Monoclonal Mouse Anti-Human CD66abce, Clone Kat4c
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human CD66abce, Clone Kat4c
Monoclonal Mouse Anti-Human CD66abce, Clone Kat4c Nr katalogowy F 7112 Nr katalogowy C 7113 Przeznaczenie znakowany FITC znakowany RPE-Cy5 Do diagnostyki in vitro. F 7112 i C 7113 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-CD66abce jest uważane za podstawowe do wstępnej diagnostyki przypadków ostrej białaczki szpikowej u dorosłych (AML) I przewlekłej białaczki mielomonocytarnej (CML), a także do wykrywania minimalnych zmian miejscowych w ostrej białaczce limfatycznej (ALL), wraz z panelem innych przeciwciał (1-3). Interpretacji wyników może dokonywać wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne. Synonimy antygenu NCA-160, biliary glycoprotein (BGP), CD67, CGM6, NCA-95, NCA, NCA-50/90, and CEA (4). Wprowadzenie Przeciwciała przeciwko CD66 rozpoznają rodzinę białek znaną jako antygen karcinoembrionalny (CEA), a można je scharakteryzować dokładniej prze reakcję z jednym lub kilkoma antygenami z tej rodziny, oznaczanymi mała literą po symbolu CD66: np. CD66a (BGP), CD66b (CGM6, CD67), CD66c (NCA), CD66d (CGM1), CD66e (CEA), CD66f (swoista dla ciąży glikoproteina (PSG)) (4, 5). Rodzina ludzkich białek CEA składa się z 22 blisko spokrewnionych genów należących do nadrodziny immunoglobulin, ulokowanych na chromosomie 19. Ta rodzina genów dzieli się na dwie główne podgrupy, przy czym dziewięć należy do grupy CEA i 13 do grupy PSG (6). Masa cząsteczkowa poszczególnych typów CD66 mieści się w granicach od 35 kDa do 200 kDa: CD66a (140-180 kDa), CD66b (95-100 kDa), CD66c (90 kDa), CD66d (35 kDa), CD66e (180200 kDa) i CD66f (w surowicy 54-72 kDa) (4). We krwi obwodowej CD66a, CD66b, CD66c i CD66d ulegają ekspresji tylko na granulocytach. CD66a, CD66c i CD66e są też obecne na komórkach nabłonka (4). Anti-CD66a, CD66abce, CD66ace, CD66acd, CD66acde i CD66c wiążą się z limfoidalnymi liniami komórkowymi wywodzącymi się z limfocytów T i B, młodzieńczych ALL, CML i AML (3, 7). Wykazano, że antiCD66abce w połączeniu z innymi przeciwciałami jest przydatne do wstępnej oceny przypadków AML u dorosłych i przewlekłych chorób mieloproliferacyjnych, a także do wykrywania minimalnych zmian miejscowych w ostrej białaczce limfatycznej ALL (1-3). Funkcje poszczególnych typów CD66 są niejasne, ale wiadomo, że są one zdolne do homo- i heteroadhezji I do aktywowania neutrofili (4, 6). Odczynnik dostarczony Znakowane przeciwciała anti-CD66abce, F 7112 i C 7113, zostały wyprodukowane z oczyszczonych mysich przeciwciał monoklonalnych. Koniugaty są dostarczane w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej). Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce. Przeciwciało, nr katalogowy Swoistość Fluorochrom Kontrola negatywna, nr katalogowy F 7112 FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1) X 0927 C 7113 RPE-Cy5 (R-Phycoerythrin-Cyanine 5) X 0955 Anti-CD66abce, Kat4c, reaguje z transfektantami a, b, c i e sześciu podgrup grupy CEA wewnątrz nadrodziny immunoglobulin I jest w związku z tym klasyfikowane jako CD66abce (5). Anti-CD66abce, Kat4c znakuje dojrzałe komórki mielopoetycznei dojrzewające komórki mielopoetyczne w normalnym szpiku kostnym (1, 7). Cytometryczna analiza próbek szpiku kostnego z użyciem Anti-CD66abce, Kat4c, anti-CD13 i anti-CD14 pozwala na podział komórek mielopoetycznych na trzy podgrupy: komórki CD13+CD14-CD66abce- (niedojrzałe komórki mielopoetyczne), komórki CD13+CD14-CD66abce+ (dojrzewające komórki mielopoetyczne) Wells komórki CD13-CD14-CD66abce+ (dojrzałe komórki mielopoetyczne) (1). Może to być przydatne przy ocenie chorych ze złośliwym procesem mieloproliferacyjnym (1). Cytometryczna analiza próbek szpiku kostnego wykazała, że Anti-CD66abce, Kat4c znakuje AML (2/29 przypadków) i ALL (8/12 przypadków) (3). Anti-CD66abce, Kat4c znakuje 19/108 przypadków AML i 9/20 przypadków przewlekłych zespołów mieloproliferacyjnych wykazujących ekspresję CD66abce i ko-ekspresję CD14 (2). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. (108366-002) F 7112/C 7113/PL/SSA/01.03.03 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Przechowywanie Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako. Procedura barwienia 1. Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem. 2. Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na gradiencie gęstości lub zlizować erytrocyty po punkcie 6. 3. Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste RPMI 1640 lub PBS, o pH 7,2-7,4. 4. Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L Anti-CD66 znakowanego odpowiednim fluorochromem. 5. Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i znakowanego samym fluorochromem jako kontroli ujemnej (patrz tabela). 6. Inkubować w ciemnościach w temp. 4 C przez 30 minut. 7. Dwukrotnie przepłukać PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS, o pH 7,4. 8. Zanalizować w cytometrze przepływowym. Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika i przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki znakowane fluorochromami są wrażliwe na światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy. Szczególne ograniczenia dotyczące produktu Obserwowano, że koniugaty znakowane RPE-Cy5 mogą się wiązać do monocytów, co powoduje powstanie tła świecenia (8). Literatura 1. Bonde J, Meyer K, Broe MK, Hokland M, Turley H, Hokland P. Improved flow cytometric identification of myelopoiesis by the simultaneous labeling with CD13, CD14 and CD66 monoclonal antibodies. Br J Haematol 1996;92:269-79. 2. Hansen I, Meyer K, Hokland P. Flow cytometric identification of myeloid disorders by asynchronous expression of the CD14 and CD66 antigens. Eur J Haematol 1998;61:339-46. 3. Carrasco M, Munoz L, Bellido M, Bernat S, Rubiol E, Ubeda J, et al. CD66 expression in acute leukaemia. Ann Hematol 2000;79:299-303. 4. Turni L, Shaw S, Watson B, Mason D. CD guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, De Haas M, et al, editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University Press Inc.; 2002 .p. 816-21. 5. Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume One .p. 889-99. 6. Thompson JA, Grunert F, Zimmermann W. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives. J Clin Lab Anal 1991;5:344-66. 7. Hanenberg H, Quentin I, Baumann M, Grunert F, Burdach S. M14.8. Expression of CEA gene family members on haemopoietic cells. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5 th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume One. p. 919-21. 8. van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61. Objaśnienia symboli (108366-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed światłem (sprawdź w rozdz. przechowywanie) Producent Sprawdź w instrukcji stosowania Numer serii F 7112/C 7113/PL/SSA/01.03.03 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17