BBLTM CHROMagarTM Candida Medium

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-257480.05
wer.: July 2014
BBLTM CHROMagarTM Candida Medium
PRZEZNACZENIE
BBL CHROMagar Candida Medium to podłoże do izolacji i identyfikacji Candida albicans, C.
tropicalis, oraz C. krusei z próbek klinicznych. Działa ono inhibicyjnie na bakterie i może także
służyć jako selektywne podłoże izolacyjne dla innych gatunków drożdży lub grzybów
strzępkowych.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
BBL CHROMagar Candida Medium jest selektywnym, różnicującym podłożem
przeznaczonym do izolowania grzybów. Dzięki zawartości substancji barwnikowych,
powstające na tym podłożu kolonie C. albicans, C. tropicalis i C. krusei mają różne
zabarwienie, co umożliwia bezpośrednie wykrycie tych gatunków drożdży na płytce
izolacyjnej.1-6 Kolonie C. albicans mają zabarwienie jasnozielone lub zielone, kolonie C.
tropicalis są niebieskozielonkawe do metalicznie niebieskich, a kolonie C. krusei są
jasnoróżowe z białawymi brzegami. Inne gatunki drożdży mogą tworzyć kolonie o ich
naturalnym zabarwieniu (kremowe), bądź różowe lub liliowe o różnej intensywności [np.
Candida (Torulopsis) glabrata i inne gatunki]. Dodatkową zaletą opisywanego podłoża jest
łatwe wykrywanie mieszanych hodowli drożdży dzięki temu, że ich kolonie mają różne
kolory.1,5,6
Źródłem składników odżywczych w podłożu BBL CHROMagar Candida Medium są specjalnie
dobrane peptony. Zastrzeżona mieszanka barwników składa się ze sztucznych substratów
(chromogenów), które w wyniku rozkładu przez określone enzymy tworzą związki o różnym
zabarwieniu. Umożliwia to rozróżnienie pewnych gatunków bądź wykrycie pewnych grup
drobnoustrojów przy ograniczeniu testów potwierdzających do minimum. Chloramfenikol
hamuje wzrost większości zanieczyszczających bakterii.
Podłoże CHROMagar Candida Medium zostało opracowane przez A. Rambacha i jest
sprzedawane przez firmę BD Diagnostic Systems na podstawie licencji CHROMagar, Paryż,
Francja.
ODCZYNNIKI
BBL CHROMagar Candida Medium
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Chromopepton
10,0 g
Glukoza
20,0
Mieszanka chromogenów 2,0
Chloramfenikol
0,5
Agar
15,0
pH 6,0 ± 0,3
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
PA-257480.05
-1-
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki
inkubuje się w atmosferze tlenowej przez 20–48 godzin w temperaturze 35 ± 2°C. Należy
zauważyć, pełne zabarwienie kolonii uzyskuje się dopiero po 42 godzinach inkubacji.
Szczepy bakteryjne
Candida albicans ATCC 60193
Candida albicans ATCC 10231
Candida krusei ATCC 34135
Candida tropicalis ATCC 1369
Candida tropicalis ATCC 9968
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Bez posiewu
BBL CHROMagar Candida Medium
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie jasnozielone lub
zielone
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie jasnozielone lub
zielone
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie różowe, duże,
płaskie, z białawymi brzegami
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie szaroniebieskie
do niebieskozielonkawych lub metalicznie niebieskie, w
otaczającym podłożu mogą występować fioletowe
obwódki
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie szaroniebieskie,
mogą występować metaliczne obwódki
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu
Bezbarwne do jasnobeżowego, przejrzyste
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BBL CHROMagar Candida Medium (płytki Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane pod
kątem obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Opisywane podłoże jest wykorzystywane do izolowania i bezpośredniej identyfikacji Candida
albicans, C. tropicalis i C. krusei ze wszystkich typów próbek pochodzenia klinicznego. Może
ono być także używane do izolowania innych grzybów (zobacz także CHARAKTERYSTYKA
WYDAJNOŚCI I OGRANICZENIA PROCEDURY).
Procedura testowa
Zaszczepić próbkę do izolacji na powierzchni podłoża. Jeżeli próbka jest hodowana
bezpośrednio z wymazówki, należy delikatnie przetoczyć wymazówkę po niewielkiej powierzchni
na krawędzi płytki, a następnie rozprowadzić materiał ezą z tego obszaru. Płytki inkubuje się w
atmosferze tlenowej, w temperaturze 35 ± 2°C, przez 20–40 godzin, w położeniu odwróconym.
PA-257480.05
-2-
Pełne zabarwienie kolonii Candida uzyskuje się dopiero po 42 godzinach inkubacji. Przed
inkubacją oraz podczas niej należy ograniczyć do minimum ekspozycję na światło.
Rzadko występujące gatunki, takie jak Cryptococcus neoformans i grzyby nitkowate, wymagają
do optymalnego wzrostu dłuższego czasu inkubacji, a czasem także niższej temperatury
inkubacji. W związku z tym w przypadku podejrzenia obecności grzybów innych niż rodzaj
Candida należy wykonać także posiew na płytkę z innym podłożem dla grzybów, np. BD
Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol i inkubować ją w temperaturze
20–25°C.
Wyniki
Po inkubacji na płytkach z posiewami próbek zawierających grzyby wystąpi wzrost. Zaleca się
odczytywać płytki na białym tle. W przypadku obecności grzybów z rodzaju Candida kolonie
będą miały zabarwienie jasnozielone lub zielone (C. albicans), jasnoróżowe z białawymi
brzegami (C. krusei) lub niebieskozielonkawe do metalicznie niebieskich (C. tropicalis). Kolonie
innych gatunków z rodzaju Candida oraz innych drożdży przyjmują zabarwienie od różowego
do fioletowego o różnej intensywności, a jeśli nie rozkładają żadnych substratów
chromogennych, przyjmują swoje naturalne zabarwienie (kremowe lub białe).
Dane z różnych badań wskazują na to, że w przypadku wykrycia Candida albicans, C.
tropicalis lub C. krusei nie są konieczne dalsze testy identyfikacyjne.1-3
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
Stosowanie podłoża CHROMagar Candida Medium do bezpośredniej identyfikacji C. albicans,
C. krusei i C. tropicalis zostało udokumentowane w szeregu badań, w których przedstawiono
także dodatkowe informacje na temat zalecanych procedur.1-5 Jabra-Rizk i wsp. przeprowadzili
niedawno badanie skuteczności podłoża BBL CHROMagar Candida Medium.4
Candida (Torulopsis) glabrata zazwyczaj tworzy na opisywanym podłożu kolonie fioletowe lub
ciemnofioletowe.2 Zaleca się jednak, aby identyfikację drobnoustrojów tworzących kolonie tego
koloru potwierdzać dodatkowymi testami biochemicznymi, gdyż kolonie o takim zabarwieniu
może tworzyć wiele gatunków drożdży.
Powstające na opisywanym podłożu kolonie jasnoróżowe lub fioletowe o różnej intensywności,
a także kolonie o naturalnym, kremowym zabarwieniu, należy zidentyfikować za pomocą
standardowych metod.7,8
Na opisywanym podłożu można także wykonać izolację drożdży innych niż wyżej wymienione
gatunki oraz grzybów nitkowatych, pod warunkiem inkubacji w odpowiedniej temperaturze i
przez odpowiedni czas dla tych drobnoustrojów.
Ze względu na to, że pleśnie i inne grzyby nitkowate mogą metabolizować substraty
chromogenne, zabarwienie tworzone przez te drobnoustroje na podłożu BBL CHROMagar
Candida Medium może różnić się od kolorów występujących na innych podłożach
przeznaczonych do hodowli grzybów. Nie należy wykonywać tradycyjnej identyfikacji
morfologicznej w oparciu o cechy wzrostu grzybów nitkowanych na tym podłożu.
Istnieją doniesienia, że C. dubliniensis przy pierwszej izolacji na podłożu BBL CHROMagar
Candida Medium tworzy kolonie o charakterystycznym, ciemnozielonym zabarwieniu.9-11
Jednak hodowle pochodne mogą nie zachować tej właściwości. Potwierdzenie obecności C.
dubliniensis wymaga wykonania dodatkowych testów fenotypu i genotypu.
Przed użyciem podłoża BBL CHROMagar Candida Medium po raz pierwszy zaleca się
przyćwiczyć typowy wygląd kolonii przy użyciu określonych szczepów C. albicans, C. krusei i
C. tropicalis, np. szczepów wymienionych w części KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ
UŻYTKOWNIKA.
PIŚMIENNICTWO
1. Odds, F.C., and R. Bernaerts. 1994. CHROMagar Candida Medium, a new differential isolation
medium for presumptive identification of clinically important Candida species. J. Clin. Microbiol. 32:
1923-1929.
2. Pfaller, M.A., A. Huston, and S. Coffman. 1996. Application of CHROMagar Candida Medium for
rapid screening of clinical specimens for Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, and
Candida (Torulopsis) glabrata. J. Clin. Microbiol. 34: 56-61.
PA-257480.05
-3-
3. Beighton, D., R. Ludford, D.T. Clark, S.R. Brailsford, C.L. Pankhurst, G.F. Tinsley, J. Fiske, D. Lewis,
B. Daly, N. Khalifa , V. Marren, and E, Lynch. 1995. Use of CHROMagar Candida Medium medium
for isolation of yeasts from dental samples. J. Clin. Microbiol. 32: 3025-3027.
4. Jabra-Rizk, M.A. et al. 2001. Evaluation of a reformulated CHROMagar Candida Medium. J. Clin.
Microbiol. 30: 2015-2016.
5. Bauters, T.G., and Nelis, H.J. 2002. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration
methods for detection of four Candida species. J. Clin. Microbiol. 40: 1838-1839.
6. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 1998. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 10th
ed. Mosby, Inc., St. Louis.
8. Larone, D.H. 1995. Medically important fungi. A guide to identification. ASM Press, Washington,
D.C.
9. Schoofs, A., F.C. Odds, R. Coleblunders, M. Ieven, and H. Goosens. 1997. Use of specialised
isolation media for recognition and identification of Candida dubliniensis isolates from HIV-infected
patients. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 16: 296-300.
10. Kirkpatrick, W.R., S.G. Revankar, R.K. McAtee, J.L. Lopez-Ribot, A.W. Fothergill, D.I. McCarthy,
S.E. Sanche, R.A. Cantu, M.G. Rinaldi, and T.F. Patterson. 1998. Detection of Candida dubliensis in
oropharyngeal samples from Human Immunodeficiency Virus-infected patients in North America by
primary CHROMagar Candida Medium screening and susceptibility testing of isolates. J. Clin.
Microbiol. 36: 3007-3012.
11. Odds, F.C., L. Van Nuffel, and G. Dams. 1998. Prevalence of Candida dubliensis isolates in a yeast
stock collection. J. Clin. Microbiol. 36: 2869-2873.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BBL CHROMagar Candida Medium
Nr katalogowy 257480 Gotowe podłoża na płytkach, cpu
20
Nr katalogowy 254106 Gotowe podłoża na płytkach, cpu
120
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. © 2014 BD
PA-257480.05
-4-