Monoclonal Mouse Anti-Human CD68/FITC Clone KP1
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human CD68/FITC Clone KP1
Monoclonal Mouse Anti-Human CD68/FITC Clone KP1 Numer katalogowy F 7135 Wydanie 01.01.03 Przeznaczenie Do diagnostyki in vitro. F 7135 jest przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-CD68, Clone KP1, jest przeciwciałem przeciwko antygenowi związanemu z monocytami/makrofagami i może być używane, razem z panelem innych przeciwciał, do odróżniania komórek pochodzenia limfoidalnego i monocytarno/makrofagowego (1, 2). Interpretacji wyników może dokonywać wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne. Synonimy antygenu Macrosialin, gp110 (8). Wprowadzenie CD68 to wysoce glikozylowane lizosomalne białko błonowe o masie 110 kDa. Białko CD68 należy do rodziny lizosomalnych glikoprotein plazmatyczno-błonowych, które bierze udział w endocytozie i/lub kierowaniu do lizosomów (3, 7). W odróżnieniu od wielu innych antygenów CD na leukocytach, cząsteczka CD68 jest antygenowo bardzo heterogenna, a różne przeciwciała przeciwko CD68 wykazują różną reaktywność z komórkami (4). CD68 ulega silnej ekspresji w ziarnistościach cytoplazmy, a słabo na powierzchni makrofagów, monocytów, neutrofili, bazofili I komórek NK (3). CD68 mozna także znaleźć w komórkach nowotworowych o pochodzeniu mieloidalnym. Ponadto CD68 ulega ekspresji na około 40% limfocytów B krwi obwodowej i słabo na 50% komórek ostrej białaczki limfoblastycznej wywodzącej się z komórek B (3). CD68 można też wykryć w cytoplazmie komórek nie hematopoetycznych, szczególnie wątroby, miedniczek i kłębuszków nerek (3). Odczynnik dostarczony Przeciwciało Anti-CD68, F 7135, zostało wyprodukowane z oczyszczonych monoklonalnych przeciwciał mysich. Koniugat jest dostarczany w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej). Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L:Zobacz etykietka na fiolce. Przeciwciało, nr katalogowy F 7135 Fluorochrom Kontrola negatywna, nr katalogowy FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1) X 0927 Immunogen Lizosomalna frakcja ludzkich makrofagów z płuc (6). Swoistość Anti-CD68, KP1, zostało oznaczone jako anti-CD68 na czwartym International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens, który odbył się w Wiedniu w 1989 roku (7). Anti-CD68, KP1, znakuje cytoplazmę w typie M1-M5 AML, dając silne barwienie ziarnistości (1, 4). Komórki tuczne, zarówno normalne, jak i patologiczne, a także 1/1 przypadek prawdziwego nowotworu wywodzącego się z histiocytów, też barwiły się przeciwciałem (2, 5). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. Przechowywanie Staining procedure (108480-002) Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako. 1. Przenieść 50 L (max. 106 komórek) zawiesiny komórek, która ma być analizowana (pełna krew, szpik kostny lub komórki jednojądrzaste) do każdej probówki. 2. Dodać 100 L Dako IntraStain, Reagent A (Fixation), numer katalogowy K 2311. Zamieszać delikatnie na mieszadle, aby zawiesić komórki. 3. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut. 4. Dodać 2 mL PBS i zamieszać na mieszadle. 5. Odwirować przy 300 x g przez 5 minut, potem odciągnąć i odrzucić supernatant, zostawiając około 50 L płynu. F 7135/PL/KKR/01.01.03 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 6. Zmieszać dokładnie na mieszadle, aby zawiesić komórki i dodać 100 L Dako IntraStain, Reagent B (Permeabilisation), numer katalogowy K 2311. Dodać 10 L F 7135. Zamieszać delikatnie na mieszadle, aby zawiesić komórki. 7. Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i sprzęgniętego z tym samym fluorochromem jako kontroli ujemnej (patrz tabela). 8. Inkubować w ciemnościach, w temperaturze pokojowej, przez 15 minut. 9. Powtórzyć kroki 4 i 5. 10. Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS, o pH 7,4. 11. Zanalizować na cytometrze przepływowym. Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika i przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki sprzęgnięte z fluorochromami są wrażliwe na światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy. Literatura 1. Horny H-P, Wehrmann M, Steinke B, Kaiserling E. Assessment of the value of immunohistochemistry in the subtyping of acute leukemia on routinely processed bone marrow biopsy specimens with particular reference to macrophage-associated antibodies. Hum Pathol 1994;25:810-4. 2. Warnke RA, Pulford KAF, Pallesen G, Ralfkiaer E, Brown DC, Gatter KC, et al. Diagnosis of myelomonocytic and macrophage neoplasms in routinely processed tissue biopsies with monoclonal antibody KP1. Am J Pathol 1989;135:1089-95. 3. Goyert SM. MC12. CD68 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc; 1997. p. 1015-6. 4. Falini B, Flenghi L, Pileri S, Gambacorta M, Bigerna B, Durkop H, et al. PG-M1: a new monoclonal antibody directed against a fixative-resistant epitope on the macrophage-restricted form of the CD68 molecule. Am J Pathol 1993;142:1359-72. 5. Horny H-P, Schaumburg-Lever G, Bolz S, Geerts ML, Kaiserling E. Use of monoclonal antibody KP1 for identifying normal and neoplastic human mast cells. J Clin Pathol 1990;43:719-22. 6. Pulford KAF, Rigney EM, Micklem KJ, Jones M, Stross WP, Gatter KC, et al. KP1: a new monoclonal antibody that detects a monocyte/macrophage associated antigen in routinely processed tissue sections. J Clin Pathol 1989;42:414-21. 7. Micklem K, Cordell J, Rigney E, Simmons D, Pulford K, Stross P, et al. M13.1. A macrophage-associated antigen defined by five mAB. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 843-6. 8. Goyert SM. CD Guide. CD68. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1166. Objaśnienia symboli (108480-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed światłem (sprawdź w rozdz. przechowywanie) Producent Sprawdź w instrukcji stosowania Numer serii F 7135/PL/KKR/01.01.03 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17