Obliczenia do ćwiczeń 3

TABELA 1A: Krzywa kinetyczna Nr 1
Obliczanie prędkości początkowej vo1 reakcji katalizowanej, poprzez matematyczne
wyliczenie współczynnika kierunkowego k1 stycznej do krzywej kinetycznej przy t = 0,
dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
w mieszaninie inkubacyjnej
[S]o1 = ............mM, w mieszaninie inkubacyjnej M1
2
ti
[min]
ti
0,5
0,25
1,0
1,00
1,5
2,25
2,0
4,00
2,5
6,25
3,0
9,00
A470
xi
=
A470
 l
S0 - xi
S0
yi· ti
S0 - xi
yi ln
S0
2
Σti =
Σyi · ti =
………..
………………..
.
Prawo Lamberta Beera:
.
A=ε c l
TG
470
 26,6 mM cm-1
Współczynnik absorbancji molowej tetragwajakolu:
Grubość warstwy mierzonego roztworu:
l = 1 cm
xi
Stężenie tetragwajakolu (produktu reakcji) po czasie t i :
=
A470
 l mM
Dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o1 = ........................... mM H2O2,
współczynnik kierunkowy k1 stycznej do krzywej kinetycznej (gdy t = 0):
k
yt =
t
i i
2
i
------------------ =
prędkość początkowa reakcji vo1
.
vo1 = - k1 [S]o1 = ........................................ mM TG min
-1
1
TABELA 1B: Krzywa kinetyczna Nr 2
Obliczanie prędkości początkowej vo2 reakcji katalizowanej, poprzez wyliczenie
współczynnika kierunkowego k2 stycznej do krzywej kinetycznej przy t = 0, dla
początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o2 = ............mM, w mieszaninie inkubacyjnej M-2
ti
[min]
2
ti
0,5
0,25
1,0
1,00
1,5
2,25
2,0
4,00
2,5
6,25
3,0
9,00
A470
xi
=
A470
 l
S0 - xi
S0
S0 - xi
yi ln
S0
2
Σi =
yi· ti
Σyi · ti =
.
Prawo Lamberta Beera:
.
A=ε c l
TG
470
 26,6 mM cm-1
Współczynnik absorbancji molowej tetragwajakolu:
Grubość warstwy mierzonego roztworu:
l = 1 cm
Stężenie tetragwajakolu (produktu reakcji) po czasie t i :
xi
=
A470
 l mM
Dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o2 = ........................... mM H2O2,
współczynnik kierunkowy k2 stycznej do krzywej kinetycznej (gdy t = 0):
k
yt =
t
i i
2
i
------------------ =
prędkość początkowa reakcji vo2
.
vo2 = - k2 [S]o2 = ........................................ mM TG min
-1
2
TABELA 1C: Krzywa kinetyczna Nr 3
Obliczanie prędkości początkowej vo3 reakcji katalizowanej, poprzez wyliczenie
współczynnika kierunkowego k3 stycznej do krzywej kinetycznej przy t = 0, dla
początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o3 = ............mM, w mieszaninie inkubacyjnej M-3
ti
[min]
2
ti
0,5
0,25
1,0
1,00
1,5
2,25
2,0
4,00
2,5
6,25
3,0
9,00
xi
A470
=
A470
 l
S0 - xi
S0
yi· ti
S0 - xi
yi ln
S0
2
Σi =
Σyi · ti =
.
Prawo Lamberta Beera:
.
A=ε c l
TG
470
 26,6 mM cm-1
Współczynnik absorbancji molowej tetragwajakolu:
Grubość warstwy mierzonego roztworu:
l = 1 cm
xi
Stężenie tetragwajakolu (produktu reakcji) po czasie t i :
=
A470
 l mM
Dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o3 = ........................... mM H2O2,
współczynnik kierunkowy k3 stycznej do krzywej kinetycznej (gdy t = 0):
k
yt =
t
i i
2
i
------------------ =
prędkość początkowa reakcji vo3
.
vo3 = - k3 [S]o3 = ........................................ mM TG min
-1
3
TABELA 1D: Krzywa kinetyczna Nr 4
Obliczanie prędkości początkowej vo4 reakcji katalizowanej, poprzez wyliczenie
współczynnika kierunkowego k4 stycznej do krzywej kinetycznej przy t = 0, dla
początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o4 = ............mM, w mieszaninie inkubacyjnej M-4
ti
[min]
2
ti
0,5
0,25
1,0
1,00
1,5
2,25
2,0
4,00
2,5
6,25
3,0
9,00
A470
xi
=
A470
 l
S0 - xi
S0
S0 - xi
yi ln
S0
yi· ti
2
Σi =
Σyi · ti =
.
Prawo Lamberta Beera:
.
A=ε c l
TG
470
 26,6 mM cm-1
Współczynnik absorbancji molowej tetragwajakolu:
Grubość warstwy mierzonego roztworu:
l = 1 cm
xi
Stężenie tetragwajakolu (produktu reakcji) po czasie t i :
=
A470
 l mM
Dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o4 = ........................... mM H2O2,
współczynnik kierunkowy k4 stycznej do krzywej kinetycznej (gdy t = 0):
k
yt =
t
i i
2
i
------------------ =
więc prędkość początkowa reakcji vo4
.
v04 = - k4 [S]o4 = ........................................ mM TG min
-1
4
TABELA 1E: Krzywa kinetyczna Nr 5
Obliczanie prędkości początkowej (v o)5 reakcji katalizowanej, poprzez wyliczenie
współczynnika kierunkowego k5 stycznej do krzywej kinetycznej przy t = 0, dla
początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o5 = ............mM, w mieszaninie inkubacyjnej M-5
ti
[min]
2
ti
0,5
0,25
1,0
1,00
1,5
2,25
2,0
4,00
2,5
6,25
3,0
9,00
A470
xi
=
A470
 l
S0 - xi
S0
S0 - xi
yi ln
S0
2
Σi =
yi· ti
Σyi · ti =
.
Prawo Lamberta Beera:
.
A=ε c l
TG
470
 26,6 mM cm-1
Współczynnik absorbancji molowej tetragwajakolu:
Grubość warstwy mierzonego roztworu:
l = 1 cm
Stężenie tetragwajakolu (produktu reakcji) po czasie t i :
xi
=
A470
 l mM
Dla początkowego stężenia nadtlenku wodoru (substratu reakcji)
[S]o5 = ........................... mM H2O2,
współczynnik kierunkowy k5 stycznej do krzywej kinetycznej (gdy t = 0):
k
yt =
t
i i
2
i
------------------ =
więc prędkość początkowa reakcji vo5
.
vo5 = - k5 [S]o5 = ........................................ mM TG min
-1
5
TABELA 3A: Obliczanie wartości stałych K m , Vmax i kkat
z równania prostej Lineweavera-Burka metodą najmniejszych kwadratów
-1
[S]0 = xi
x
i
V01 = yi
y
=
i
2
xi
x
=
Równanie prostej:
2
i
xi yi
x
=
i
yi =
y=ax+b
Równanie Lineweavera-Burka:
1 K
1 1
 m

V
S
0 V
m
a
x []
0 V
m
a
x
Km
1
a=
b=
Vmax
Vmax
Obliczenia:
Ilość prób: N =
N
x
x
i 1
i
=
N
2
x 
N
y
y
i1
i
=
N
Nx y =
N
x  y  Nx y
a=
i1
i
i
N
x
i1
2
i
2
=
 Nx
b = y  ax =
1
-1
= ……………………… mM min
b
 a = ……………………… mM
Vmax 
Km = Vmax
[E] = ……… M = ……………….mM
kkat =
Skuteczność=
Vmax
-1
-1
= ………………………. min = ……………… s
[E ]
k kat
-1
-1
-1
-1
= …………………mM s = ……………… M s
Km
6