Lab 6

Ćwiczenie 6: Flora fizjologiczna i patogenna człowieka cz. II.
Chemioterapeutyki.
1. Oznaczanie wrażliwości bakterii na antybiotyki (antybiogram) i sulfonamidy.
Studenci pracują w parach.
a) przygotować gęstą zawiesinę bakterii (posiewy własne) w 0,5 ml soli fizjologicznej
b) 0,1 ml przygotowanej zawiesiny posiać murawą na płytce z podłożem LA
c) posługując się pensetą umieścić na płytce krążki bibułowe nasycone antybiotykami
i krążek nasączony sulfonamidem (odległość pomiędzy poszczególnymi krążkami
powinna wynosić nie mniej niż 2 cm)
d) płytki pozostawić na dwie godziny w temperaturze pokojowej (w tym czasie
chemioterapeutyki dyfundują do podłoża)
e) inkubować płytki 24 godziny w temperaturze 37°C
f) obserwując wzrost bakterii w sąsiedztwie krążków z antybiotykiem zapisać
antybiogram szczepu
g) obserwować wzrost wokół krążków z sulfonamidem
2. Oznaczanie najmniejszej dawki hamującej antybiotyku MIC. Metoda probówkowa.
MIC- ang. minimal inhibitory concentration
Studenci pracują w parach.
a) każda grupa otrzymuje w statywie: 11 opisanych probówek z 5 ml bulionu
odżywczego (rodzaj antybiotyku i stężenie podane na probówce), płytkę Petriego z
nocną hodowlą E. coli lub Bacillus subtilis, sól fizjologiczną, wodę jałową, 2 puste
jałowe probówki oraz Standard McFarlanda (0,5 McF)
b) opisać probówki nazwą otrzymanego szczepu (E lub B)
c) z płytki pobrać jałowo 2-3 kolonie bakteryjne i zawiesić w soli fizjologicznej w pustej
probówce. Porównać ze Standardem McFarlanda, ewentualnie rozcieńczyć lub
dodać masy bakteryjnej do uzyskania zawiesiny odpowiadającej zmętnieniu 0,5 w
skali McFarlanda
d) rozcieńczyć tak przygotowaną zawiesinę 1:10 wodą w drugiej pustej probówce.
e) zaszczepić probówki z antybiotykiem (łącznie z probówką oznaczoną K - kontrola)
2 µl otrzymanej zawiesiny, dokładnie wymieszać
f) inkubować 24 godziny w temperaturze 37°C
g) określić MIC dla każdego szczepu i leku
3. Oznaczanie wrażliwości bakterii na fitoncydy.
Studenci pracują w parach.
a) 0,1 ml zawiesiny przygotowanej do ćwiczenia 1.a) posiać murawą na płytce z
podłożem LA
b) posiekać czosnek i cebulę, wycisnąć z nich sok
c) posługując się pensetą umieścić na płytce krążki bibułowe nasączone sokiem z
czosnku i cebuli
d) płytki inkubować 24 godziny w temperaturze 37°C.
4. Obserwacja mikroskopowa mikroorganizmów z posiewów własnych.
Studenci pracują w parach.
Przygotować preparat mikroskopowy z materiału z posiewów własnych (z tej samej płytki z
której pobierano materiał do ćwiczenia 1. a)) i wybarwić metodą Grama.
Obejrzeć preparat pod mikroskopem. Zidentyfikować jakie mikroorganizmy zostały
wyizolowane (bakterie, grzyby; ziarniaki, pałeczki; G(+), G(-)… ?).
______________________________________________________________________________
Zagadnienia teoretyczne.
Podstawowe pojęcia immunologiczne: odporność nieswoista, odporność swoista czynna/bierna
naturalna/sztuczna, antygen, limfocyty, makrofagi, przeciwciała, budowa przeciwciał, surowica
odpornościowa, odporność humoralna, komórkowa, nabyta…, reakcja serologiczna (precypitacja,
aglutynacja).
Bakterie chorobotwórcze. Egzotoksyna a endotoksyna. Czynniki chorobotwórczości bakterii. Hemoliza, typy
hemolizy.
Chemioterapeutyki. Antybiotyki: spektrum działania, mechanizm działania, podział na grupy, przedstawiciele
grup, mechanizmy odporności na antybiotyki. Sulfonamidy. Oznaczanie lekowrażliwości. Fitoncydy.