Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a/FITC, Clone NA1/34

Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a/FITC, Clone NA1/34
Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a/RPE, Clone NA1/34
Przeznaczenie
F7141
R7189
Do diagnostyki in vitro.
F7141 i R7189 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Przeciwciała przeciwko CD1a mogą być
przydatne do identyfikacji histiocytozy komórek Langerhansa i klasyfikacji grasiczaków, oraz procesów
nowotworowych wywodzących się z prekursorów limfocytów T (1). Interpretacji wyników może dokonywać
wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne.
Syninimy antygenu
R4 (2).
Wprowadzenie
Ludzki locus CD1 zawiera pięć genów, CD1A-E. Cząsteczki CD1 składają się z glikozylowanych łańcuchów
polipeptydu , które przechodzą przez błonę komórkową i są niekowalencyjnie związane z cząsteczką 2mikroglobuliny (3).
Anti-CD1a rozpoznaje cząsteczkę łańcucha ciężkiego o masie cząsteczkowej 49 kDa. Antygen ten ulega silnej
ekspresji na korowych tymocytach i na szeregu komórek prezentujących antygen, w tym na komórkach
Langerhansa i komórkach dendrytycznych. CD1a nie ulega ekspresji na wczesnych tymocytach I jest
nieobecny na dojrzałych limfocytach T krwi obwodowej, ale w pobudzonych limfocytach T można go wykryć
wewnątrz cytoplazmy (1-3).
Odczynni k dostarczony
Znakowane przeciwciała Anti-CD1a, F7141 i R7189 zostały wyprodukowane z oczyszczonych monoklonalnych
przeciwciał mysich. Są one dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy
wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L
przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG2a, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce.
Nr kat.
przeciwciała
Fluorochrom
Nr kat. odczynnika
kontrolnego
F7141
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X0933
R7189
RPE (R-Phycoerythrin)
X0950
Immunogen
Ludzkie tymocyty (4).
Swoistość
Anti-CD1a, NA1/34, zostało zakwalifikowane na pierszym, drugim, trzecim i czwartym International Workshop
and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens, a badania przeprowadzone przez różne
laboratoria potwierdziły jego reaktywność z antygenem CD1a (2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ
nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Wykonanie odczynu
1.
Przenieść 100 L krwi z dodatkiem środka przeciwzakrzepowego (EDTA) do probówki polistyrenowej o
wymiarach 12 mm x 75 mm.
2.
Dodać 10 µL sprzężonego z fluorochromem anty-CD1a i wymieszać ostrożnie mieszadłem wibracyjnym.
3.
Inkubować probówkę w ciemności przez 30 minut w temperaturze 2–8 °C lub przez 15–30 minut w
temperaturze pokojowej (20–25°C).
Dodać do probówki 100 µL odczynnika Uti-Lyse™ Reagent A (nr kat. Dako S3325) i delikatnie mieszać
mieszadłem wibracyjnym. Inkubować probówkę przez 10 minut w temperaturze pokojowej, w ciemnym
pomieszczeniu.
Dodać do probówki 1 mL odczynnika Uti-Lyse™ Reagent B (nr kat. Dako S3325) i delikatnie mieszać
mieszadłem wibracyjnym. Inkubować probówkę przez 10 minut w temperaturze pokojowej, w ciemnym
pomieszczeniu.
Odwirować probówkę przy 300 x g przez 5 minut. Delikatnie odciągnąć supernatant i odrzucić go,
pozostawiając w probówce około 50 µL cieczy.
Dodać do probówki 2 mL odczynnika PBS (nr kat. Dako S3024) i odtworzyć zawiesinę za pomocą
mieszadła wibracyjnego.
4.
5.
6.
7.
(108481-003)
F7141/R7189/PL/TJA/14.03.05 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
8.
9.
10.
Powtórzyć etap 6.
Odtworzyć zawiesinę komórek w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL PBS.
Poddać próbkę analizie w cytometrze przepływowym lub przechowywać do analizy w ciemności i
temperaturze 2–8°C. Próbki powinny zostać poddane analizie przed upływem 24 godzin od barwienia.
Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są wrażliwe na światło, w związku z czym w trakcie
wykonywania odczynu i do wykonania analizy próbki powinny być chronione przed światłem.
Uwagi dotyczące procedury
Etap 1: Opcjonalnie do każdego pomiaru można dołączyć odpowiednie dodatnie i ujemne próbki kontrolne
w celu weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek.
Etap 2: Zalecana objętość koniugatu jest jedynie wartością orientacyjną. Optymalne warunki barwienia mogą się
zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w
każdym laboratorium.
Uwzględnienie probówki z odczynnikiem kontrolnym jest opcjonalne. Odczynnik kontrolny powinien być
dopasowany do izotypu i fluorochromu sprzężonego przeciwciała. Zalecane odczynniki kontrolne przedstawiono
w tabeli powyżej.
Etapy 4 i 5: Jeśli używany jest inny odczynnik do lizy komórek, należy przy jego doborze kierować się
poniższymi zaleceniami. Należy zauważyć, że jeśli alternatywny odczynnik do lizy nie zawiera utrwalacza (np.
Dako EasyLyse™, nr kat. S2364), PBS w kroku 9 powinien zawierać 1% paraformaldehydu, chyba że próbka
zostanie przeanalizowana w czasie zalecanym dla odczynnika do lizy.
Etap 10: W przypadku niektórych chorób można oczekiwać nieprawidłowej liczby komórek, w których zachodzi
ekspresja antygenu docelowego, lub nieprawidłowego poziomu ekspresji antygenu. Może to wywołać zmianę
wzorca odczynu. Do przeprowadzenia właściwej analizy konieczna jest znajomość prawidłowego wzorca
ekspresji antygenu oraz jego związków z ekspresją innych istotnych antygenów.
Odczynniki wielobarwne lepiej niż jednobarwne nadają się do kompleksowej analizy próbek w cytometrii
przepływowej. W analizach wielobarwnych szczególne znaczenie ma odpowiedni dobór kompensacji koloru.
Literatura
1.
Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 2003. p. 59-60.
2.
Fainboim L, Salamone MC. CD guide. CD1a-e. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C,
Clark E, et al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th
International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford
University Press Inc.; 2002. p. 747-8.
3.
Fainboim L, Salamone MC. TC2. CD1 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem
Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14;
Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 33-7.
4.
McMichael AJ, Pilch JR, Galfré G, Mason DY, Fabre JW, Milstein C. A human thymocyte antigen defined by
a hybrid myeloma monoclonal antibody. Eur J Immunol 1979;9:205-10.
Objaśnienia symboli
(108481-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F7141/R7189/PL/TJA/14.03.05 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17