Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD19
Clone LE-CD19
Nr kat. M7296
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD19, Clone LE-CD19, są przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciała te znakują komórki B w tkankach prawidłowych i nowotworowych. Wyniki panelu
przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez
wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
CD19 to glikoproteina transbłonowa o masie cząsteczkowej 120 kDa (Mr = 95 000) (1). CD19 należy do nadrodziny
immunoglobulin z dwiema domenami pozakomórkowymi typu C2 (2). Cząsteczki tego białka są niezbędne do
transdukcji sygnałów regulujących rozwój, aktywację i różnicowanie limfocytów B (1). Ekspresję CD19, poza komórkami
dendrytycznymi grudek chłonnych, wykazują wyłącznie prawidłowe i nowotworowe komórki B. Białko to nie występuje
natomiast w komórkach T, monocytach i granulocytach (2). Białko CD19 pojawia się na wczesnym etapie dojrzewania
komórek B, prawdopodobnie w późnej fazie prekursorowej, mniej więcej na etapie zmiany konfiguracji ciężkich
łańcuchów Ig. Jego ekspresja utrzymuje się następnie we wszystkich fazach dojrzewania komórek B i zanika po
terminalnym zróżnicowaniu do komórek plazmatycznych (2). Immunologiczne metody detekcji ekspresji białka CD19 są
przydatne ze względu na fakt, że w białaczkach i chłoniakach z komórek B rzadko dochodzi do utraty epitopu (3).
Opisano przypadki ekspresji białka CD19 w niektórych komórkach ostrych białaczek mielocytarnych (2).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone
z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7)
Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający
płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i azydek sodu o
stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: LE-CD19. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Peptyd syntetyczny składający się z końca C białka CD19 sprzężonego z KLH (hemocyjaniną z Megathura crenulata).
Swoistość
W testach Western blot lizatów z komórek Raji (chłoniak Burkitta) i komórek Jurkat (T-ALL) w środowisku
utleniającym przeciwciała znakowały w komórkach Raji prążek masy 95 kDa, odpowiadającej masie białka CD19,
natomiast w przypadku komórek Jurkat nie stwierdzono prążka.
W badaniach immunohistochemicznych na skrawkach tkanek utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie
przeciwciało nie wykazywało reaktywności krzyżowej z białkiem będącym odpowiednikiem CD19 u krów, koni,
myszy, szczurów i świń.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków
w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego
równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
(114370-002)
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42
M7296/PL/CE/24.05.06 p. 1/2
| DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne rezultaty uzyskuje się po wstępnej obróbce przy użyciu odczynników Dako Target Retrieval Solution,
pH 9 (nr. kat. S2368/S2367) i Dako Target Retrieval Solution, High pH (nr. kat. S3308/S3307).
Odmaskowanie HIER: 15 minut w temperaturze wrzenia. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do
odmaskowania antygenu.
Po obróbce cieplnej należy pozostawić naczynie z buforem i preparatami na 20 minut, aż ostygnie do temperatury
pokojowej. Po zakończeniu procedury HIER delikatnie przepłukać skrawki roztworem buforu lub wodą dejonizowaną.
W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W
celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożone i rozmazy komórkowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków mrożonych utrwalanych acetonem.
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD19, nr kat. M7296, mogą być używane w zakresie
rozcieńczeń od 1:50 do 1:100 na poddanych wstępnej obróbce utrwalanych w formalinie skrawkach zatopionych w
parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciał odczynnikiem
Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809). Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne
warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone
indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1
(nr kat. X0931) rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie
potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania
odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle z odczynami na
materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: zaleca się stosowanie odczynników Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (nr kat.
K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit/Mouse (nr kat. K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit,
Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse (nr kat. K5007), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (nr. kat. K4004/K4005).
Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z systemem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują ziarnisty wzór odczynu błonowego.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała dają odczyn w komórkach B tkanek limfoidalnych, takich jak migdałki i tkanki
limfoidalne związane z jelitami, jak również w prawidłowych i reaktywnych komórkach B innych badanych tkanek, w
tym okrężnicy, nerek, trzustki, gruczołu krokowego i żołądka.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała dawały odczyn w nowotworowych komórkach B w 30 przebadanych preparatach
chłoniaków z komórek B.
Piśmiennictwo
1.
Sato S, Tedder TF. CD Guide. CD19. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY,
Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th
International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing
Inc.; 1997. p. 1123-4.
2.
Sato S, Tedder TF. BC3. CD19 workshop panel report In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings
of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 133-5.
3.
Leong AS-Y, Copper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 67-8.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instukcji
stosowania
Zużyć przed
(114370-002)
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42
Producent
M7296/PL/CE/24.05.06 p. 2/2
| DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17