QUANTA Flash h-tTG IgG 701108 Reagents

QUANTA Flash® h-tTG IgG
Reagents
701108
Do diagnostyki In Vitro
Przeznaczenie
QUANTA Flash h-tTG IgG jest to test chemiluminescencji (CIA) do półilościowego wykrywania
przeciwciał IgG przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej (h-tTG) w surowicy człowieka. W
połączeniu z wynikami klinicznymi i innymi testami laboratoryjnymi do diagnozowania celiakii —
enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten, szczególnie u pacjentów z selektywnym
niedoborem IgA, wykorzystać można badanie na obecność przeciwciał IgG przeciwko h-tTG.
Podsumowanie i wyjaśnienie testu
Celiakia (ang. Celiac disease, CD) to choroba przewlekła, której główne cechy obejmują stan
zapalny i charakterystyczne „spłaszczenie” błony śluzowej przewodu pokarmowego, którego
skutkiem jest zespół złego wchłaniania znany pod nazwą enteropatii związanej z nadwrażliwością na
gluten. Dokładna etiologia choroby pozostaje nieznana, ale gliadyna — rozpuszczalna w alkoholu
frakcja glutenu pszennego, jest zdecydowanie czynnikiem toksycznym.1, 2
Pierwotnie do diagnozowania celiakii i stosowano serię biopsji jelitowych. Ostatnio zasugerowano
wykonywanie badań serologicznych na obecność przeciwciał przeciwko gliadynie, śródmięsnej i
tTG, jako badań przesiewowych wykonywanych u pacjentów z podejrzeniem enteropatii związanej z
nadwrażliwością na gluten, jak również do monitorowania przestrzegania diety.3–5 Europejskie
Towarzystwo Gastroenterologii Pediatrycznej i Żywienia (European Society of Pediatric
Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN)) w celu zmniejszenia liczby biopsji jelita potrzebnych do
postawienia diagnozy zaleciło stosowanie markerów serologicznych, takich jak przeciwciała
przeciwko gliadynie i śródmięsnej.5
Stwierdzono, że antygenem śródmięsnej jest enzym tTG, odpowiedzialny za powstawanie wiązań
sieciujących między białkami.6 Antygen h-tTG uzyskano w wyniku zastosowania techniki
rekombinacji i w porównaniu z antygenem z wątroby świnki morskiej może wykazywać się pewnymi
zaletami.7, 8
Wiele osób chorujących na celiakię z wystarczającym poziomem IgA nie wytwarza przeciwciał IgG
przeciwko tTG. Większość osób z niedoborem IgA wytwarza takie przeciwciała IgG. Przegląd
literatury wykazał, że 106 ze 108 (98%) pacjentów chorych na celiakię, u których występuje
selektywny niedobór IgA, ma pozytywne wyniki przeciwciał IgG przeciwko tTG.9
Zasady badania
Oczyszczonym rekombinowanym antygenem h-tTG opłaszcza się paramagnetyczne kulki, które
przechowuje się we wkładzie z odczynnikiem w warunkach utrzymujących antygen w jego stanie
reaktywnym. Gdy wkład do testu gotowy jest do pierwszego użycia, do probówki zawierającej
zakonserwowane kulki dodaje się roztwór buforu, a kulki miesza się z buforem. Następnie wkład z
odczynnikiem umieszcza się w urządzeniu BIO-FLASH®.
1
Urządzenie rozcieńcza próbkę surowicy pacjenta w stosunku 1:17 Układ płuczący dodanym do
jednorazowej plastikowej kuwetki. Małe ilości rozcieńczonej próbki surowicy pacjenta, kulki
opłaszczone h-tTG i bufor testowy łączy się w drugiej kuwetce i miesza. Kuwetkę tę inkubuje się w
temperaturze 37°C. Następnie kulki magnetyzuje się i kilkukrotnie płucze. Potem do kuwetki dodaje
się przeciwciało przeciwludzkie IgG skoniugowane z izoluminolem i inkubuje w temperaturze 37°C.
Kulki ponownie magnetyzuje się i kilkakrotnie płucze. Po dodaniu do kuwetki odczynników
(„wyzwalaczy”) koniugat izoluminolu wywołuje luminescencję. Światło wytworzone w wyniku tej
reakcji mierzy się w umownych jednostkach luminescencji (ang. Relative Light Units, RLU) przy
użyciu układu optycznego BIO-FLASH. Ilość jednostek RLU odpowiada ilości związanego koniugatu
izoluminolu, co z kolei odpowiada ilości przeciwciał IgG przeciwko h-tTG związanych z kulkami
opłaszczonymi h-tTG.
W teście QUANTA Flash h-tTG IgG wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii testu,
krzywą wzorcową, którą urządzenie odczytuje z kodu kreskowego znajdującego się na wkładzie z
odczynnikiem. W oparciu o wyniki uzyskane po oznaczeniu dwóch kalibratorów tworzy się właściwą
dla analizatora krzywą roboczą, którą oprogramowanie wykorzystuje do obliczenia liczby jednostek
chemiluminescencji (ang. chemiluminescent units, CU) na podstawie wartości RLU otrzymanej dla
każdej próbki.
Odczynniki
1.
Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash h-tTG IgG zawiera poniższe odczynniki
wystarczające do przeprowadzenia 50 oznaczeń:
a.
kulki paramagnetyczne opłaszczone h-tTG, zakonserwowane przed pierwszym
użyciem.
b.
Bufor testowy — zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS,
Tween 20, stabilizatory białka i konserwanty.
Środek śledzący IgG — przeciwciało przeciwludzkie IgG znakowane izoluminolem,
zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant.
Bufor do odtwarzania, 1 fiolka — barwa różowa, zawiera bufor, stabilizatory białka i
konserwanty.
c.
2.
Ostrzeżenia
1.
Bufor testowy zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%), która według stanu
Kalifornia wywołuje raka.
2.
Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być
toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może
wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją kanalizacyjną, tworząc potencjalnie
wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy
przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku.
3.
Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony
indywidualnej.
4.
Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i
lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów.
Środki ostrożności
1.
Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro.
2.
Tego testu można używać jedynie z analizatorem BIO-FLASH.
3.
Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury odtwarzania.
4.
Nie wolno używać surowicy lipemicznej, żółtaczkowej lub całkowicie zhemolizowanej.
2
5.
Po otwarciu, wkład z odczynnikiem musi być przechowywany w karuzeli na odczynniki tego
urządzenia. Należy uważać, by nie rozlać odczynników w chwili, gdy wkład z odczynnikiem
jest umieszczany w analizatorze po raz pierwszy.
6.
Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym
czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji
chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować
zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia
analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH.
Warunki przechowywania
Nieotwarte wkłady z odczynnikami oraz bufor do odtwarzania przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Nie zamrażać. Odczynniki zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są
przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami.
Otwarte wkłady z odczynnikami należy przechowywać wewnątrz urządzenia. Oprogramowanie
urządzenia BIO-FLASH monitoruje datę przydatności znajdującego się wewnątrz urządzenia wkładu
oraz serii wkładu z odczynnikiem. System nie pozwala na użycie wkładu, którego termin ważności
upłynął.
Pobieranie, przygotowanie i obsługa próbek
Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Nie używać próbek zawierających
widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub poddanych obróbce cieplnej. Nie używać
surowicy lipemicznej, żółtaczkowej lub całkowicie zhemolizowanej. Po pobraniu surowica powinna
zostać oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI H18-A4 zaleca następujące warunki
przechowywania próbek:
1.
Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin.
2.
Jeżeli test nie zostanie zakończony w ciągu 8 godzin, próbki należy przechowywać w
lodówce w temperaturze 2–8°C.
3.
Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki,
należy zamrozić ją w temperaturze -20°C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i
przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane.
Procedura
Dostarczone materiały
1
Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash h-tTG IgG
1
Bufor do odtwarzania
1
Pipeta do przenoszenia
Wymagane materiały niedołączone do zestawu
Analizator BIO-FLASH z obsługującym go komputerem
Układ płuczący BIO-FLASH (nr kat.: 3000-8205)
Wyzwalacze BIO-FLASH (nr kat.: 3000-8204)
Kuwetki BIO-FLASH (nr kat.: 3000-8206)
Kalibratory QUANTA Flash h-tTG IgG (Numer części: 701106)
Kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG (Numer części: 701107)
3
Stosowanie analizatora chemiluminescencyjnego BIO-FLASH
1.
Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i
oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do
systemu BIO-FLASH. Dodatkowe informacje i pomoc związaną z wykrywaniem i usuwaniem
usterek w testach można uzyskać kontaktując się z działem pomocy technicznej firmy
INOVA Diagnostics, Inc. dostępnym pod adresem i numerem telefonu podanym na końcu tej
instrukcji.
2.
W celu opróżnienia zbiornika na odpady stałe należy otworzyć szufladkę na odpady. Wyjąć
zbiornik na odpady stałe i odpowiednio zutylizować zużyte kuwetki. Włożyć z powrotem
zbiornik na odpady stałe, zamknąć szufladkę na odpady i kliknąć Yes w oknie Empty Waste
Drawer.
3.
Aby wymienić wyzwalacze, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na górze po prawej
stronie).
a. Na ekranie Inventory – Bulks kliknąć przycisk Triggers po lewej stronie. Zostanie
wyświetlone nowe okno zatytułowane Add Triggers – Remove old bottles.
b. Należy otworzyć i wyjąć szufladkę na odpady analizatora BIO-FLASH. Zutylizować
wszelkie kuwetki znajdujące się w szufladce na odpady stałe. Kliknąć Yes w oknie
Empty Waste Drawer. Wyjąć butelki z wyzwalaczami z uchwytów i kliknąć przycisk
Next. Odkręcić butelki ze starymi wyzwalaczami i zastąpić je nowymi wyzwalaczami.
Czynności należy wykonywać po kolei i odpowiednio dopasować oznaczone kolorem
zakrętki (biały do białego, czerwony do czerwonego).
c. Przestrzegać instrukcji w nowym oknie Add Triggers – Add Trigger 2 bottle. Po
zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 2 w uchwycie oznaczonym
kolorem białym. Kliknąć Next.
d. Przestrzegać instrukcji w oknie Add Triggers – Add Trigger 1 bottle. Po
zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 1 w uchwycie oznaczonym
kolorem czerwonym. Kliknąć Finish. Włożyć z powrotem i zamknąć szufladkę na
odpady.
4.
Aby wymienić zbiornik układu płuczącego, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na
górze po prawej stronie). Na ekranie Inventory – Bulks kliknąć przycisk Sys. Rinse. W
nowym oknie Add System Rinse – Remove bottles kliknąć Next. Przestrzegać instrukcji w
nowym oknie Add System Rinse – Add bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego,
kliknąć Finish, jeśli będzie to konieczne.
5.
W celu opróżnienia pojemnika na odpady płynne na ekranie Inventory – Bulks kliknąć
przycisk Fluid Waste. Usunąć i zutylizować odpady płynne. Kliknąć Next. Po wymianie
pustej butelki kliknąć Finish.
4
Sposób przygotowania
Przygotowanie wkładu z odczynnikiem
Przy pierwszym użyciu wkładu z odczynnikiem, należy wykonać następujące czynności, aby
dokładnie umieścić wkład w analizatorze BIO-FLASH. Uwaga: Nie używać wkładu z odczynnikiem,
jeśli widoczne są jakiekolwiek ślady uszkodzenia.
1.
Umieścić wkład z odczynnikiem na stałym
podłożu. Przytrzymać wkład z odczynnikiem w
jednej dłoni. Drugą ręką zdecydowanym ruchem
chwycić czerwony pasek zabezpieczający z tyłu
wkładu z odczynnikiem i wyciągnąć go do
końca.
2.
Nacisnąć dwa paski po bokach zatyczki
przebijającej (część szara) i nacisnąć górną
część wkładu z odczynnikiem, aż zatrzaśnie się
we właściwej pozycji zablokowania. Paski nie
powinny być widoczne. NIE ODWRACAĆ
OTWARTEGO WKŁADU.
3.
Odtworzyć mikrocząstki h-tTG:
a.
Otworzyć
fiolkę
z
buforem
do
odtwarzania i pobrać płyn dostarczoną
pipetą. Zostanie użyta cała zawartość
fiolki.
b.
Przesunąć drzwi w pokrywie wkładu z
odczynnikiem do pozycji otwartej,
delikatnie naciskając na wąską stronę
wkładu z odczynnikiem i utrzymywać je
w takiej pozycji. W sposób analityczny
przenieść całą zawartość fiolki do
probówki z odczynnikiem zawierającym
mikrocząstki przez jeden otwór na górze
wkładu z odczynnikiem.
c.
Zmieszać
zawartość
probówki
z
odczynnikiem
zawierającym
mikrocząstki, zasysając i zawieszając
płyn co najmniej 30 razy. Jeśli będą
widoczne grudki mikrocząstek, należy
kontynuować
mieszanie
roztworu
kolejne 30 razy. Jeśli nie uda się
odtworzyć zawiesiny mikrocząstek, NIE
WOLNO UŻYWAĆ WKŁADU.
d.
Przed wyjęciem pipety z probówki i jej
wyrzuceniem należy upewnić się, że
cały płyn został z niej usunięty.
4.
Zdjąć naklejkę z górnej części wkładu z odczynnikiem, odsłaniając trzy otwory.
5.
Umieścić wkład z odczynnikiem w dowolnym wolnym gnieździe karuzeli na odczynniki
urządzenia BIO-FLASH.
Kalibracja badania
5
1.
Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać wykalibrowana przed pierwszym
użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona
skalibrowana.
2.
Dokładne wskazówki, jak kalibrować wkład z odczynnikiem, można znaleźć w części
zatytułowanej QUANTA Flash® h-tTG IgG Calibrators 701106 tej instrukcji.
3.
Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia.
Programowanie i badanie próbek
1.
Nacisnąć przycisk Worklist na górze ekranu i wybrać kartę Racks na dole.
2.
Wybrać statyw z próbkami do badania, zaznaczając nazwę tego statywu na ekranie lub
skanując kod kreskowy za pomocą ręcznego skanera kodów kreskowych. Zeskanować lub
wpisać nazwę próbki, wybrać typ próbki, typ pojemnika (probówka/kubeczek) i wybrać z
panelu testu opcję h_tTG_IgG. Powtórzyć te czynności dla wszystkich próbek.
3.
Umieścić próbki w wybranych pozycjach na statywie na próbki i umieścić go na karuzeli na
próbki analizatora.
4.
Gdy wszystkie wymagane substancje znajdują się w analizatorze, na górze ekranu zostanie
wyświetlona zielona ikona start. Aby rozpocząć badanie, należy nacisnąć ikonę Start F4.
Kontrola jakości
Kontrole testu QUANTA Flash h-tTG IgG (sprzedawane oddzielnie — INOVA, numer produktu
701107) obejmują zarówno kontrolę pozytywną jak i negatywną h-tTG IgG. Szczegółowe wskazówki
dotyczące metody wprowadzania do oprogramowania wszystkich wymaganych informacji dla każdej
kontroli, jak również metody badania kontroli, można znaleźć w instrukcji w części zatytułowanej
QUANTA Flash® h-tTG IgG Controls 701107. Kontrole należy stosować jednokrotnie każdego dnia
używania testu, jednak użytkownicy powinni również wziąć pod uwagę krajowe/lokalne wymagania.
Obliczanie wyników
W firmie INOVA dla każdej nowej serii testu QUANTA Flash h-tTG IgG tworzona jest pięciopunktowa
krzywa wzorcowa. Parametry krzywej są zakodowane w kodzie kreskowym każdego wkładu z
odczynnikiem. W trakcie kalibracji na podstawie krzywej wzorcowej tworzona jest krzywa wzorcowa
dla danego urządzenia. Jest ona wykorzystywana do konwersji wartości RLU na CU. Następnie,
zgodnie z tabelą poniżej, można zaklasyfikować reaktywność przeciwciał IgG przeciw h-tTG.
Reaktywność
CU
Negatywna
<20
Słabo pozytywna
20-30
Pozytywna
>30
Reaktywność w CU jest bezpośrednio związana z mianem autoprzeciwciał w próbce pochodzącej
od pacjenta. Wzrosty i spadki stężeń autoprzeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w
analogicznym wzroście lub spadku CU, która to zmiana jest proporcjonalna do ilości przeciwciał.
Analityczny zakres pomiarowy (AMR) testu (określony przez najniżej i najwyżej położony punkt na
krzywej wzorcowej) to 3,75 CU do 2560,0 CU, co odpowiada liniowemu zakresowi testu. Jeśli
próbka od pacjenta daje wynik większy niż 3,75 CU, wówczas system BIO-FLASH wyświetli go jako
„>3,8 CU”. Ponieważ wartość ta jest mniejsza niż 20 CU, wynik ten uznawany jest za negatywny.
Jeśli próbka od pacjenta daje wynik większy niż 2560,0 CU, wówczas system BIO-FLASH wyświetli
go jako „>2560,0 CU”. Wynik ten uznawany jest za pozytywny. Oprogramowanie BIO-FLASH
udostępnia opcję automatycznego ponownego przeprowadzenia badania. Jeśli wybrano tę opcję,
urządzenie automatycznie wykona ponowną analizę próbki, dla której wynik wynosi >2560,0 CU po
dodatkowym 10-krotnym rozcieńczeniu, dzięki czemu zmierzona wartość będzie odpowiadać AMR.
Ostateczny wynik zostanie obliczony przez oprogramowanie z uwzględnieniem dodatkowego
współczynnika rozcieńczenia. Ponieważ najwyższa zmierzona wartość to 2560,0 CU, najwyższa
wartość, jaką można wyświetlić, to 25,600 CU.
Interpretacja wyników
6
Każde laboratorium powinno zweryfikować dostarczony przez producenta zakres odniesienia i może
ustalić swój zakres prawidłowy na podstawie własnych kontroli i populacji pacjentów, zgodnie z
indywidualnie ustalonymi procedurami.
Zaleca się, aby wyniki dostarczane przez laboratorium zawierały oświadczenie: „Poniższe wyniki
uzyskano przy zastosowaniu immunologicznego testu chemiluminescencji INOVA QUANTA Flash htTG IgG. Nie można stosować zamiennie wartości uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych
innych producentów.”
Ograniczenia badania
1.
Nie u wszystkich pacjentów z celiakią i opryszczkowatym zapaleniem skóry występują
autoprzeciwciała IgG h-tTG. Wyniki tego testu powinny być użyte w powiązaniu z wynikami
badań klinicznych i innych testów serologicznych.
2.
Wyniki tego testu powinny być użyte w powiązaniu z wynikami badań klinicznych i innych
testów serologicznych.
3.
Nieprawidłowe odtworzenie kulek opłaszczonych h-tTG może doprowadzić do uzyskania
niższych wartości niż w przypadku, gdyby kulki odtworzono w sposób prawidłowy.
4.
Charakterystyka wyników tego testu nie została ustanowiona dla macierzy innych niż
surowica.
Spodziewane wartości
Wartości graniczne testu określono, przeprowadzając badanie 446 scharakteryzowanych klinicznie
próbek — próbek krwi z jednego pobrania od pacjentów w sposób jednoznacznie zdiagnozowanych
jako cierpiących jako lub nie cierpiących na celiakię (a nie będących na diecie bezglutenowej). W
tym zestawie szkoleniowym wspomniane próbki — 117 klinicznie pozytywnych i 329 klinicznie
negatywnych — wykorzystano do dopasowania wartości granicznych testu do 20 CU tak, aby
zoptymalizować czułość i swoistość testu odpowiednio do 49,6% i 97,6%.
Porównanie metody z zastosowaniem analizatora
predykatywnego
Próbki do przeprowadzenia analizy porównawczej metody obejmowały próbki z klinicznej walidacji
metody (pacjenci z CD, bez CD i z opryszczkowatym zapaleniem skóry), których wyniki mieściły się
w zgłaszanym zakresie testu. Próbki te badano zarówno przy użyciu testu QUANTA Flash h-tTG IgG
jak i predykatowego testu ELISA.
Zgodność procentowa
(95% ufności)
Zgodność wyników pozytywnych
37
0
37
= 90,2% (76,9–97,3%)
Zgodność wyników negatywnych
4*
70
74
= 100% (94,9–100%)
Zgodność łącznie
41
70
111
= 96,4 (9,1–98,6%)
*U trzech pacjentów test ELISA wykazał wynik niski pozytywny (2 DH i 1 CD). Czwarty pacjent
pochodził z grupy bez CD.
Porównanie metody
(N = 111)
Pozytywna
QUANTA
Flash®
Negatywna
h-tTG IgG
CIA
Łącznie
h-tTG IgG ELISA
Pozytywna Negatywna Łącznie
7
Czułość i swoistość kliniczna
Do klinicznej walidacji metody wykorzystano próbki od 199 zdrowych krwiodawców, 71 — od osób
nie cierpiących na celiakię (kontrole), 68 — stanowiły próbki z warsztatów tTG (18 CD i 50 bez CD
(kontrole)), 23 dodatkowe próbki CD pochodziły z biblioteki surowic firmy INOVA, a 7 próbek
pochodziło od znanych przypadków CD z selektywnym niedoborem IgA. Próbki te badano przy
użyciu zestawu QUANTA Flash h-tTG IgG CIA. Wyniki badania przedstawiono poniżej:
Diagnoza
Czułość i swoistość
(95% ufności)
CD
Bez CD Łącznie
Pozytywna
24
4*
28
Czułość = 50,0% (35,2-64,8%)
QUANTA Flash®
Negatywna
24**
316
340
Swoistość = 98,4% (96,4-99,5%)
h-tTG IgG CIA
Łącznie
48
320
368
*Trzej pacjenci pochodzili z grupy zdrowych krwiodawców, dwaj mieli również pozytywny wynik
testów ELISA tTG IgA i DGP IgG/A. Czwarty pacjent miał wynik pozytywny przeciwciał pylori
IgA H.
**Dwunastu pacjentów miało również wynik negatywny na ELISA tTG IgG, 1 miał wyniki niski
pozytywny, a pozostałych 11 pacjentów nie było przebadanych za pomocą testu ELISA
Kliniczne (N = 368)
Wyniki od 7 pacjentów CD z selektywnym niedoborem IgA są przedstawione w poniższej tabeli.
CD z niedoborem IgA
(N = 7)
Pozytywna
QUANTA Flash®
Negatywna
h-tTG IgG CIA
Łącznie
CD
6
1*
7
Diagnoza
Bez CD
0
0
0
Łącznie
6
1
7
Analiza
(95% ufności)
Czułość 85,7% (42,1–99,6%)
*Ta próbka miała wynik niski pozytywny w teście tTG IgG ELISA.
Precyzja i powtarzalność
Precyzję testu QUANTA Flash h-tTG IgG określono, przeprowadzając badania próbek od 7
pacjentów zgodnie z CLSI EP5-A2; uzyskane dane podsumowano poniżej:
W ramach serii
Próbka
N
Średnia
(CU)
SD
%CV
Pacjent A
Pacjent B
Pacjent C
Pacjent D
Pacjent E
Pacjent F
Pacjent G
88
88
88
88
88
88
88
781,6
46,7
21,0
25,0
34,0
20,6
13,8
26,9
1,7
0,7
0,8
1,1
0,8
0,6
3,4%
3,5%
3,3%
3,3%
3,1%
3,9%
4,1%
Pomiędzy
seriami
SD
21,6
1,5
0,8
1,0
1,8
0,6
0,4
Między
dniami
Łącznie
%CV
SD
%CV
SD
2,8%
3,3%
4,0%
4,1%
5,4%
2,8%
2,8%
44,9
2,7
1,1
1,3
2,0
1,2
0,6
5,7%
5,9%
5,1%
5,3%
5,9%
5,7%
4,2%
56,7
3,5
1,5
1,9
2,9
1,5
0,9
%CV
7,2%
7,6%
7,2%
7,4%
8,6%
7,4%
6,6%
8
Analityczny zakres pomiarowy: Granice i liniowość
Według CLSI EP17-A dolna granica wykrywalności dla tego testu wynosi w przybliżeniu 582 RLU.
Jest to wartość, która znajduje się zdecydowanie poniżej dolnej granicy analitycznego zakresu
pomiarowego (3,8 CU). Cały analityczny zakres pomiarowy, od 3,8 CU do 2560,0 CU, jest liniowy.
Badanie liniowości przeprowadzono zgodnie z CLSI EP6-A, a uzyskane dane podsumowano
poniżej:
Próbka
1
2
3
4
5
6
7
Zakres testu
(CU)
od 8,5 do 286,6
od 10,0 do 191,7
od 54,5 do 1624,8
od 6,2 do 40,3
od 5,1 do 7,8
od 16,0 do 468,0
od 857,0 do 3407,0
Nachylenie
(PU 95%)
1,02 (od 0,97 do 1,07)
1,12 (od 1,02 do 1,22)
1,05 (od 0,99 do 1,10)
1,09 (od 0,97 do 1,22)
1,37 (od 0,70 do 2,05)
1,03 (od 1,00 do 1,07)
1,23 (od 0,98 do 1,48)
Przecięcie z osią Y
(PU 95%)
2,2 (od -5,19 do 9,58)
-2,63 (od -12,05 do 6,80)
-6,40 (od -52,19 do 39,41)
-1,25 (od -4,14 do 1,63)
-2,80 (od -7,08 do 1,49)
-12,70 (-21,90 do -3,50)
-880,6 (od -1418,2 do -280,0)
R²
0,99
0,98
0,99
0,98
0,93
1,00
0,96
9
QUANTA Flash® h-tTG IgG
Calibrators
701106
Do diagnostyki In Vitro
Przeznaczenie
Kalibratory QUANTA Flash h-tTG IgG przeznaczone są do zastosowania z testem
chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash h-tTG IgG w urządzeniu BIO-FLASH. Każdy kalibrator
ustala punkt odniesienia dla krzywej roboczej, którą wykorzystuje się do określenia ilości jednostek
chemiluminescencji (CU) w pomiarach przeciwciał IgG przeciwko h-tTG w surowicy.
Podsumowanie i zasady badania
W teście QUANTA Flash h-tTG IgG CIA wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii
testu, krzywą wzorcową (Master Curve), która zakodowana jest w kodzie kreskowym wkładu z
odczynnikiem. Kalibratory QUANTA Flash h-tTG IgG opracowano w celu uzyskania właściwej dla
urządzenia krzywej roboczej na bazie parametrów krzywej wzorcowej, przy czym punkt decyzji
zależy od charakterystyki wydajności i oceny klinicznej QUANTA Flash h-tTG IgG CIA. Przed oceną
ich wartości kalibratory przebadano na wielu analizatorach z zastosowaniem wielu serii
odczynników.
Odczynniki
1.
2.
Kalibrator 1 QUANTA Flash h-tTG IgG: Dwie (2) probówki oznakowane kodami kreskowymi,
zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory
zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-tTG w buforze, stabilizatory oraz środki
konserwujące.
Kalibrator 2 QUANTA Flash h-tTG IgG: Dwie (2) probówki oznakowane kodami kreskowymi,
zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory
zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-tTG w buforze, stabilizatory oraz środki
konserwujące.
Ostrzeżenia
1.
2.
3.
Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kalibratorów dla tego
produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA
stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciw HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda
testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych
czynników zakaźnych. Z tego też względu kalibratory QUANTA Flash h-tTG IgG należy
użytkować w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny.10
Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony
indywidualnej.
Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i
lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów.
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro.
Kalibratory QUANTA Flash h-tTG IgG przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA
Flash h-tTG IgG.
Nie przenosić kalibratorów do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach
wykorzystywane są przez analizator do dopasowania kalibratorów do odpowiedniego typu
testu.
Po otwarciu probówki z kalibratorem i umieszczeniu jej w urządzeniu można zużyć ją w
10
ciągu 8 godzin. Po tym czasie odczynnik należy wyrzucić.
5.
Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym
czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji
chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować
zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia
analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH.
Warunki przechowywania
1
Nieotwarte kalibratory przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. Odczynniki
zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane
zgodnie z instrukcjami.
2.
Otwarte kalibratory należy wyrzucić po 8 godzinach.
Procedura
1.
Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać wykalibrowana przed pierwszym
użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona
skalibrowana.
2.
Aby upewnić się, że kalibratory są jednorodne, należy każdy z nich wymieszać. Należy
unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu
przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kalibrator i umieścić obie z
nich w statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą być skierowane przodem do
szczelin w statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i
zamknąć drzwiczki. Analizator odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających
kalibratory i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje
dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH
można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH.
3.
Analizator przebada każdy kalibrator w trzech powtórzeniach. Po przebadaniu kalibratorów
oprogramowanie będzie wymagać zatwierdzenia kalibracji. Na ekranie Instrument
Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options – Ctrl-M (). Wybrać opcję
Calibration Ctrl-F3. W oknie Calibration należy zaznaczyć odpowiedni test i kliknąć Details.
4.
W nowym oknie Calibration Details należy wybrać rodzaj właśnie dokonanej kalibracji.
Zostanie wyświetlona krzywa wzorcowa w formie linii przerywanej i nowa krzywa robocza w
formie linii ciągłej. Jeśli wyniki kalibracji są ważne, wówczas na dole ekranu po lewej stronie
zostanie wyświetlony przycisk zatwierdzenia. Należy kliknąć przycisk Validate Calibration.
5.
Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia.
Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG (sprzedawane oddzielnie — numer
produktu 701107) przebadać po uprzednim skalibrowaniu serii wkładu z odczynnikiem.
Identyfikowalność
Obecnie nie istnieje żadna uznana międzynarodowa norma dotycząca pomiarów przeciwciał IgG
przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej.
Ograniczenia
Kalibratory te są przeznaczone do przeprowadzenia 4 kalibracji. Całkowity czas przez jaki probówki
z kalibratorem mogą pozostawać otwarte w analizatorze wynosi 8 godzin. Jeśli kalibratory
pozostaną otwarte w analizatorze przez dłuższy okres, wówczas należy je wyrzucić. Stosowanie
tych samych probówek z kalibratorami przez czas dłuższy niż 8 godzin może skutkować
nieprawidłową kalibracją testu, co z kolei może doprowadzić do uzyskania błędnych wyników.
11
QUANTA Flash® h-tTG IgG
Controls
701107
Do diagnostyki In Vitro
Przeznaczenie
Kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG przeznaczone są kontroli jakości zestawu do testu
chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash h-tTG IgG, który przeprowadza się w urządzeniu BIOFLASH.
Podsumowanie i zasady badania
W skład kontroli testu QUANTA Flash h-tTG IgG wchodzi kontrola negatywna i kontrola pozytywna.
Każda z nich zawiera inną ilość przeciwciał IgG przeciwko h-tTG. Kontrola negatywna i pozytywna
są używane do monitorowania analitycznego działania testu chemiluminescencyjnego QUANTA
Flash h-tTG IgG.
Odczynniki
1.
2.
Kontrola negatywna QUANTA Flash h-tTG IgG: Dwie (2) probówki opisane kodami
kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie
przeciwciała przeciwko h-tTG w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące.
Kontrola pozytywna QUANTA Flash h-tTG IgG: Dwie (2) probówki opisane kodami
kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie
przeciwciała przeciwko h-tTG, stabilizatory oraz środki konserwujące.
Ostrzeżenia
1.
2.
3.
Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kontroli dla tego
produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA
stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciw HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda
testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych
czynników zakaźnych. Z tego też względu kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG należy
użytkować w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny.10
Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony
indywidualnej.
Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i
lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów.
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
5.
Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro.
Kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA
Flash h-tTG IgG.
Nie przenosić kontroli do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach używane są
przez analizator do identyfikacji kontroli.
Po otwarciu każdej probówki z kontrolą można użyć do 15 razy, przy średnim czasie
przebywania w urządzeniu wynoszącym 10 minut na analizę, łącznie do 2½ godziny.
Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym
czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji
chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować
zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia
analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH.
12
Warunki przechowywania
1.
2.
3.
Nieotwarte kontrole przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. Odczynniki
zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane
zgodnie z instrukcjami.
Kontrole są przeznaczone do 15-krotnego użycia przy średnim czasie przebywania w
urządzeniu na analizę wynoszącym 10 minut. Całkowity czas, przez jaki probówki z kontrolą
mogą pozostawać otwarte w analizatorze, wynosi 2½ godziny. Jeśli kontrole pozostaną w
analizatorze otwarte, łącznie dłużej niż 2½ godz., należy je wyrzucić.
Aby zapewnić odpowiednią stabilność, należy usunąć kontrole z systemu natychmiast po
pobraniu próbki i przechowywać je w temperaturze 2–8°C w zamkniętej oryginalnej fiolce.
Procedura
Tworzenie nowego materiału QC dla testu h-tTG IgG:
1.
Przed pierwszym użyciem kontroli QUANTA Flash h-tTG IgG w urządzeniu, do
oprogramowania należy wprowadzić nazwę, serię, datę przydatności do użycia, wartość (lub
dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym.
2.
Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options – Ctrl-M
(). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Kliknąć przycisk New QC Material.
3.
Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii.
W pierwszej kolejności należy wprowadzić do oprogramowania nazwę, numer serii i datę
ważności. Następnie kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję
Show All Assays. Wybrać badanie h-tTG IgG z listy i kliknąć opcję Add. Na końcu należy
wprowadzić docelową dawkę i docelowe odchylenie standardowe (SD). Kliknąć Save.
Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli.
Tworzenie nowej serii dla istniejących materiałów kontroli jakości (KJ):
1.
Przed pierwszym użyciem nowej partii kontroli QUANTA Flash h-tTG IgG do
oprogramowania należy wprowadzić partię, datę przydatności do użycia, wartość (lub
dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym.
2.
Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options – Ctrl-M
(). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Zaznaczyć test h_tTG_IgG w kolumnie po lewej stronie.
Następnie należy zaznaczyć odpowiedni materiał kontrolny po prawej stronie („TTGGN” w
przypadku kontroli negatywnej lub „TTGGP” w przypadku kontroli pozytywnej). Kliknąć
przycisk New QC Lot.
3.
Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii.
Wprowadzić informacje z tego arkusza do oprogramowania. Powinno to obejmować numer
serii, datę przydatności do użycia, docelową dawkę oraz docelowe odchylenie standardowe.
Jeśli to konieczne, kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję
Show All Assays. Wybrać badanie h-tTG IgG z listy i kliknąć opcję Add. Kliknąć Save.
Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli.
Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash h-tTG IgG wykorzystywać jeden raz, każdego dnia kiedy
ma zostać użyty test; jednak użytkownicy powinni także wziąć pod uwagę krajowe/lokalne
wymagania.
Aby upewnić się, że kontrole są homogeniczne, należy każdą z nich wymieszać przed użyciem.
Należy unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu
przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kontrolę i umieścić obie z nich w
statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą być skierowane przodem do szczelin w
statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i zamknąć
drzwiczki. Urządzenie odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kontrole i zidentyfikuje
potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem
chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku
użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH.
13
Identyfikowalność
Obecnie nie istnieje żadna uznana międzynarodowa norma dotycząca pomiarów przeciwciał IgG
przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej.
Ograniczenia
Kontrole te można wykorzystać 15 razy. Na etykiecie każdej probówki z kontrolą znajduje się szereg
15 pól, które można zakreślać, aby oznaczyć, ile razy kontrola została użyta. Całkowity czas, przez
jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w analizatorze, wynosi 2½ godziny. Jeśli kontrole
pozostaną otwarte w urządzeniu przez dłuższy czas, wówczas należy je wyrzucić.
Piśmiennictwo
1.
JS: Celiac Sprue. New England Journal of Medicine 1991, 325:1709-1719.
2.
Strober W: Gluten-sensitive enterophy: A nonallergic immune hypersensitivity of the
gastrointestinal tract. J Allergy Clin. Immunol. 1986, 78: 202-211.
3.
McMillan SA, Haughton DJ, Biggart JD, Edgar JD, Porter KG, McNeill TA: Predictive value
for coeliac disease of antibodies to gliadin, endomysium and jejunum in patients
attending for jejunal biopsy. BMJ 1991, 303: 1163-1165.
4.
Valdimarsson T, Franzen L, Grodzinsky E, Skogh T, Ström M: Is small bowel biopsy
necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti-endomysial
antibodies? 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive
Diseases and Science 1996, 41: 83-87.
5.
Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J,Shmerling DH, Visakorpi JK: Revised criteria for
diagnosis of celiac disease: Report of working group of European Society of Pediatric
Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood 1990, 65: 909911.
6.
Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO, Schuppan D: Identification
of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nature Medicine 1997,
3: 797-801.
7.
Sárdy M, Odenthal U, Kárpáti S, Paulsson M, Smyth N: Recombinant human tissue
transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten-sensitive enteropathy. Clin Chem
1999, 45: 2142-2149.
8.
Sblattero D, Berti I, Trevisiol C, Marzari R, Tommasini A, Bradbury A, Fasano A, Ventura A,
Not T: Human recombinant tissue transglutaminase ELISA : an innovative diagnostic
assay for celiac disease. Am J Gastroenterology 2000, 95: 1253-1257.
9.
Villalta D, Alessio MG, Tampoia M, Tonutti E, Brusca I, Bagnasco M, Pesce G, Bizzaro N:
Diagnostic accuracy of IgA anti-tissue transglutaminase antibody assays in Celiac
disease patients with selective IgA deficiency. Ann NY Acad Sci 2007, 1109: 212-220.
10.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control
and Prevention/National Institutes of Health 2007, Fifth Edition.
14
Zastosowane symbole
Diagnostyczne urządzenie medyczne do zastosowań In Vitro
Przed użyciem należy zapoznać się z instrukcją
Ograniczenia temperaturowe
Nie wykorzystywać ponownie
Zagrożenia biologiczne
Kod partii
Numer katalogowy
Termin przydatności do użycia
Producent
Autoryzowany przedstawiciel
Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia < n > testów
Kontrola pozytywna
Kontrola negatywna
Kalibrator 1
Kalibrator 2
Papierowe pudełko nadaje się do recyklingu
Tą stroną do góry
QUANTA Flash jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics Inc. BIO-FLASH
jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Biokit S.A. © 2013
15
Wyprodukowano przez:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
Stany Zjednoczone
Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745
Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): : 1 858-805-7950
[email protected]
Autoryzowany przedstawiciel na terenie Unii Europejskiej:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Niemcy
Tel.: +49-6894-581020
Faks: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
621105POL
Grudzień 2013 r.
Wersja 2
16