Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 20 Clone Ks

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 20
Clone Ks 20.8
Nr kat. M7019
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 20, Clone Ks 20.8, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Ekspresja cytokeratyny 20 (CK 20) prawie wyłącznie ogranicza się do prawidłowego i
nieprawidłowego nabłonka Ŝołądka i jelit, nabłonka dróg moczowych i komórek Merkela (1, 2), natomiast
przeciwciało jest szczególnie przydatne do klasyfikowania raków pochodzących z wymienionych typów komórek
(1, 3, 4, 5). Identyfikacja róŜnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretacja kliniczna
dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich
prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonim antygenu
Białko IT (6).
Streszczenie
i informacje ogólne
CK 20 naleŜy do białek włókien pośrednich, które tworzą cytoszkielet prawie wszystkich komórek. Wprzeciwieństwie
do innych włókien pośrednich, cytokeratyny (CK) zbudowane są z bardzo złoŜonej rodziny polipeptydów o masie
cząsteczkowej od 40 do 68 kDa, kodowanych przez wiele genów (1, 7). W róŜnych komórkach nabłonka
ludzkiego oraz ich złośliwych odpowiednikach odkryto 20 róŜnych polipeptydów CK (1, 2, 7). MoŜna je podzielić
na podrodzinę kwaśną (typ I) oraz obojętno-zasadową (typ II). CK 20, białko o masie 46 kDa, ma słabiej kwaśny
odczyn niŜ inne cytokeratyny typu I. Obecność CK 20 (5-100% komórek guza zawierających CK-20) stwierdzono
w znacznej większości gruczolakoraków okręŜnicy, śluzowatych guzów jajnika, raków z komórek przejściowych i z
komórek Merkela, a często takŜe w gruczolakorakach Ŝołądka (50%), dróg Ŝółciowych (75%) i trzustki (40%).
Pozytywny wynik uzyskano w mniej niŜ 2% gruczolakoraków sutka i płuc oraz raków płaskokomórkowych,
natomiast w niektórych przypadkach gruczolakoraków jajnika (nieśluzowatych) i błony śluzowej macicy, raka nerki
oraz raka drobnokomórkowego, stwierdzono jedynie nieliczne rozrzucone komórki zawierające CK 20 (1).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne dostarczone w postaci płynnej jako mysia IgG uzyskana z płynu
zgromadzonego w jamie otrzewnej. W 0,05 mol/L Tris/HCL, 15 mmol/L NaN3, 1 % albumina z surowicy bydlęcej,
o pH 7,2.
Klon: Ks 20.8 (1). Izotyp: IgG2a, kappa.
StęŜenie IgG u myszy: zob. informację podaną na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu zapewnienia
jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii produktu, miano
kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen:
CK 20 izolowana metodą SDS-PAGE z materiału cytoszkieletu uzyskanego z błony śluzowej dwunastnicy
człowieka (1).
Swoistość
Przeciwciało Anti-Human CK 20, Clone Ks 20.8, znakuje polipeptyd o masie 46 kDa odpowiadający CK 20
zidentyfikowanej metodą „Western-blot" wśród białek cytoszkieletu wydzielonych z błony śluzowej dwunastnicy
człowieka metodą SDS-PAGE (1).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8°C. Nie uŜywać po dacie waŜności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niŜ warunki podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie
ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie
moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, Ŝe przyczyną moŜe być problem z
przeciwciałem, naleŜy niezwłocznie skontaktować się z działem pomocy technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜna stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą trypsyny (4), proteinazy K lub
(106757-004)
M7019/PL/KRM/2008.09.30. p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
wzbudzanego temperaturą odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki wzbudzanego temperaturą odzyskiwania
epitopu uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S3308, Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S1700, lub 10 mmol/L bufor Tris, 1 mmol/L EDTA, o pH 9,0. Nieco gorsze wyniki
uzyskuje się stosując bufor cytrynianowy 10 mmol/L, o pH 6,0. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki
podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunohistochemicznego.
Skrawki zamroŜone i przygotowanie komórek: Przeciwciała nie wolno stosować do znakowania mroŜonych skrawków
ani rozmazów komórek, poniewaŜ reagują one krzyŜowo z niektórymi nabłonkami nie zawierającymi cytokeratyny 20
(np. kanaliki nerkowe) (1).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 20, nr kat. M7019, moŜna stosować w
rozcieńczeniu w stosunku 1:25-1:50 podczas stosowania na skrawkach ludzkiej okręŜnicy utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie, stosując wzbudzane temperaturą odzyskiwanie epitopu w Dako Target
Retrieval Solution, o wysokim pH nr kat. S3308 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od próbki i metody
przygotowania i powinny być określone przez kaŜde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest
Dako Mouse IgG2a, nr kat. X0943, rozcieńczona do takiego samego stęŜenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało.
Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej
procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczyć w
rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Kontrolę dodatnią i ujemną naleŜy wykonać jednocześnie z
testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu Dako LSAB™+/HRP, nr kat. K0679 oraz zestawów Dako
EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 oraz K4006. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego
zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
CK 20 moŜe niekiedy ulegać ekspresji w gruczolakorakach sutka i płuc oraz w rakach płaskokomórkowych (1,
3). W wielu tkankach zwykle nie wykazujących obecności CK 20 moŜna stwierdzić do 5% komórek zawierających
CK 20 (1).
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje zwykle nabłonek dróg moczowych (1, 4) oraz dojrzały nabłonek wyściełający
kosmki błony śluzowej dwunastnicy (1). Immunoreaktywnej CK 20 nie wykryto w wielu przebadanych tkankach
nienabłonkowych takich jak mięśniówka gładka, ściana naczyń krwionośnych, węzły chłonne i zrąb guzów (1).
Tkanki patologiczne: W gruczolakorakach okręŜnicy, przeciwciałem wyznakowano 26 z 27 guzów (96%). W
przypadku 21 (78%) guzów wybarwieniu uległo ponad 50% komórek (3). Spośród 51 pacjentów z brodawczakami
nabłonka przejściowego pęcherza moczowego, u 10 wykazano znakowanie przeciwciałem powierzchniowych
komórek nabłonka przejściowego (prawidłowe znakowanie). U Ŝadnego z tych pacjentów w czasie dalszej obserwacji
nie stwierdzono nowych guzów. W przeciwieństwie do poprzedniej grupy, u 30 pacjentów (73%), u których wykazano
ekspresję CK 20 we wszystkich warstwach komórek (nieprawidłowe znakowanie) rozwinęły się kolejne guzy.
Przeciwciałem wyznakowano 3 z 4 przerzutowych guzów Ŝołądka (5).
Ogniskowe barwienie immunochemiczne po wyznakowaniu przeciwciałem (mniej niŜ 10% komórek z dodatnim
odczynem) obserwowano w przypadku 9 z 65 guzów płuca, 1 z 20 guzów sutka oraz 2 z 11 guzów błony śluzowej
macicy. W 1 z 19 raków jasnokomórkowych nerki stwierdzono pozytywny odczyn w 10-50% komórek (3). Natomiast
nie wyznakowano przeciwciałem Ŝadnego z 10 pierwotnych raków jajnika ani Ŝadnego z 5 międzybłoniaków (5).
Piśmiennictwo
1. Moll R, Löwe A, Laufer J, Franke WW. Cytokeratin 20 in human carcinomas. A new histodiagnostic marker
detected by monoclonal antibodies. Am J Pathol 1992;140:427-47.
2. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Herrmann, Harris,
editors. Subcellular biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62.
3. Savera AT, Torres FX, Linden MD, Bacchi CE, Gown AM, Zarbo RJ. Primary versus metastatic pulmonary
adenocarcinoma. An immunohistochemical study using villin and cytokeratins 7 and 20. Appl
Immunohistochem 1996;4:86-94.
4. Harnden P, Mahmood N, Southgate J. Expression of cytokeratin 20 redefines urothelial papillomas of the
bladder. Lancet 1999; 353:974-77.
5. Wauters CCAP, Smedts F, Gerrits LGM, Bosman FT, Ramaekers FCS. Keratins 7 and 20 as diagnostic
markers of carcinomas metastatic to the ovary. Hum Pathol 1995;26:852-55.
6. Moll R, Schiller DL, Franke WW. Identification of protein IT of the intestinal cytoskeleton as a novel type I
cytokeratin with unusual properties and expression patterns. J Cell Biol 1990;111:567-80.
7. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24.
Objaśnienie sym boli
(106757-004)
N umer k atalogowy
Zakres t emperat ur
U rz ądzenie medyc zne do
diagnost yki in vitro
Nr serii
Przed uŜyciem z apoznać się z
i ns truk cjami
Termi n waŜ nośc i
Produc ent
M7019/PL/KRM/2008.09.30. p. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17