Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 10
Klon DE-K10
Nr katalogowy M 7002
Wydanie 24.03.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Mysie przeciwciało monoklonalne przeciw ludzkiej cytokeratynie 10, klon DE-K10, jest przeznaczone do użycia
w badaniach immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje wszystkie nabłonkowe komórki przypodstawne i
jest użyteczne dla identyfikacji wysoko zróżnicowanych raków płaskonabłonkowych (1, 2). Diagnostyka
różnicowa jest możliwa z użyciem panelu przeciwciał. Interpretacja badań musi być przeprowadzona przez
wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby i innych testów diagnostycznych.
Wprowadzenie
Cytokeratyny (CKs) należą do pośrednich filamentów, które tworzą cytoszkielet w większości komórek
eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych włókienek pośrednich, CKs tworzą wielogenową rodzinę
polipetydów , których masy cząsteczkowe mieszczą się w zakresie od 40 do 68 kDa. CKs zalicza się do
najbardziej podstawowych markerów rożnicowania nabłonkowego. Obecnie w różnych ludzkich nabłonkach
znanych jest 20 różnych cytokeratyn (3). CKs można podzielić na dwie podrodziny: kwaśne typu A (klasa I) i
zasadowe typu B (klasa II). CK 10 należy do cytokeratyn typu I, o masie cząsteczkowej 56.5 kDa. Podobnie jak
CK 1, występuje we wszystkich komórkach przypodstawnych, ale jest nieobecna w komórkach podstawnych.
Łącznie, CK 1 i CK 10 stanowią jeden z pierwszych markerów różnicowania nabłonkowego (1, 4). CK 10 jest
uznawana za marker bardziej zróżnicowanych komórek raków płaskonabłonkowych (1, 2).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciała są dostarczone w postaci nadsączu z hodowli komórkowej dializowanego w
środowisku 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2. Zawierają 15 mmol/L NaN3.
Klon: DE-K10 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG: Zob. opis na fiolce.
Immunogen
Preparat cytoszkieletu wyizolowany z ludzkiego nabłonka ektocerwikalnego (1).
Swoistość
W Western blottingu preparatów cytoszkieletu ludzkiego nabłonka przeciwciało wiąże pojedynczy prążek 56.5
kDa odpowiadający CK 10 (1).
W dwukierunkowym immunoblottingu białek cytoszkieletu z ludzkiej skóry, przciwciało wiąże pojedynczy dot
odpowiadający CK 10 (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować
z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy usuwaniu
odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3,4
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności określonej na probówce. Jeżeli
odczynnik jest przechowywany w innych warunkach niż wymienione, jego jakość musi zostać zweryfikowana
przez użytkownika. Nie oznacza to niestabilności produktu. Jednak, równocześnie z materiałem pochodzącym
od chorego, powinny być wykonane kontrole dodatnia i ujemna. W przypadku wystąpienia nieoczekiwanych
wyników barwienia, które nie mogą być wytłumaczone wariantami procedur laboratoryjnych oraz w przypadku
podejrzenia problemów z przeciwciałem, prosimy o kontakt z naszym serwisem technicznym.
Opracowanie próbki
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania skrawków tkankowych utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie. Wstępne opracowanie tkanek z zastosowaniem termicznego odkrywania
epitopów nie jest konieczne, ale optymalne wyniki uzyskuje się z zastosowaniem Dako Target Retrieval
Solution, High pH, nr kat. S 3308, Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, 10 mmol/L citrate buffer, pH 6.0 or
10 mmol/L Tris buffer, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Stwierdzono, że traktowanie tkanki proteinazą K jest
destrukcyjne dla epitopów.
Skrawki tkankowe nie powinny wysychać w czasie przygotowania lub po przeprowadzeniu barwienia
immunocytochemicznego. Jeśli w bieżącej procedurze barwienia nie stwierdzono stabilności rozcieńczonego
przeciwciała i ujemnej kontroli, zaleca się rozcieńczać przeciwciało bezpośrednio przed użyciem lub
rozcieńczać w Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Równocześnie z badaną próbką powinny być wykonane
kontrole dodatnia i ujemna.
Skrawki mrożeniowe i preparaty komórkowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania skrawków
mrożeniowych utrwalonych w acetonie (1).
Procedura barwienia
(111636-002)
Rozcieńczenie: Mysie przeciwciało monoklonalne przeciw ludzkiej cytokeratynie 10, nr kat. M 7002, może być
używane w zakresie rozcieńczeń od 1:50 do 1:100 kiedy jest stosowane do utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie skrawków ludzkiego nabłonka z użyciem 30-minutowej inkubacji w temperaturze
pokojowej z pierwotnymi przeciwciałami. Optymalne rozcieńczenie może się różnić w zależności od tkanki i
metody barwieniai i powinno być określone przez poszczególne laboratoria. Zalecaną kontrolą ujemną jest
M 7002/PL/SUA/24.03.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do stężenia mysich IgG odpowiadającego pierwotnym
przeciwciałom.
Uwidacznianie produktu reakcji: Zaleca się stosowanie DAKO LSAB™+/HRP kit, nr kat. K 0679 i DAKO
EnVision™+/HRP kits, nr kat. K 4004 i K 4006. Dla skrawków mrożeniowych i preparatów komórkowych dobrą
alternatywą jest Dako APAAP kit, nr kat. K 0670, jeśli trzeba uwzględnić obecność endogennej peroksydazy.
Procedurę barwienia należy przeprowadzić zgodnie z instrukcją dołączoną do zestawu wizualizacyjnego.
Swoiste ograniczenia produktu Przeciwciało znakuje wszystkie komórki w gruczołach łojowych w skrawkach mrożeniowych i tylko pojedyncze
komórki w błonie podstawnej gruczołów w skrawkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (1).
Charakterystyka reaktywności Barwienie ma charakter cytoplazmatyczny (1).
Normalne tkanki: Przeciwciało znakuje wszystkie nadpodstawne warstwy nabłonków, grasicze ciałka Hassala i
w różnym stopniu nabłonki pochwy, szyjki macicy i języka (1). Pojedyncze komórki barwią się również w
mieszkach włosowych, gruczołach łojowych i w dużych przewodach wydzielniczych gruczołów potowych (1).
Wszystkie nabłonki proste i gruczołowe, a także nabłonek przejściowy pęcherza moczowego i cewki moczowej,
nie wykazują reaktywności z przeciwciałem (1).
Tkanki zmienione patologicznie: Przeciwciało znakuje 21/26 (81%) przypadków raka płaskonabłonkowego
sromu, silniej w częściach bardziej zróżnicowanych (1). Różne raki gruczołowe nie wykazywały reaktywności z
przeciwciałem (1).
Wśród 268 biopsji szyjki macicy, w tym 55 normalnych, 20 ze zmianami śródnabłonkowymi małego stopnia
(LG-SIL), 8 ze zmianami śródnabłonkowymi dużego stopnia (HG-SIL) i 29 z rakiem inwazyjnym, średni odsetek
komórek wykazujących reakcję z CK 10 wynosił 43% w normalnych tkankach, 41% w LG-SIL, 17% w HG-SIL i
1% w rakach inwazyjnych. Użycie przeciwciała razem z CK 17 (Dako Mouse Monoclonal Anti-Cytokeratin 17, nr
kat. M 7046) ułatwiało różnicowanie próbek rakowych (2).
Piśmiennictwo
1. Ivanyi D, Asink A, Groeneveld E, Hageman PC, Mooi WJ, Heintz APM. New monoclonal antibodies
recognizing epidermal differentiation-associated keratins in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.
Keratin 10 expression in carcinoma of the vulva. J Pathol 1989;159:7-12.
2. Maddox P, Sasieni iiP, Szarewski A, Anderson M, Hanby A. Differential expression of keratins 10, 17, and
19 in normal cervical epithelium, cervical intraepithelial neoplasia, and cervical carcinoma. J Clin Pathol
1999;52:41-6.
3. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris,
editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press;
4. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24.
5. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. Subcellular Biochem;
Intermediate Filaments. Herrmann, Harris, editors. Plenum Press, New York; 1998; Volume 31. p. 205-60.
Objaśnienia symboli
(111636-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7002/PL/SUA/24.03.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17