącymi w liściu; 5 nekrozy
6. Opracowanie metody badań skuteczności działania bakteriobójczego środków
dezynfekcyjnych, zastosowanych na powierzchnie sztucznie zakaŜone zawiesiną szczepów Cms
związki utleniające
(nadtlenek wodoru
kwas nadoctowy
nadsiarczan potasu)
aldehyd
glutarowy
czwartorzędowe
związki
amoniowe
związki
chloru
alkohole
nanosrebro
związki
jodu
Virkon S
Lysoformin
3000
Timsen
Roko Agro
Chloral
Bactosan
HuwaSan
Rapicid
Steridial K
Agro-Des
Sansept 0200
DM CID S
Hysepta
Alc
Oxykol
Licosil 03
Viropol
Peroxat
Jodat
Quatosept
Kryteria wyboru środka do zastosowania w produkcji ziemniaka i przemyśle ziemniaczanym:
-niska cena (przeznaczenie rolnictwo i przemysł spoŜywczy).
-róŜne grupy substancji czynnej (nabywanie odporności przez Cms -zjawisko efflux),
-brak wiedzy dotyczącej skuteczności działania środka dezynfekującego przeciwko Cms, w
obecności substancji organicznej pochodzenia ziemniaczanego,
-działanie środka dezynfekującego na powierzchnie pokryte biofilmem- formą występowania
bakterii Cms na powierzchniach roślinnych oraz powierzchniach spotykanych w miejscu
produkcji i przemyśle przetwórczym ziemniaka.
Badania środków dezynfekujących:
-przygotowanie powierzchni
doświadczalnych,
-opracowanie, sprawdzenie toksyczności
substancji neutralizującej,
-opracowanie otrzymywania substancji
obciąŜającej – homogenizat z tkanki bulwy
ziemniaka, sprawdzenie toksyczności na
Cms
-doświadczenie wstępne określające
zdolność tworzenia przez bakterie Cms
biofilmu
Skupiska bakterii Cms na
powierzchni stali nierdzewnej
7. Przygotowano broszurę dla rolników dotyczącą integrowanej produkcji
ziemniaka uwzględniającą zasady postępowania w gospodarstwie pozwalające
na zmniejszenie ryzyka rozprzestrzeniania się bakteriozy pierścieniowej
ziemniaka