in vitro - Biocentrum

badania przedkliniczne
in vitro
Problemy związane z procesami absorpcji, dystrybucji, metabolizmu
i wydalania cząsteczek o potencjale leczniczym często prowadzą do uzyskania
niekorzystnych wyników na etapie badań klinicznych. Podejmowanie właściwych decyzji
dotyczących rodzaju przeprowadzanych testów stanowi kluczowy krok na drodze do efektywnego
przeprowadzenia związku od etapu badań podstawowych do fazy klinicznej.
Badania ADME-Tox
BioCentrum oferuje wykonanie badań ADME-Tox (z ang. Absorption, Distribution, Metabolism Excretion and Toxicity),
których wyniki pozwalają wyselekcjonować najbardziej obiecujące cząsteczki terapeutyczne. Wykonanie testów
ADME-Tox gwarantuje zminimalizowanie ryzyka wprowadzenia do fazy badań klinicznych związków nie odpowiadających założeniom projektu terapeutycznego lub takich, które wywierają niekorzystny uboczny wpływ na funkcjonowanie komórki.
Rozpuszczalność
związków
Wyznaczenie profilu i określenie poziomu rozpuszczalności związku w różnych rozpuszczalnikach jest kluczowym elementem przedklinicznego etapu rozwoju leku. Wodne roztwory badanych substancji są poddawane analizie z wykorzystaniem płytek MultiScreen
Solubility filter plate pracujących w układzie próżniowym. Dalsze metody analityczne dobierane są pod kątem właściwości badanej substancji. Standardowa procedura wykorzystuje techniki analizy widm UV roztworu substancji. W przypadku prób zanieczyszczonych
stosowane są techniki spektrometrii masowej.
Przepuszczalność
związków (PAMPA)
Testy PAMPA (z ang. Parallel Artificial Membrane Permeability Assay) są standardowo wykorzystywane w procesach profilowania właściwości substancji o potencjale leczniczym. Oznaczenia wykonywane są z wykorzystaniem płytek MultiScreen-IP PAMPA filter plate. Umożliwiają one analizę procesów związanych z transportem badanego związku przez membranę
PVDF pokrytą, w zależności od aplikacji, roztworem substancji lipidowej.
Stabilność związków
w osoczu i krwi
Oddziaływania pomiędzy substancją czynną a enzymami obecnymi w osoczu lub ze składnikami erytrocytów mogą prowadzić do zmian struktury związku, a co za tym idzie, do zmian
jego właściwości fizykochemicznych. BioCentrum oferuje wydajne metody badania stabilności substancji wykorzystujące techniki spektrometrii masowej, które pozwalają na przeprowadzanie analiz związków preinkubowanych z osoczem lub krwią.
Stabilność metaboliczna
BioCentrum oferuje dwie wydajne metody badania stabilności metabolicznej związków leczniczych. W jednej wykorzystywane są mikrosomy wątrobowe, które zawierają większość enzymów odpowiedzialnych za metabolizm ksenobiotyków. W drugiej metodzie stosowana jest
frakcja S9, zawierająca specyficzny nadsącz uzyskany z homogenatu wątroby. Dzięki zastosowaniu wysoce sprawnej chromatografii cieczowej oraz technik spektrometrii masowej możliwa jest identyfikacja badanych związków oraz ich metabolitów.
Inhibicja
cytochromu P450
Rodzina cytochromów P450 odgrywa istotną rolę w metabolizmie szerokiej gamy ksenobiotyków i związków endogennych. W wyniku interakcji pomiędzy różnymi lekami dochodzi często do hamowania metabolizmu, w którym pośredniczą cytochromy P450. Test inhibicji cytochromu P450 pozwala na identyfikację związków charakteryzujących się niskim potencjałem
w oddziaływaniach lek-lek (słabych inhibitorów enzymów). Oznaczenie polega na inkubacji
związku z odpowiednimi substratami poszczególnych izoform enzymu CYP. Test wykorzystuje
rekombinowane enzymy: CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6,
CYP2E1 i CYP3A4 oraz kilka substratów modelowych. Otrzymana w wyniku oznaczenia wartość IC50 określa stężenie badanego związku, przy którym zachodzi 50% inhibicja aktywności katalitycznej enzymu.
Badania
genotoksyczności
BioCentrum oferuje wykonanie oceny właściwości genotoksycznych (mutagennych), które
stanowią istotny element podczas szacowania bezpieczeństwa stosowania potencjalnych
substancji leczniczych. Zgodnie z wytycznymi OECD TG 471 przeprowadzany jest test
Amesa, który polega na badaniu mutacji powrotnych w komórkach specyficznych szczepów
bakteryjnych.
Badania wpływu potencjalnych substancji terapeutycznych
na biologię komórki
Badania
cytotoksyczności
BioCentrum oferuje szeroki zakres badań cytotoksyczności w hodowlach komórkowych in vitro
wykonywanych w standardach Dobrej Praktyki Laboratoryjnej (DPL), przy użyciu odpowiednich
modeli komórkowych. Przeprowadzane są analizy monitorujące aktywność dehydrogenazy mitochondrialnej (testy MTT oraz MTS), ocena poziomu dehydrogenazy mleczanowej w medium hodowlanym (test LDH) oraz ocena tempa proliferacji komórek poprzez ilościową ocenę syntezy
DNA (test BrdU).
Analiza zmian
apoptotycznych
i nekrotycznych
W celu oceny wpływu badanych związków na funkcjonowanie komórek BioCentrum oferuje
przeprowadzenie dwóch testów wykonywanych metodą cytometrii przepływowej. Są nimi identyfikacja zmian apoptotycznych i nekrotycznych w hodowli wybranej linii komórkowej oraz
ocena zmian przebiegu cyklu komórkowego spowodowanych działaniem badanej substancji.
BioCentrum sp. z o.o. ul. Bobrzyńskiego 14, 30-348 Kraków, Polska tel. +48 12 297 47 20 [email protected]
www.biocentrum.com.pl