ce-ivd spec template
Transkrypt
ce-ivd spec template
MultiMix™ Triple-Colour Reagent Anti-Human TdT/FITC Anti-Human CD22/RPE Anti-Human CD3/APC nr kat. TC668 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. TC668 przeznaczony jest do stosowania w cytometrii przepływowej. Odczynnik przeznaczony jest do identyfikacji prekursorów limfocytów T i limfocytów B, wykazujących obecność terminalnej transferazy dezoksynukleotydowej (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT), limfocytów B zawierających CD22 i limfocytów T wykazujących obecność CD3. TdT obecna jest w jądrach komórek prekursorowych limfocytów T i B, i w warunkach prawidłowych nie wykrywa się jej w komórkach jednojądrzastych krwi ani obwodowej tkanki limfatycznej. CD22 obecny jest w cytoplazmie późnych limfocytów pro-B i wczesnych limfocytów pre-B oraz na powierzchni dojrzałych limfocytów B. CD3 stanowi uniwersalny antygen limfocytów T oraz marker prawidłowych i nowotworowych limfocytów T. TC668 umożliwia wykrycie wewnątrzkomórkowych TdT, CD22 i CD3. Badanie ekspresji powierzchniowej CD22 i CD3 należy przeprowadzać osobno. Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany patolog. Dostarczany odczynnik TC668 składa się z następującego zestawu trzech dopasowanych przeciwciał fluorescencyjnych. Monoclonal Mouse Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, Clone HT-6, sprzężone z izomerem 1 izotiocyjanianu fluoresceiny (FITC). Monoclonal Mouse Anti-Human CD22, Clone 4KB128 sprzężone z R-fikoerytryną (RPE). Monoclonal Mouse Anti-Human CD3, Clone UCHT1, sprzężone z allofikocyjaniną (APC). Koniugaty w TC668 (w liczbie trzech) wyprodukowano z oczyszczonych mysich przeciwciał monoklonalnych izotypu IgG1 kappa. TC668 dostarczany jest w postaci ciekłej w buforze zawierającym 1% albuminy surowicy wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Każda fiolka zawiera 50 testów (20 µL koniugatu dla leukocytów, w ilości do 106, z prawidłowej ludzkiej krwi obwodowej). Swoistość W cytometrii przepływowej przeciwciało przeciwko terminalnej transferazy dezoksynukleotydowej, HT-6, znakuje komórki MOLT-3 i MOLT-4 (obie linie niedojrzałych limfocytów T, o których wiadomo, że wykazują obecność TdT). Pomiary cytometrii przepływowej TdT z zastosowaniem przeciwciała HT-6 u 55 pacjentów z ostrą białaczką limfoblastyczną lub mielocytarną lub przełomem blastycznym w przewlekłej białaczce szpikowej, u których wykryto TdT, dały wyniki porównywalne lub lepsze od uzyskanych przy pomocy mieszaniny przeciwciał monoklonalnych anty-TdT (anty-HTdT-Mix) (1). Przeciwciała Anty-CD22, 4KB128, opisano podczas warsztatów Third and Fifth International Workshops and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (3. i 5. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty) (2, 3), a ich reaktywność z CD22 została potwierdzona przez wiele laboratoriów. Przeciwciała Anty-CD3, UCHT1, opisano podczas warsztatów First and Third International Workshops and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (1. i 3. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD3 została potwierdzona przez wiele laboratoriów (4). Anty-CD3, UCHT1, reaguje z łańcuchem CD3 (5). Środki ostrożności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury postępowania. Przechowywanie Przechowywać w ciemności, w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na wkładce informacyjnej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wykonanie odczynu 1. (110686-003) Przenieść 50 µL (nie więcej niż 106 komórek) krwi pełnej z dodatkiem środka przeciwzakrzepowego (EDTA), szpiku kostnego lub komórek jednojądrzastych do probówki polistyrenowej o wymiarach 12 x 75 mm. TC668/PL/OKJ/23.08.04 s. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 2. Dodać 100 µL Dako IntraStain, Reagent A (Fixation), nr kat. K2311. Ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym, tak aby komórki utworzyły zawiesinę. 3. Inkubować 15 minut w temperaturze pokojowej. 4. Dodać 2 mL PBS (nr kat. S3024) i wymieszać mieszadłem wibracyjnym. 5. Odwirować przez 5 minut przy 300 x g, następnie odciągnąć supernatant, pozostawiając około 50 µL cieczy. 6. Starannie wymieszać mieszadłem wibracyjnym, tak aby komórki utworzyły zawiesinę, a następnie dodać 100 µL Dako IntraStain, Reagent B (Permeabilisation), nr kat. K2311. 7. Dodać 20 µL TC668 i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym, tak aby komórki znajdowały się w zawiesinie. Podana objętość 20 µL jest szacunkowa, laboratorium powinno indywidualnie dobrać optymalną objętość. 8. Do kontroli ujemnej dla TC668 zaleca się zastosowanie sprzężonych z FITC, RPE i APC odczynników Dako, nr kat. X0978, tego samego izotypu, co TC668. Dodać do próbki 20 µL X0978 i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym. Podana objętość 20 µL jest szacunkowa, laboratorium powinno indywidualnie dobrać optymalną objętość. 9. Inkubować przez 15 minut w temperaturze pokojowej, w ciemnym pomieszczeniu. 10. Powtórzyć kroki 4 i 5. 11. Zawiesić osad w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL PBS (nr kat. S3024). 12. Poddać analizie w cytometrze przepływowym. Jeśli próbki nie będą analizowane natychmiast, można je przechowywać do 8 godzin w temperaturze 2–8 °C i bez dostępu światła. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zaleca się dołączenie do każdego pomiaru odpowiednich dodatnich i ujemnych próbek kontrolnych w celu weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są światłoczułe, w związku z czym w trakcie wykonywania odczynu i do wykonania analizy próbki powinny być chronione przed światłem. W przypadku niektórych chorób można oczekiwać nieprawidłowej ilości komórek, w których zachodzi ekspresja antygenów docelowych, lub nieprawidłowego poziomu ekspresji antygenów. Może to wywołać zmianę wzorca odczynu. Do przeprowadzenia właściwej analizy konieczna jest znajomość prawidłowego wzorca ekspresji antygenów oraz ich związków z ekspresją innych istotnych antygenów. Odczynniki wielobarwne umożliwiają bardziej wszechstronną analizę komórek nowotworowych białaczki i chłoniaków niż badanie jednobarwne. W analizach wielobarwnych szczególne znaczenie ma odpowiedni dobór kompensacji koloru. Dzięki minimalnemu nakładaniu się pasm emisyjnych fluorochromów FITC, RPE i APC, ich połączenie umożliwia wyjątkowo łatwą analizę. Piśmiennictwo 1. Paietta E, Meenan B, Heavey C, Thomas D. Detection of Terminal Transferase in Acute Myeloid Leukemia by Flow Cytometry. Cytometry 1994;16:256-61. 2. Kehrl JH. B6 CD22 Workshop Panal report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press. Volume 1. 1995. p. 523-5. 3. Moldenhauer G, Schwartz R, Dörken B, Hämmerling GJ. B2.2 Biochemical characterization and epitope analysis of B-lymphocyte-specific surface antigens defined by clustering Workshop monoclonal antibodies. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 378-82. 4. McMichael AJ, Gotch FM. T-cell antigens: new and previously defined clusters. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 31-62. 5. Tunnacliffe A, Olsson C, Traunecker A, Krissansen GW, Karjalainen K, de la Hera A. T3.2. The majority of CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 295-6. Objaśnienie symboli (110686-003) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed słońcem (patrz sekcja nt. przechowywania) Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii TC668/PL/OKJ/23.08.04 s. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17