Nr kat. IR082

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD5
Klon 4C7
Gotowy do uŜycia
(Link)
Nr kat. IR082
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Odczynnik FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon 4C7, gotowy do uŜycia (Link), jest przeznaczony do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer Link. Przeciwciała znakują komórki CD5dodatnie i mogą być przydatne w identyfikacji nowotworów złośliwych z komórek typu B i T, w tym przewlekłej
białaczki limfocytowej z komórek B (B-CLL), chłoniaka limfocytarnego z małych limfocytów B (B-SLL), chłoniaka z
komórek płaszcza (MCL) oraz chłoniaka i białaczki T-komórkowej (1-4). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub
braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób
kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii
klinicznej pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy
Leu-1, Ly-1, Tp67 (3,5)
Streszczenie i
informacje ogólne
CD5 jest jednołańcuchową glikoproteiną przezbłonową o masie 67 kDa. NaleŜy do rodziny receptorów
odpadkowych o duŜej zawartości cysteiny (SRCR), struktur przypominających domeny pozakomórkowe
biorących udział w transdukcji sygnałów (6). Wśród komórek prawidłowych CD5 wykazuje słabą ekspresję w
większości prekursorów komórek T, które są CD34-dodatnie, a bardziej intensywną w dojrzałych limfocytach T.
Ponadto CD5 wykazuje słabą ekspresję w podzbiorze prawidłowych komórek B (3). W tkankach nowotworowych
antygen CD5 jest wykrywany w zaburzeniach proliferacji limfocytów B, w tym w chłoniaku z komórek płaszcza
(MCL) i chłoniaku limfocytarnym z małych limfocytów B/przewlekłej białaczce limfocytowej B (SLL/CLL) (1-4).
Inne chłoniaki z limfocytów B, takie jak chłoniak strefy brzeŜnej, pęcherzykowaty, rozlany wielkokomórkowy i
limfoblastyczny, nie wykazują wcale ekspresji CD5 lub tylko nieznaczną (1-4). Antygen CD5 jest takŜe
wykrywany w większości nowotworów złośliwych T-komórkowych, w tym w 85% ostrych białaczek
limfoblastycznych T-komórkowych (ALL) (2,3). Stwierdzono, Ŝe przeciwciała na antygen CD5 są przydatne w
diagnostyce i klasyfikacji zmian nowotworowych B- i T-komórkowych (1-4,7).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Procedura barwienia, 6) Kontrola jakości, 7)
Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: 4C7(4).
Izotyp: IgG1, kappa
Immunogen
Rekombinowane prokariotyczne białko fuzyjne odpowiadające zewnętrznej domenie ludzkiej cząsteczki CD5.
Swoistość
Ludzka cząsteczka CD5, 67 kDa.
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
(121283-001)
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P01465PL_001_IR082/2011.04 str. 1/3
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) przy uŜyciu aparatu Dako
PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link.
Optymalne wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek poprzez 20-minutową inkubację w odczynniku
EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004/K8023) w temperaturze 97°C, a
następnie 5-minutowe zanurzenie w buforze EnVision™ FLEX Wash Buffer (nr kat. K8007).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie
skrawków tkankowych zalecana jest procedura przygotowania preparatu „3 w 1” w aparacie Dako PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision
FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004/K8023). Uwaga: Po zakończeniu
wykonywania odczynu skrawki tkankowe naleŜy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i osadzić za pomocą
środka do trwałego osadzania preparatu.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000/K8023). W systemie
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość aplikacji
odczynnika wynosi 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na jeden preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania
szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli
protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Program instalacyjny słuŜący do uzupełniania oprogramowania DakoLink w aparacie
Autostainer Link o dane protokołu i odczynnika Anti-CD5, klon 4C7 moŜna znaleźć pod adresem
www.dako.com/Installer. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze
pokojowej.
Optymalne warunki mogą się róŜnić w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z
róŜnym nasileniem odczynu preparatów, moŜna zmodyfikować czas inkubacji i wybór systemu
EnVision FLEX Visualization System. NaleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy
Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w
części „Charakterystyka działania”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą odczynnika EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego środka do trwałego zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów zaleca się wykonywanie dodatnich i ujemnych
prób kontrolnych z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka działania”. Zalecany odczynnik do kontroli ujemnej to
FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: W przypadku tkanek prawidłowych przeciwciała barwią błonę, a czasami cytoplazmę
limfocytów obecnych w rozmaitych typach tkanek prawidłowych, takich jak komórki T warstwy przykorowej i
rozsiane komórki ośrodków rozmnaŜania w migdałku (4). Przeciwciała znakują takŜe komórki nabłonka róŜnych
tkanek, w tym komórki nabłonka sutka i gruczołów apokrynowych oraz głęboko ulokowanych gruczołów
ekrynowych w skórze (8-10).
Tkanki patologiczne: W zaburzeniach proliferacji drobnokomórkowych limfocytów B przeciwciało znakowało
większość komórek chłoniaków limfocytarnych drobnokomórkowych/białaczek i chłoniaków z komórek płaszcza
(1,2,4,7,11). Nie stwierdzono odczynu w przypadku większości pozostałych chłoniaków nieziarniczych
wywodzących się z komórek B — w tym chłoniaków strefy brzeŜnej, chłoniaków z grudek chłonnych, chłoniaków
rozlanych wielkokomórkowych, chłoniaków drobnokomórkowych nieszczelinowatych i chłoniaków
limfoblastycznych (1,2,4,7). Przeciwciała znakowały komórki chłoniaka limfoblastycznego nieziarniczego z
komórek T, chłoniaka anaplastycznego wielkokomórkowego i chłoniaka nieziarniczego osobno niewymienionego
(2). Odczyn dawał takŜe szereg nowotworów niehemopoetycznych, takich jak rak sutka (54/86), rak przewodów
Ŝółciowych (12/14), rak okręŜnicy (5/10), rak płuc (2/21), rak trzustki (6/13), rak gruczołu krokowego (4/18) i rak
grasicy (7/7) (9,10,12).
(121283-001)
P01465PL_001_IR082/2011.04 str. 2/3
Piśmiennictwo
1.
Diaz de Leon E, Alkan S, Huang JC, Hsi ED. Usefulness of an immunohistochemical panel in paraffinembedded tissues for the differentiation of B-cell non-Hodgkin’s lymphomas of small lymphocytes. Mod
Pathol 1998;11:1046-51.
2.
Dorfman DM, Shahsafaei A. Usefulness of a new CD5 antibody for the diagnosis of Tcell and B-cell lymphoproliferative disorders in paraffin sections. Mod Pathol 1997;10:859-63.
3.
Arber DA, Weiss LM. CD5 a review. Appl Immunohistochem 1995;3:1-22.
4.
Watson P, Wood KM, Lodge A, McIntosh GG, Milton I, Piggott NH, et al. Monoclonal antibodies recognizing
CD5, CD10 and CD23 in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue: production and assessment of their
value in the diagnosis of small B-cell lymphoma. Histopath 2000;36:145-50.
5.
Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L, Simarro M. TC6 CD5 workshop panel report. In: Kishimoto T,
Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI.
White cell differentiation antigens. Proceedings of the Sixth international workshop and conference; 1996
Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1112-3.
6.
Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L, Simarro M. TC6 CD5 workshop panel report. In:
Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors.
Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the Sixth international workshop and
conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 56-8.
7.
Kaufmann O, Flath B, Spath-Schwalbe E, Possinger K, Dietel M. Immunohistochemical detection of CD5
with monoclonal antibody 4C7 on paraffin sections. Am J Clin Pathol 1997; 108:669-73.
8.
Bogner PN, Su LD, Fullen DR. Cluster designation 5 staining of normal and non-lymphoid neoplastic skin. J
Cutan Pathol 2005;32:50-4.
9.
Tateyama H, Eimoto T, Tada T, Hattori H, Murase T, Takino H. Immunoreactivity of a new CD5 antibody with
normal epithelium and malignant tumors including thymic carcinoma. Am J Clin Pathol 1999;111:235-40.
10.
Walsh R, Peston D, Shousha S. Comparison of immunoperoxidase staining of 3 different types of CD5
antibodies in a spectrum of breast lesions. Arch Pathol Lab Med 2001;125:781-4.
11.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: a
comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal
antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
12.
Chu PG, Arber DA, Weiss LM. Expression of T/NK-cell and plasma cell antigens in nonhematopoietic
epithelioid neoplasms. In immunohistochemical study of 447 cases. Am J Clin Pathol 2003;120:64-70.
Wydanie 05/11
(121283-001)
P01465PL_001_IR082/2011.04 str. 3/3