AST/GOT - "Aqua-Med" ZPAM – KOLASA sp.j

AST/GOT
ODCZYNNIKI
BIOLABO
Metoda jednoodczynnikowa (IFCC)
Odczynnik do ilościowego oznaczania aktywności aminotransferazy asparaginianowej
(AST) [EC 2.6.1.1] w ludzkiej surowicy i osoczu
BIOLABO
PRODUCENT:
WYŁĄCZNY DYSTRYBUTOR:
BIOLABO SA,
02160, Maizy, France
AQUA-MED ZPAM – KOLASA sp. j.
Wólczańska 212, 90-531 Łódź
NR KAT. R80025 R1 5 x 10 mL
mL
NR KAT.
NR KAT. 80125 R1 8 x 30
80225 R1 10 x 125 mL
AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1) (2)
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
AST jest obecna we wszystkich tkankach ciała, ale największą
aktywność wykazuje w wątrobie, sercu, mięśniach szkieletowych i
erytrocytach. Minimalna aktywność występuje w skórze, nerkach i
trzustce. Aczkolwiek surowicze poziomy AST i ALT podwyższają się w
każdym procesie naruszającym
integralność komórek wątroby
(zapalenie wątroby, martwica wątroby, marskość), podwyższona
aktywność AST w surowicy lub osoczu pojawia się w więcej niż w 97%
przypadków zawału mięśnia sercowego. Poziomy AST (i czasami ALT)
są również podwyższone w postępującej dystrofii mięśniowej, zatorze
płuc, w ostrym zapaleniu trzustki.
Do zawartości butelki dodać szybko wodę demineralizowaną w ilości
podanej na etykiecie.
ZASADA (4) (5)
Metoda opracowana przez Karmena i in. i zoptymalizowana przez Henry
i in. (z zastosowaniem zmodyfikowanych zaleceń IFCC).
Schemat reakcji jest następujący :
L-Asparaginian + 2-Ketoglutaran
Szczawiooctan + NADH + H
+
AST
Szawiooctan + L-Glutaminian
MDH
L-Jabłczan + NAD
+
Spadek absorbancji związany z przejściem NADH do NAD
proporcjonalny do aktywności AST w próbce jest mierzony w 340 nm.
Nieobecność P5P pozwala na lepszą stabilność odczynnika roboczego.
+
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
ODCZYNNIK ROBOCZY
EDTA
2-Ketoglutaran
L-Asparaginian
MDH
LDH
NADH
Bufor Tris
pH w 30°C
Konserwant
5 mmol/L
12 mmol/L
200 mmol/L
495 Ul/L
820 Ul/L
< 0.18 mmol/L
80 mmol/L
7.80 + 0.1
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku in vitro.
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć starannie dużą
ilością wody i zasięgnąć porady lekarza.
• Odczynnik zawiera azydek sodowy (stężenie < 0.1%), który może reagować z
miedzią i ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą ilością wody.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej.
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym kraju.
Wszystkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne – zgodnie
z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie środki
ostrożności. Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
Wymieszać delikatnie i przed użyciem odczynnika poczekać do
całkowitego rozpuszczenia (ok. 2 minuty).
NR KAT. R80025 : Używać nieostrego narzędzia dla usunięcia
aluminiowego kapsla.
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Przechowywać w 2-8°C i chronić przed dostępem światła.
• Nie otwarty :
Odczynnik jest trwały do daty ważności na etykiecie.
• Raz otwarty :
Odczynnik roboczy jest trwały przez minimum 60 dni, jeśli jest wolny od
kontaminacji.
Wyrzucić odczynnik, jeśli jest mętny lub jeśli absorbancja w 340
nm < 1.000.
Zestaw może być transportowany minimum 1 tydzień w temperaturze
pokojowej.
POBIERANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI (2)
Niezhemolizowana surowica lub heparynizowane osocze.
AST jest trwały w surowicy lub osoczu przez :
• 24 godziny w temperaturze pokojowej
• 28 dni w 2-8°C
• minimum przez 1 rok w –20°C.
Dodanie fosforanu pirydoksalu (0.1 mM) poprawia stabilność w
temperaturze pokojowej do 7 dni.
INTERFERENCJE (3) (6)
Hemoglobina : Dodatnia interferencja powyżej 150 µmol/L.
Hemoliza :
Dodatnia interferencja ze względu na ALT uwolnioną z
erytrocytów.
Zmętnienie :
Brak interferencji.
Bilirubina całk. : Ujemna interferencja powyżej 20 mg/dl.
Podczas etapu preinkubacji LDH zawarty w odczynniku pozwala na
redukcję endogennych pirogronianów, które dałyby dodatnią
interferencję.
Obszerniejszy przegląd czynników wpływających na to oznaczenie
znajduje się w publikacji Young D.S.
NIZBĘDNIE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
1. Podstawowe wyposażenie medycznego laboratorium analitycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
3. Woda demineralizowana do przygotowania odczynnika.
Wersja : AT 80025 08 04 2005
KALIBRACJA
PROCEDURA MANUALNA
Wyniki będą zależały od dokładności kalibracji aparatu, czasu pomiaru
spadku absorbancji, przestrzegania stosunku odczynnik/próbka i kontroli
temperatury.
Zaleca się używanie
teoretycznego współczynnika kalibracji lub
wieloparametrowego kalibratora spójnego pomiarowo
z metodą
referencyjną czy materiałem referencyjnym (§ OBLICZENIA).
Pozwolić aby odczynnik i próbki osiągnęły temperaturę pokojową.
Odpipetować do termostatowanej kuwety o d= 1 cm :
Odczynnik
Doprowadzić do 37°C (30°C), następnie dodać :
100 µL
Próbkę
KONTROLA JAKOŚCI
•
BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe) NR KAT. R95010
•
BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne ) NR KAT. R95011
•
Inne surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody
•
Zewnętrzny program kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz w ciągu 24 godzin.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą samą kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą
surowicę kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, zweryfikować parametry
oznaczenia : długość fali, temperaturę, stosunek próbka/odczynnik,
czas pomiaru spadku absorbancji, współczynnik kalibracji.
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
odczynnika i wykonać oznaczenie ponownie.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z działem
technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
Wymieszać. Włączyć minutnik. Odczytać absorbancję początkową po 1 minucie
w 340 nm.
Odczytywać absorbancję ponownie co każdą minutę przez 3 minuty.
Obliczyć spadek absorbancji na minutę (∆Abs/min).
Uwaga : Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na
życzenie. Skontaktować się z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIE
Obliczyć wynik następująco :
Z teoretycznym współczynnikiem :
IU/L = (∆Abs/min) x 1746
µKat/L =
IU/L
60
Za pomocą surowiczego multikalibratora :
Aktywność AST =
(∆Abs/min) badanej
x Stężenie kalibratora
(∆Abs/min) kalibratora
WARTOŚCI OCZEKIWANE (1) (2)
IU/L
w 30°C
w 37°C
Noworodki
25 - 75
39 - 117
Niemowlaki
15 - 60
23 - 94
(1)
Dorośli
8 - 20
13 - 31
(2)
(3)
PIŚMIENNICTWO
Każde laboratorium powinno ustalić swoje własne zakresy wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
(4)
(5)
(6)
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Poziom
Wewnątrz
prawidłowy
serii
N = 30
1 mL
Poziom
wysoki
Między
seriami
N = 33
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 652-657
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 76-79.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p. 3-68 to 3-79
HENRY R. J. and al., Am J clin Path (1960), 34, 381-398
IFCC Method for L-Aspartate aminotransferase. J Clin. Chem. Clin.
Biochem.(1986), 24, p.497-510.
M. MATHIEU and col. SFBC. Comité de Standardisation. Recommandations
pour la mesure de l'activité catalytique de l'Aspartate aminotransférase dans
le sérum à 30°C. Ann. Biol. Clin. 1976. 34. 291-297
Wyprodukowano we Francji
Średnia IU/L
31.6
161.1
Średnia IU/L
34.4
179.3
SD IU/L
1.22
3.06
SD IU/L
0.58
2.62
CV %
3.85
1.90
CV %
1.69
1.46
Granica wykrywalności : ok. 3 IU/L
Czułość dla 17 IU/L : ok. 0.010 Abs/min w 340 nm.
Badania porównawcze z komercyjnie dostępnym odczynnikiem :
y = 1.0265 x + 0.9906
r = 0.9983
LINIOWOŚĆ
Oznaczenie jest liniowe do 350 IU/L.
Jeśli ∆Abs/min > 0.200. zmniejszyć objętość próbki lub rozcieńczyć ją
roztworem soli i powtórzyć oznaczenie
biorąc pod uwagę przy
obliczaniu wyniku współczynnik rozcieńczenia. Liniowość będzie
zależała od stosunku próbka/odczynnik.
Wersja : AT 80025 08 04 2005