Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 Nr kat

Monoclonal Mouse
Anti-Human PD-L1
Clone 22C3
Nr kat. M3653
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, są przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Te przeciwciała stosowane są do znakowania białka PD-L1 w prawidłowych i zmienionych
nowotworowo tkankach. Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o
badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
certyfikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Przeciwciała te przeznaczone są do stosowania po pierwotnym rozpoznaniu guza w konwencjonalnym
badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych barwień histochemicznych.
Synonimy antygenu
Ligand receptora programowanej śmierci 1 (1).
Streszczenie i
informacje ogólne
Wiązanie ligandów PD-1, PD-L1 i PD-L2, z receptorem PD-1 występującym na powierzchni limfocytów T
hamuje proliferację limfocytów T i wytwarzanie cytokin (2). W przypadku niektórych guzów występuje
zwiększona ekspresja ligandów PD-1, a sygnalizacja z udziałem tego szlaku moŜe przyczyniać się do
hamowania czynnego nadzoru immunologicznego nad guzami przez limfocyty T (3). Blokada interakcji białka
PD-1 z jego ligandami PD-L1 i PD-L2 prowadzi do zniesienia hamowania z udziałem szlaku PD-1 odpowiedzi
immunologicznej, w tym przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej (4).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje
do systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej w roztworze o pH 7,2 zawierającym Tris-HCl w
stęŜeniu 0,05 mol/L, azydek sodu w stęŜeniu 0,015 ml/L i albuminę surowicy wołowej w stęŜeniu 1%.
Klon: 22C3 (5). Izotyp: IgG1.
StęŜenie mysich IgG (mg/L): Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić, co nie ma wpływu na optymalne rozcieńczenie. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Zewnątrzkomórkowa domena ludzkiego białka PD-L1 (Phe19–Thr239) połączona z fragmentem ludzkiego
białka IgG1 (R&D Systems, nr. kat. 156-B7-100) (5)
Swoistość
W badaniach metodą Western blot rekombinowanego ludzkiego białka PD-L1 przeciwciało Monoclonal Mouse
Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, barwi prąŜek odpowiadający masie cząsteczkowej ok. 40 kDa (5).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny – azydek sodu (NaN3).
Azydek sodu zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydków metali w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien zweryfikować te
warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W przypadku uzyskania
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy
Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: Informacje dotyczące przeprowadzania obróbki wstępnej preparatów znajdują się w
instrukcji uŜytkowania roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005).
(129182-001)
P04435PL_01/M3653/2016.03 s. 1/4
Procedura barwienia
Są to wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz
sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. UŜytkownik
powinien ustalić działanie przeciwciała podczas korzystania z innych systemów barwienia ręcznego lub z
systemów zautomatyzowanych.
Rozcieńczenie: Zalecane rozcieńczenie przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3,
nr kat. M3653, to 1:50. Przeciwciało naleŜy rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent with
Background-Reducing Components (nr kat. S3022). Skrawki tkankowe poddane obróbce wstępnej inkubować
przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
Kontrola ujemna: Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
rozcieńczony do tego samego stęŜenia IgG1 co przeciwciało pierwotne. Jeśli stabilność rozcieńczonych
przeciwciał i kontroli ujemnej nie została potwierdzona w procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczenie tych
odczynników bezpośrednio przed uŜyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów
naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: W zalecanym układzie wizualizacji EnVision™ FLEX HRP inkubacja trwa 30 minut w
temperaturze pokojowej. Czas inkubacji produktu EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) (nr kat. K8021/K8022)
wynosi 30 minut w temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z wybranymi
systemami do wizualizacji.
Uwaga: Do wykonania HIER naleŜy uŜyć roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x),
nr kat K8005.
Czas inkubacji produktu DAB Enhancer (S196131-2) wynosi 5 minut w temperaturze pokojowej.
Barwienie kontrastowe: Zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision™ FLEX Hematoxylin
(nr kat. K8008/K8018). W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego
środka do zatapiania.
Kontrole: Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola dodatnia powinna obejmować
migdałki, a komórki / struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka działania”.
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe:
Odczyn błonowy zaobserwowano w przypadku komórek układu immunologicznego oraz komórek pochodzenia
nabłonkowego. Odczyn cytoplazmatyczny zauwaŜono w niektórych typach komórek, lecz nie zarejestrowano
go jako odczynu dodatniego. W tabeli 1 przedstawiono podsumowanie immunoreaktywności białka PD-L1 w
obrębie zalecanego panelu tkanek prawidłowych. Wszystkie tkanki zostały utrwalone w formalinie, zatopione w
parafinie i wybarwione z uŜyciem przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, zgodnie z
instrukcjami zamieszczonymi w ulotce dołączonej do opakowania. W obrębie analizowanych typów komórek i
tkanek nie uzyskano nieoczekiwanych wyników. Obserwowany odczyn był zgodny z danymi literaturowymi
dotyczącymi ekspresji PD-L1 IHC w tkankach prawidłowych (1, 2).
Tabela 1: Podsumowanie reaktywności przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone
22C3, w tkankach prawidłowych
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Grasica (3)
(129182-001)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
3/3 Rdzeń
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Piersi (3)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
0/3
Gruczoł krokowy (2)
2/2 Nabłonek
Płuca (3)
3/3 Makrofagi
Jajniki (3)
0/3
Przełyk (3)
0/3
Jądra (3)
0/3
Przysadka mózgowa (3)
1/3 Przedni płat
przysadki
Jelito cienkie (3)
0/3
Komórki międzybłonka
(2)
0/2
1/3 Tylny płat przysadki
Przytarczyce (3)
1/3 Nabłonek
gruczołowy
Macica (3)
0/3
Skóra (3)
0/3
Mięsień sercowy (3)
0/3
Szpik kostny (3)
3/3 Megakariocyty
Mięśnie szkieletowe (3)
0/3
Szyjka macicy (3)
1/3 Komórki
nabłonkowe
Migdałki (3)
3/3 Nabłonek krypt
migdałków
Śledziona (3)
2/3 Makrofagi
2/3 Makrofagi
Ślinianki (3)
0/3
Mózgowie (3)
0/3
Tarczyca (3)
0/3
MóŜdŜek (3)
0/3
Trzustka (3)
0/3
P04435PL_01/M3653/2016.03 s. 2/4
Nadnercza (3)
0/3
Nerka (3)
1/3 Nabłonek kanalików
Nerwy obwodowe (3)
0/3
OkręŜnica (3)
1/3 Limfocyty
Wątroba (3)
1/3 Makrofagi
1/3 Hepatocyty
śołądek (3)
2/3 Limfocyty
1/3 Gruczoły Ŝołądkowe
1/3 Makrofagi
Tkanki nieprawidłowe:
Odczyn błonowy zaobserwowano w przypadku komórek układu immunologicznego oraz komórek
pochodzenia nabłonkowego. Odczyn cytoplazmatyczny zauwaŜono w niektórych typach komórek, lecz
nie zarejestrowano go jako odczynu dodatniego. W tabeli 2 przedstawiono podsumowanie
immunoreaktywności białka PD-L1 w obrębie panelu tkanek zmienionych nowotworowo. Wszystkie
tkanki zostały utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie i wybarwione z uŜyciem przeciwciała
Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w ulotce
dołączonej do opakowania. W obrębie analizowanych próbek guza nie zaobserwowano
nieoczekiwanych wyników. Obserwowany odczyn był zgodny z danymi literaturowymi dotyczącymi
ekspresji PD-L1 IHC w tkankach nowotworowych (1–4).
Tabela 2: Podsumowanie reaktywności przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone
22C3, w tkankach zmienionych nowotworowo
Lokalizacja
Wykazujące ekspresję
PD-L1/wszystkie
N=159
Chłoniak anaplastyczny z duŜych
komórek
Węzły chłonne
0/1
Chłoniak Hodgkina
Węzły chłonne
2/2
Chłoniak nieziarniczy
Węzły chłonne
1/1
Chłoniak rozlany z komórek B
Węzły chłonne
0/4
Typ guza
Chłoniak
Chrzęstniakomięsak
Kości
0/1
Jama nosowa
0/1
Odbytnica
0/1
Glejak
Mózg
0/1
Grasiczak
Śródpiersie
1/1
Guz chromochłonny
Nadnercza
0/1
Guz z komórek wyspowych
Trzustka
0/1
Czerniak
Gwiaździak
Mózgowie
0/3
Kostniakomięsak
Kości
0/2
Międzybłoniak
Otrzewna
0/1
Mięsak maziówkowy
Mięsak prąŜkowanokomórkowy
Mięśniakomięsak gładkokomórkowy
(129182-001)
Jama miednicy
0/1
Gruczoł krokowy
0/1
Przestrzeń zaotrzewnowa
0/1
Tkanki miękkie, typ zarodkowy
0/1
Pęcherz
0/1
Tkanki miękkie, ściana klatki piersiowej
0/1
Nasieniak
Jądra
0/2
Nerwiak zarodkowy
Przestrzeń zaotrzewnowa
0/1
Nerwiakowłókniak
Tkanki miękkie, odcinek krzyŜowy
0/1
Oponiak
Mózg
0/2
Prymitywny nowotwór
neuroektodermalny (PNET)
Przestrzeń zaotrzewnowa
0/1
Rak
Jama nosowo-gardłowa; rak jamy
nosowo-gardłowej
0/1
Rak drobnokomórkowy
Płuca
0/1
P04435PL_01/M3653/2016.03 s. 3/4
Rak gruczołowy
Rak kory nadnerczy
Głowa i szyja; podniebienie twarde
0/1
Gruczoł krokowy
0/5
Gruczoł ślinowy/ślinianka przyuszna
0/2
Jajniki
0/1
Jajniki; rak endometrioidalny
0/1
Jajniki; rak surowiczy
0/1
Jajniki; rak śluzowy
0/1
Jelito cienkie
0/2
Macica; rak endometrium
0/3
Macica; rak jasnokomórkowy
0/1
Odbytnica
0/4
OkręŜnica
0/5
OkręŜnica; przerzuty do wątroby
0/1
OkręŜnica; rak śluzowy
0/1
Pęcherzyk Ŝółciowy
1/5
Piersi; rak przewodowy in situ
0/2
Piersi; rak przewodowy inwazyjny
0/7
Piersi; rak przewodowy inwazyjny z
przerzutami do węzłów chłonnych
0/1
Płuca
1/4
Przełyk
0/1
Przewód pokarmowy; przerzuty do płuc
0/1
Szyjka macicy; typ wewnątrzszyjkowy
0/1
Tarczyca; rak brodawkowaty
0/3
Tarczyca; rak pęcherzykowobrodawkowaty
0/1
Tarczyca; rak pęcherzykowy
0/1
Trzustka
0/2
Trzustka; rak przewodowy
0/3
Wyrostek robaczkowy
0/1
śołądek
0/6
śołądek; rak śluzowy
0/1
Nadnercza
0/1
Rak nerkowokomórkowy
Rak brodawkowaty
Nerka
0/1
Rak jasnokomórkowy
Nerka
0/6
Rak płaskonabłonkowy
Rak podstawnokomórkowy
Rak przejściowokomórkowy
0/2
Macica
0/1
Płuca
1/2
Przełyk
0/7
Rak płaskonabłonkowy przełyku ,
przerzutowy do węzłów chłonnych
0/1
Skóra
0/2
Szyjka macicy
2/5
Skóra
0/1
Nerka
0/1
Pęcherz
0/6
Rak rdzeniowy
Tarczyca
0/1
Rak wątrobowokomórkowy
Wątroba
0/5
OkręŜnica
0/1
Rak okręŜnicy z komórek
sygnetowych, przerzutowy do jajników
0/1
Jelito cienkie
0/1
Rak z komórek sygnetowych
Rak z komórek śródmiąŜszowych
(129182-001)
Głowa i szyja
Odbytnica
0/1
OkręŜnica
0/1
P04435PL_01/M3653/2016.03 s. 4/4
Rak zarodkowy
Piśmiennictwo
Jądra
0/1
Rdzeniak zarodkowy
Mózg
0/1
Spermatocytoma
Jądra
0/2
Struniak
Jama miednicy
0/1
Wątrobiak zarodkowy
Wątroba
0/1
Wyściółczak
Mózg
0/1
1.
2.
3.
4.
5.
Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol
2007(19); 7:813.
Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed
Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol
2003;170:1257.
Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a
favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89:181.
Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell
Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19:3462-3473.
Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-PD-L1 antibody clone 22C3.
D29539/rev01/C22282, 2015
Wydanie 03/16
(129182-001)
P04435PL_01/M3653/2016.03 s. 5/4