FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II Klon QBEnd 10
Transkrypt
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II Klon QBEnd 10
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II Klon QBEnd 10 Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS632 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II, klon QBEnd 10, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/ Autostainer Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji nowotworów pochodzenia naczyniowego i limfatycznego oraz klasyfikacji białaczek (1–3). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne CD34 jest jednołańcuchowym białkiem przezbłonowym o masie ok. 116 kDa. Ekspresja białka CD34 występuje w niedojrzałych komórkach krwiotwórczych macierzystych/progenitorach, komórkach śródbłonka naczyń włosowatych, fibroblastach embrionalnych i niektórych komórkach glejowych w tkance nerwowej (4, 5). NajwyŜszy poziom ekspresji CD34 obserwuje się w najwcześniejszych progenitorach, a ekspresja słabnie stopniowo w miarę dojrzewania komórek (6, 7). CD34 jest antygenem róŜnicującym leukocyty, swoistym dla etapu a nie szlaku róŜnicowania w kierunku określonej linii komórkowej. Najmniej dojrzałe definiowalne prekursory linii komórek B tkanki chłonnej (CD19+/CD10+/TdT+) to CD34+ (5-7). Niedojrzałe prekursory linii komórek T tkanki chłonnej takŜe wykazują ekspresję TdT i CD34 (5). Prawidłowe limfocyty izolowane z krwi obwodowej, monocyty, granulocyty i płytki krwi nie wykazują ekspresji białka CD34. Ekspresja CD34 zachodzi w około 60 % ostrych białaczek limfoidalnych limfocytów B, 40 % ostrych białaczek szpikowych i w 1 % do 5 % ostrych białaczek limfoidalnych limfocytów T (7). Stwierdzono, Ŝe chroniczne białaczki limfoidalne, chłoniaki i szpiczaki mnogie nie wykazują ekspresji CD34 (4–7). Przeciwciała monoklonalne przeciwko CD34 zalicza się do trzech głównych klas: klasa I, klasa II i klasa III, określonych na podstawie czułości epitopów CD34 na rozkład przez określone enzymy. Przeciwciała QBEnd 10 są zaliczane do przeciwciał monoklonalnych II klasy, które rozpoznają epitop CD34 oporny na trawienie neuraminidazą, a wraŜliwy na trawienie glukoproteazą i chymopapainą (4, 7, 8). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: QBEnd 10. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Nabłonkowe błony komórkowe uzyskane jako pęcherzyki z ludzkiego łoŜyska (6, 8). Swoistość Przeciwciała anty-CD34, QBEnd 10, opisano podczas warsztatów Fourth and Fifth International Workshops and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (4. i 5. międzynarodowe warsztaty i konferencje na temat antygenów róŜnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD34 (6, 8) i epitopem klasy II (8) została potwierdzona przez róŜne laboratoria. Na skrawkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie migdałków przeciwciała znakują komórki śródbłonka. Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. (116922-002) Dako Denmark A/S IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8010). Oprogramowanie aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus zawiera wstępnie zaprogramowane etapy odczynu i czas barwienia, które są aktywne podczas korzystania z następujących protokołów: Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL) Autoprogram: CD34 (bez barwienia kontrastowego) lub CD34H (z barwieniem kontrastowym) Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer” w programach barwienia ≤10 szkiełek. Przy programach z więcej niŜ 10 szkiełkami, etap „auxiliary” naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750). Interpretacja odczynu Przeciwciała dają odczyn błonowy. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje naczynia włosowate większości tkanek oraz tętnicę pępkową, w mniejszym zakresie, Ŝyłę. Brak odczynu w nabłonku większości duŜych naczyń i nabłonku zatok łoŜyska (8). Tkanki nieprawidłowe: Wszystkie 112 przypadków nowotworów pochodzenia naczyniowego, 54 raków róŜnych rodzajów i 45 przypadków guzów wrzecionowatokomórkowych pochodzenia innego niŜ naczyniowe wykazywały odczyn dodatni z przeciwciałem anty-CD34, klon QBEnd-10 (2). We wszystkich (22/22) przypadkach łagodnych guzy pochodzenia naczyniowego stwierdzono immunoreaktywność. Tylko 5/8 przypadków naczyniaka chłonnego wykazało słaby odczyn ogniskowy z QBEnd-10 (2). Komórki guzów w obszarach mięsaków naczyniowych i obszarach litych wykazały immunoreaktywność względem QBEnd-10 w odpowiednio 17/23 i 13/24 przypadkach (2). W dzielących się naczyniach i większości komórek wrzecionowatych w mięsakach Kaposiego zaobserwowano odczyn dodatni we wszystkich 40 przypadkach. Tylko w 1/54 przypadków raków stwierdzono reakcję w świetle przewodów z QBend-10. Odczyn dodatni zaobserwowano w 17/45 przypadków guzów wrzecionowatokomórkowych (2). (116922-002) Dako Denmark A/S IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, Devaux Y, Treille D, Larese A, et al. Surface marker expression in adult acute myeloid leukaemia: correlations with initial characteristics, morphology and response to therapy. Br J Haematol 1989;72:161-6. 2. Ramani P,Bradley NJ, Fletcher CDM. QBEND/10, a new monoclonal antibody to endothelium: assesment of its diagnostic utility in paraffin sections. Histopathology 1990;17:237-242. 3. Fina L, Molgaard HV, Robertson D, Bradley NJ, Monaghan P, Delia D, et al. Expression of the CD34 gene in vascular endothelial cells. Blood 1990;75(12):2417-2426. 4. Nishio H, Tada J, Hashiyama M, Hirn J, Ingles-Esteve J, Suda T. MC7. CD34 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 974–76. 5. Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility (review). Blood 1996;87:1-13. 6. Civin CI, Trischmann TM, Fackler MJ, Bernstein ID, Bühring HJ, Campos L, et al. M7.1. Report on the CD34 cluster workshop. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 818–25. 7. Civin CI, Strauss LC, Fackler MJ, Trischmann TM, Wiley JM, Loken MR. Positive stem cell selection - basic science. Prog Clin Biol Res 1990;333:387-402. 8. Dercksen MW, Daams GM, de Haas M, von dem Borne AEG, van der Schoot CE. M10.2 Characterization of the CD34 cluster. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 850–3. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (116922-002) Dako Denmark A/S IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17