PAS Staining Kit
Transkrypt
PAS Staining Kit
Materiały i odczynniki potrzebne, ale niedostarczane PAS Staining Kit 1. 2. 3. 4. 860-014 05279291001 75 PRZEZNACZENIE Zestaw PAS Staining Kit jest przeznaczony do wykonywania barwień histologicznych o charakterze jakościowym w celu wykazania obecności glikogenu w tkankach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Zestaw PAS Staining Kit daje dodatni wynik barwienia włókien retikulinowych, błony podstawnej, grzybów i obojętnych mukopolisacharydów.1 Zestaw PAS Staining Kit można pomocniczo stosować do odróżnienia gruczolakoraka wykazującego dodatni odczyn PAS od niezróżnicowanego raka płaskonabłonkowego o ujemnym odczynie PAS.2 Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi. Ten produkt jest przeznaczony do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). STRESZCZENIE I WYJAŚNIENIA W zestawie PAS Staining Kit do utleniania glikoli do aldehydów stosowany jest odczynnik Periodic Acid.3 Odczynnik Schiff’s Reagent tworzy bezbarwny związek dialdehydowy ulegający przekształceniu do barwnika elementów komórek zawierających glikol. Barwienie PAS w skrawkach tkanki i trawienie przy użyciu odczynnika Diastase (860-004/05279208001) są pomocne w diagnozowaniu glikogenozy.1 ZASADA POSTĘPOWANIA Ten zestaw jest zoptymalizowany pod kątem użycia w automatach do barwienia preparatów BenchMark Special Stains oraz NexES Special Stains firmy VENTANA. Odczynniki nanoszone są na tkankę umieszczoną na szkiełku mikroskopowym i mieszane na całej powierzchni próbki. Reakcja barwna polega na utlenianiu glikolu do aldehydu, po czym następuje selektywne barwienie grup aldehydowych przy użyciu odczynnika Schiff’s Reagent. MATERIAŁY I METODY Dostarczane odczynniki Fiolki z odczynnikami są dostarczane w uchwytach opatrzonych etykietami z kodem kreskowym, przeznaczonych do umieszczenia w koszykach na odczynniki w aparacie do barwienia. Każdy zestaw zawiera odczynniki wystarczające do wykonania 75 testów: Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Periodic Acid zawiera kwas nadjodowy o stężeniu poniżej 1%. Trzy fiolki (22 ml) odczynnika Schiff’s Reagent zawierają 4% wodorosiarczynu sodu, 2% rozcieńczonego kwasu solnego i 1% chlorku pararozaniliny. Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Neutralizer zawiera wodorosiarczyn sodu o stężeniu poniżej 1%. Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Hematoxylin Counterstain zawiera modyfikowaną hematoksylinę Mayera. 6 wkładek do fiolek ze słomkami do zasysania. Odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie, miareczkowanie Nie jest wymagane odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie ani miareczkowanie odczynników z zestawu. Dalsze rozcieńczanie odczynników może skutkować niedostateczną jakością barwienia. W razie zmian któregokolwiek z parametrów konieczna jest walidacja przez użytkownika. Odczynniki zawarte w tym zestawie rozcieńczono optymalnie do użytku z automatami do barwienia preparatów BenchMark Special Stains i NexES Special Stains. Odczynniki te mogą okazać się nieodpowiednie do barwienia ręcznego lub barwienia w innych urządzeniach. 2017-01-18 FT0700-440j 1/3 Tkanka kontrolna Szkiełka mikroskopowe (naładowane dodatnio) Suszarka umożliwiająca utrzymanie temperatury 70°C ± 5°C Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains lub NexES Special Stains 5. Odczynniki w opakowaniach zbiorczych przeznaczone do użytku z automatem do barwienia preparatów BenchMark Special Stains: • BenchMark Special Stains Deparaffinization Solution (10X), • BenchMark Special Stains Liquid Coverslip, • BenchMark Special Stains Wash Solution (10X). 6. Odczynniki w opakowaniach zbiorczych przeznaczone do użytku z automatem do barwienia preparatów NexES Special Stains: • Liquid Coverslip (Low Temperature), • Special Stains Wash (10X). 7. Ksylen lub inny odczynnik do prześwietlania (klasy histologicznej) 8. Alkohol do odczynników lub etanol (klasy histologicznej) 9. Woda dejonizowana lub destylowana 10. Syntetyczny środek do zatapiania 11. Szkiełko nakrywkowe Przechowywanie i sposób postępowania Zestaw PAS Staining Kit należy przechowywać w temperaturze 2–8°C. Informacje o prawidłowych warunkach przechowywania podano na etykiecie fiolki. Schłodzone składniki zestawu należy przed użyciem doprowadzić do temperatury pokojowej. Za każdym razem używać tylko jednej fiolki odczynnika Schiff’s Reagent. Uwaga: Odczynnik Schiff’s Reagent pozostaje stabilny przez miesiąc po otwarciu. Firma Ventana zaleca, aby na fiolce umieścić etykietę z datą pierwszego otwarcia. Szczelnie zamknięty, nieotwarty odczynnik Schiff’s Reagent pozostaje stabilny do daty ważności wydrukowanej na etykiecie fiolki. Zestaw zawiera dwie dodatkowe buteleczki z odczynnikiem Schiff’s Reagent pozwalające na wykorzystanie zestawu w pełni. Odczynnik Schiff’s Reagent może zawierać osad w postaci igiełek. Osad ten, obecny w spodziewanych ilościach, nie powinien wpływać na działanie testu. Prawidłowo przechowywane odczynniki pozostają stabilne do daty ważności wydrukowanej na etykiecie fiolki. Nie istnieją widoczne objawy wskazujące na utratę stabilności odczynników; dlatego równocześnie z badaniem właściwych próbek należy wykonywać barwienia kontrolne. Słabe wybarwienie materiału kontroli dodatniej może świadczyć o niestabilności odczynnika. W takim wypadku należy niezwłocznie skontaktować się z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej. Pobieranie próbek i przygotowanie ich do analizy Firma Ventana zaleca, aby pobieranie i przechowywanie próbek odbywało się zgodnie z dokumentem CLSI o symbolu M29-T2.4 Zalecanym utrwalaczem do tkanek jest 10% roztwór obojętnej zbuforowanej formaliny.3 1. Pociąć na skrawki, zwykle o grubości od 3 do 5 µm, i umieścić je na szkiełkach. 2. Wysuszyć preparaty w automacie do barwienia preparatów BenchMark Special Stains lub poza nim za pomocą innej metody. • W przypadku suszenia preparatów w automacie do barwienia preparatów BenchMark Special Stains przejść do etapu 3. • Poza automatem szkiełka suszyć co najmniej 30 minut w temperaturze około 70ºC. Odczekać, aż ostygną. 3. Wydrukować odpowiednie etykiety z kodami kreskowymi. 4. Przed odparafinowaniem umieścić na matowym końcu każdego szkiełka odpowiednie etykiety z kodem kreskowym (informacje nt. prawidłowego umieszczania etykiet zawiera Instrukcja obsługi automatu do barwienia preparatów). 5. Zalecany protokół barwienia za pomocą automatów do barwienia preparatów BenchMark Special Stains oraz NexES Special Stains znajduje się w części „Instrukcja stosowania”. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego. 15114PL Rev G 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Informacje na temat zalecanej metody utylizacji należy uzyskać od odpowiednich instytucji lokalnych lub krajowych. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Podczas pracy z próbkami i ich usuwania należy stosować standardowe środki ostrożności w postępowaniu z materiałami potencjalnie zakaźnymi. Należy unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Skażenie takie może być przyczyną błędnych wyników. Odczynniki te mogą powodować podrażnienia. Unikać kontaktu z oczami i błonami śluzowymi. Jeśli dojdzie do kontaktu odczynnika z tymi obszarami, należy obficie przepłukać je wodą. Nie należy połykać ani wdychać żadnego z odczynników. Odczynnik Schiff’s Reagent jest toksyczny, może powodować oparzenia i może mieć działanie rakotwórcze. Odczynnik Hematoxylin Counterstain jest szkodliwy dla zdrowia w przypadku połknięcia oraz działa drażniąco na oczy. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zagrożeniach na stronie www.ventana.com. INSTRUKCJA STOSOWANIA Przygotowanie fiolki z odczynnikiem Przed pierwszym użyciem w fiolce z odczynnikiem należy umieścić wkładkę i słomkę do zasysania. 1. Zdjąć korek transportowy z fiolki i włożyć do fiolki wkładkę i słomkę. Wkładkę i słomkę należy pozostawić w otwartej fiolce. 2. Gdy dany odczynnik jest używany, należy włożyć miękką nakrywkę do odpowiedniego otworu w uchwycie na odczynniki. 3. Gdy odczynnik nie jest używany, należy przykryć fiolkę miękką nakrywką. Procedura barwienia Tabela 2. Zalecany protokół barwienia za pomocą zestawu PAS (procedura PAS Flex) z użyciem automatu do barwienia preparatów NexES Special Stains. Opcje Temperatura 37°C lub 60°C Odczynnik Alcian Blue Diastaza Hematoksylina Jasnozielony Czas Schiff's dla 60°C 4 do 8 minut Czas diastazy 4 do 32 minut Intensywność barwienia hematoksyliną Jasne lub ciemne Protokół wstępnego programowania Protokoły dla temp. 37°C Numer protokołu rozpoczyna się sekwencją 3XX Protokoły dla temp. 60°C Numer protokołu rozpoczyna się sekwencją 6XX i 7XX Zalecana obróbka po wyjęciu z automatu 1. 2. Dwukrotnie przepłukać szkiełka 95% alkoholem, aby usunąć roztwór szkiełka nakrywkowego. Odwodnić, oczyścić i zakryć środkiem do trwałego zatapiania. PROCEDURY KONTROLI JAKOŚCI W charakterze materiału kontroli dodatniej można użyć na przykład utrwalonej w formalinie i zatopionej w parafinie tkanki ludzkiej znanej z wysokiej zawartości glikogenu, na przykład tkanki nerki, jelita cienkiego, wątroby, skóry lub aorty.3 Tkanki kontrolne powinny być próbkami świeżo pobranymi w ramach autopsji, biopsji lub zabiegu chirurgicznego i przygotowanymi lub utrwalonymi jak najszybciej w sposób identyczny jak 3. skrawki badane. Tkanki takie powinny być równolegle poddawane wszystkim etapom Zalecany protokół barwienia analizy, od przygotowania do barwienia. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane W przypadku użycia dołączonego zestawu PAS Staining Kit, glikogen ma odczyn zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu. jaskrawo różowy (magenta), a jądra komórek – jasnopurpurowy. Opisane poniżej procedury mogą być stosowane do skrawków o różnej grubości Na szkiełkach barwionych przy użyciu zestawu PAS Staining Kit zaobserwowano i rozmiarze oraz mogą być dostosowane do preferencji użytkownika. Wskazane jest różowoczerwony osad w postaci kryształów sześciennych. Przy oczekiwanych stężeniach próbne wykonanie barwienia przy użyciu poszczególnych protokołów w celu dostosowania obecność tego osadu nie powinna zakłócać przydatności diagnostycznej testu. barwienia do preferencji użytkownika. Zastosowanie skrawków tkankowych utrwalonych lub obrabianych w inny sposób niż Wybranie opcji wyszczególnionych w Tabeli 1 protokołu umożliwia włączenie funkcji preparaty badane, zapewnia kontrolę działania wszystkich odczynników i kroków odparafinowania i suszenia w automacie BenchMark Special Stains. procedury z wyjątkiem utrwalania i obróbki tkanek. Składniki komórkowe innych Tabela 1. Zalecany protokół barwienia za pomocą zestawu PAS Staining Kit z użyciem elementów tkanek mogą pełnić rolę kontroli ujemnej. automatu do barwienia preparatów BenchMark Special Stains. Tkanka kontrolna musi być testowana w każdym cyklu barwienia. Krok protokołu Metoda Zestaw PAS Staining Kit jest fabrycznie testowany w celu wykazania, że obojętne polisacharydy, glikogen, grzyby i błona podstawna mają odczyn jaskrawo różowy Odparafinowanie Wybór opcji odparafinowania pozwala (magenta) na purpurowym lub zielonym tle. automatyczne usunąć parafinę. Znane dodatnie kontrole tkankowe powinny być stosowane wyłącznie w celu monitorowania jakości badanych tkanek i odczynników testowych, a nie pomocniczo do Suszenie Aby włączyć suszenie, należy wybrać formułowania swoistych rozpoznań próbek pochodzących od pacjentów. temperaturę i czas inkubacji. Jeżeli nie udaje się potwierdzić dodatniego wybarwienia w preparatach dodatnich kontroli tkankowych, należy uznać, że wyniki uzyskane dla preparatów testowych są nieważne. Optymalizacja odczynnika Wybrać temperaturę od 37°C do 60°C, Jeżeli w kontrolach ujemnych uzyskuje się wynik dodatni, należy uznać, że wyniki Schiffa dla PAS (PAS wartość domyślna to 37°C przez 20 minut. uzyskane dla preparatów tkanek pacjentów są nieważne. Schiff’s) Wybrać czas inkubacji od 12 do 20 minut. Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do Intensywność barwienia będzie różna lokalnego przedstawiciela pomocy technicznej. Jeśli wyniki kontroli jakości nie są zgodne w zależności od czasu i temperatury. ze specyfikacją, wyniki uzyskane dla próbek pochodzących od pacjentów są nieważne. Należy zidentyfikować i wyeliminować przyczynę, a następnie ponownie zbadać preparaty Czas inkubacji Wybrać czas inkubacji z barwnikiem z próbek pochodzących od pacjentów. z hematoksyliną (PAS Hematoxylin counterstain od 4 do 12 minut; Hematoxylin) wartość domyślna to 8 minut. 1. 2. Załadować odczynniki i szkiełka do aparatu. Przeprowadzić cykl barwienia zgodnie z zalecanym protokołem barwienia (zobacz Tabela 1 lub Tabela 2) i niniejszą instrukcją obsługi. Po zakończeniu cyklu należy wyjąć szkiełka z aparatu. 2017-01-18 FT0700-440j 2/3 15114PL Rev G OGRANICZENIA PIŚMIENNICTWO Ograniczenia ogólne 1. 1. 2. 3. Wykonywanie odczynów histologicznych jest wieloetapowym procesem diagnostycznym wymagającym specjalistycznego przeszkolenia w doborze odpowiednich odczynników, wyborze tkanek, ich utrwalaniu i obróbce, przygotowaniu preparatów i interpretacji wyników barwienia. Wybarwienie tkanek zależy od traktowania i przygotowania tkanek przed barwieniem. Różnice w sposobie obróbki preparatów tkankowych i procedurach technicznych mogą być przyczyną znacznego zróżnicowania wyników, dlatego wymagane jest regularne wykonywanie barwień kontrolnych (zobacz część „Procedury kontroli jakości”). Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie, przemywanie, suszenie, ogrzewanie, wykonywanie skrawków lub ich zanieczyszczenie domieszką innych tkanek lub płynów może powodować artefakty lub wyniki fałszywie ujemne. Interpretację kliniczną dodatniego lub ujemnego wyniku trzeba prowadzić w kontekście historii klinicznej, morfologii i innych kryteriów histopatologicznych. Odpowiedzialność za zapoznanie się ze specjalnym barwnikiem oraz metodami przygotowania preparatu spoczywa na wykwalifikowanym patologu. Barwienie należy wykonać w akredytowanej pracowni histopatologicznej, pod nadzorem histopatologa odpowiedzialnego za przeglądanie i ocenę wybarwionych preparatów oraz właściwe wykonanie dodatnich i ujemnych prób kontrolnych. CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains 1. 2. 3. Powtarzalność między automatami: 100 preparatów tkanki wątroby wybarwiono za pomocą 5 różnych automatów do barwienia preparatów BenchMark Special Stains i zestawu PAS Staining Kit. Wybarwienie preparatów oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów. Powtarzalność między cyklami barwienia: 100 preparatów tkanki wątroby wybarwiano za pomocą 5 automatów do barwienia preparatów BenchMark Special Stains i zestawu PAS Staining Kit przez 5 nienastępujących po sobie dni. Wybarwienie preparatów oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów. Przetestowano zgodność zestawu PAS Staining Kit z innymi wybranymi odczynnikami do barwienia. Nie odnotowano żadnych szkodliwych interakcji chemicznych. 2. 3. 4. Thompson SW. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield; CC Thomas; 1966. Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology. 2nd edition. St. Louis, MO: C.V. Mosby Company; 1980. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CLSI Web site. http://www.clsi.org/. Accessed November 3, 2011. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, NexES, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi grupy Roche. Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli. © 2017 Ventana Medical Systems, Inc. DANE KONTAKTOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany Automat do barwienia preparatów NexES Special Stains 1. 2. Powtarzalność w obrębie partii określono na szkiełkach wybarwionych przy użyciu PAS Staining Kit do 3 różnych bloczków tkanki nerek i 5 bloczków tkanki wątroby (z dodatnią zawartością glikogenu) przygotowanych w postaci 100 preparatów. Oceniono wydajność wybarwienia preparatów (ogólne pokrycie i jakość wybarwienia), przydatność diagnostyczną (możliwość stwierdzenia stanu choroby na podstawie wybarwienia), tło i wybarwienie kontrastowe wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki pokazały, że w przypadku 100/100 preparatów uzyskano wydajność zgodną z kryteriami. Powtarzalność między seriami wyników uzyskanych przy użyciu zestawu PAS Staining Kit określono na podstawie barwień 20 preparatów w serii w 5 automatach (po 1 serii w każdym z automatów). Oceniono wydajność wybarwienia preparatów, przydatność diagnostyczną, tło i wybarwienie kontrastowe wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów. ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW 1. 2. 3. Grubość wycinka może wpływać na jakość i intensywność barwienia. W przypadku nieprawidłowego wybarwienia preparatów należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej. W tkankach martwiczych lub autolizowanych może występować nieswoisty odczyn barwny. Jeśli kontrola dodatnia nie daje prawidłowego wybarwienia, należy sprawdzić, czy preparat jest opatrzony właściwym kodem kreskowym i prawidłowo wprowadzony do aparatu. Jeśli kod kreskowy jest poprawny, ale brak jest wybarwienia lub wybarwienie jest nieprawidłowe, należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej. 2017-01-18 FT0700-440j 3/3 15114PL Rev G